豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)試紙條對(duì)比試驗(yàn)

王紅娜

（河南省寶豐縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南寶豐 467400）

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染性和快速遠(yuǎn)距離傳播的動(dòng)物疫病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的傳染病，我國(guó)將其列為一類(lèi)傳染病[1,2]。該病具有傳播速度快、感染致病性強(qiáng)、潛伏期短等特點(diǎn)，對(duì)畜牧業(yè)危害極大。2020年韓國(guó)、日本相繼發(fā)生豬、牛、羊口蹄疫，經(jīng)濟(jì)損失達(dá)20億美元，致使兩國(guó)畜產(chǎn)品無(wú)法進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)。2001年英國(guó)暴發(fā)O型口蹄疫時(shí)，共撲殺動(dòng)物592萬(wàn)頭，造成直接經(jīng)濟(jì)損失27億英鎊，間接損失達(dá)200億英鎊，相當(dāng)于英國(guó)國(guó)內(nèi)生產(chǎn)總值（GDP）的2.5%[3]。

根據(jù)我國(guó)國(guó)情，目前疫苗免疫是最主要的也是最經(jīng)濟(jì)的手段[4]，每年國(guó)家投入大量的人力、財(cái)力和物力用于疫苗的采購(gòu)和實(shí)施強(qiáng)制免疫[5]，因此疫苗的免疫效果直接影響著口蹄疫的防控結(jié)果[6,7]。目前，盡管養(yǎng)殖者都高度重視口蹄疫的防疫，然而許多豬場(chǎng)的免疫效果并不理想，免疫豬只時(shí)有發(fā)病[8,9]。因此，快速簡(jiǎn)單地評(píng)價(jià)疫苗免疫狀況至關(guān)重要。本試驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)比評(píng)估4種豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)試紙條的敏感性及特異性，并對(duì)比豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒的檢測(cè)結(jié)果，為基層獸醫(yī)和養(yǎng)殖戶開(kāi)展疫苗免疫效果評(píng)估提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)試紙條

4種豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)試紙條分別以A、B、C、D代表（見(jiàn)表1）。

表1 4種豬口蹄疫O型檢測(cè)試紙條及規(guī)格

1.2 血清樣品

4份已知陽(yáng)性血清樣品和陰性血清樣品分別來(lái)源于口蹄疫病毒O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒及口蹄疫病毒A型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照血清和陰性對(duì)照血清作為相關(guān)及非相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)血清；20份豬場(chǎng)免疫血清來(lái)源于河南省平頂山市某規(guī)模化豬場(chǎng)，免疫豬口蹄疫O型合成肽疫苗28 d后采血制備血清。

1.3 抗體檢測(cè)試劑盒

豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒購(gòu)自鄭州某生物技術(shù)有限公司，規(guī)格為96 T×2。

1.4 敏感性試驗(yàn)

將口蹄疫O型已知陽(yáng)性血清樣品用0.02 mol/L pH值7.2 PBS緩沖液分別作1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024共9個(gè)稀釋度，然后按照4種試紙條的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)與結(jié)果判定。

1.5 特異性試驗(yàn)

將4份已知陽(yáng)性血清樣品和陰性血清樣品按照4種試紙條的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)與結(jié)果判定。

1.6 試紙條與試劑盒對(duì)比試驗(yàn)

將4種試紙條對(duì)20份豬場(chǎng)免疫血清進(jìn)行檢測(cè)與結(jié)果判定，同時(shí)用豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒對(duì)20份豬場(chǎng)免疫血清進(jìn)行檢測(cè)，并與試紙條檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 敏感性試驗(yàn)

檢測(cè)結(jié)果顯示，A試紙條的檢測(cè)極限為1∶256稀釋的樣品，B試紙條的檢測(cè)極限為1∶128稀釋的樣品，而其他2種試紙條的檢測(cè)極限均較低，詳見(jiàn)表2。

表2 各試紙條敏感性試驗(yàn)結(jié)果

2.2 特異性試驗(yàn)

檢測(cè)結(jié)果顯示，A和D試紙條的特異性較好，而其他2種試紙條的特異性均較差，已知陰性血清樣品檢測(cè)出假陽(yáng)性結(jié)果，詳見(jiàn)表3。

表3 各試紙條特異性試驗(yàn)結(jié)果

2.3 試紙條與試劑盒對(duì)比試驗(yàn)

20份豬場(chǎng)免疫血清檢測(cè)結(jié)果顯示，豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒的檢測(cè)合格率為100%，A～D試紙條的檢測(cè)合格率分別為90%、65%、55%、40%，詳見(jiàn)表4。

表4 各試紙條與試劑盒對(duì)比檢測(cè)結(jié)果

3 討論

當(dāng)前國(guó)內(nèi)外采用口蹄疫疫苗免疫抗體檢測(cè)方法主要是液相阻斷ELISA。該方法雖然具有特異、敏感等特點(diǎn)，但操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且需特定的儀器設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員，很難在基層普及推廣[10]。由于試紙條具有操作方便、快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的推廣應(yīng)用前景和價(jià)值。除上述口蹄疫抗體檢測(cè)試紙條外，還有針對(duì)口蹄疫合成胎疫苗的檢測(cè)試紙條，同時(shí)，隨著口蹄疫疫苗的不斷研發(fā)和創(chuàng)新，新的檢測(cè)口蹄疫抗體的試紙條也將應(yīng)運(yùn)而生[11]。梁素聯(lián)等[12]比較了口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒與其改進(jìn)試劑盒的靈敏性，為豬口蹄疫抗體的精準(zhǔn)檢測(cè)提供參考。

把試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)整，經(jīng)對(duì)照各種試紙條監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)基本符合測(cè)試敏感性要求，證明基本試劑的原理是符合設(shè)計(jì)的。其中各試紙條監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)共同顯示結(jié)果，樣本編號(hào)為14、19、8、13號(hào)的結(jié)果應(yīng)判為異常，可能與試驗(yàn)操作有關(guān)。其余結(jié)果分析，B試紙條監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)最不穩(wěn)定，應(yīng)該屬于實(shí)際設(shè)計(jì)本身問(wèn)題；D試紙條顯示數(shù)據(jù)基本符合設(shè)計(jì)規(guī)律，更接近于試驗(yàn)預(yù)期，取值誤差應(yīng)該在臨界值選取上偏高，表現(xiàn)靈敏度偏低。而A試紙條設(shè)計(jì)臨界值就較為合理，接近本試驗(yàn)選取的液相阻斷ELISA臨界標(biāo)準(zhǔn)。

試驗(yàn)通過(guò)對(duì)4種豬口蹄疫O型抗體檢測(cè)試紙條的敏感性、特異性方面進(jìn)行評(píng)估，對(duì)比檢測(cè)結(jié)果顯示，僅有A試紙條的敏感性和特異性較好，且與試劑盒抗體檢測(cè)結(jié)果的符合率高達(dá)90%，更適合用于基層獸醫(yī)和養(yǎng)殖戶進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)評(píng)估。而其他3種試紙條的敏感性和特異性較差，與試劑盒抗體檢測(cè)結(jié)果的符合率較低（40%～65%），且存在已知陰性血清檢測(cè)出假陽(yáng)性結(jié)果，這將影響臨床血清樣品的檢測(cè)評(píng)估，檢測(cè)性能還有待進(jìn)一步優(yōu)化提升。

但結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用，A試紙條可以選為評(píng)定免疫效果應(yīng)用；而D試紙條更適于大群生產(chǎn)檢測(cè)應(yīng)用，以稍微偏高的抗體表現(xiàn)來(lái)判斷是否應(yīng)補(bǔ)免，有利于超前保護(hù)動(dòng)物抗病力。

4 結(jié)論

本研究中，4種抗體檢測(cè)試紙條的特異性較穩(wěn)定，但敏感性存在差異，因此，尚有較大發(fā)展空間。但其方便、快速的優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)踐中依然有極大的應(yīng)用價(jià)值。