兒童齲病唾液氧化應(yīng)激和免疫指標(biāo)與齲病嚴(yán)重程度的相關(guān)性

李瀟瀟，李芝香，董寧，孔玉,肖剛

齲病是多因素導(dǎo)致的牙體硬組織慢性感染性口腔疾病，發(fā)病率高，治療率低，嚴(yán)重危害患兒口腔和全身健康[1]。唾液中含有大量有機(jī)和無機(jī)成分，以及保護(hù)宿主所需的因子，是齲病診斷、預(yù)防、病情評(píng)估的潛在生物標(biāo)志物[2]。氧化應(yīng)激在兒童齲病發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，齲病患者牙面可出現(xiàn)氧化還原負(fù)電位，導(dǎo)致齲變組織內(nèi)超氧化物陰離子自由基含量增加，其唾液中可檢測(cè)到氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡[3-4]。免疫反應(yīng)是齲病發(fā)病的主要因素，口腔致病微生物感染可激活免疫細(xì)胞并分泌促炎因子，導(dǎo)致局部組織炎性浸潤和牙體組織破壞、缺損，唾液中體液免疫水平與齲病發(fā)生密切相關(guān)[5-6]。鑒于此，本研究擬檢測(cè)齲病兒童唾液中氧化應(yīng)激和細(xì)胞免疫指標(biāo)，分析其與齲病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，旨在為臨床診治提供參考，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年3月—2021年3月西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院兒童口腔科收治齲病患兒107例(齲病組)，男59例，女48例，年齡3～9(6.76±2.02)歲；患齲牙數(shù)1～8(4.86±1.21)顆。另選擇同期于醫(yī)院兒童保健門診體檢的健康兒童83例為健康對(duì)照組，男50例，女33例，年齡3～10(6.71±2.05)歲。均排除口腔疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、自身免疫疾病、過敏性疾病等。2組患兒性別和年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)獲得西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批號(hào)：pz201903051)，受試者家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①齲病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)[7]；②年齡3～9歲。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①牙髓炎、根尖周炎、牙周病、口腔潰瘍；②上呼吸道感染、肺炎、哮喘、過敏性疾??；③血液系統(tǒng)疾病、免疫疾??；④近6個(gè)月使用含氟制劑；⑤近1個(gè)月服用激素、免疫抑制劑者。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 唾液標(biāo)本采集：入組當(dāng)日早餐后1 h采集唾液標(biāo)本，采集前清水漱口，棄去第一口唾液后將唾液6 ml吐至無菌培養(yǎng)皿中，再移至 EP 管，多用途高速離心機(jī)離心(JIDI-20D臺(tái)式，廣州吉迪儀器有限公司)，取上清液待測(cè)。

1.3.2 唾液氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)：取上清液50 μl，采用 PBS 緩沖液將其稀釋成 10 倍后上機(jī)檢測(cè)，當(dāng)日未檢測(cè)樣本保存于液氮罐。以JC-1086A酶標(biāo)分析儀(山東聚創(chuàng)華業(yè)儀器公司)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)唾液丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(TAC)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)水平，試劑盒購自美國賽默飛公司。

1.3.3 唾液細(xì)胞免疫指標(biāo)檢測(cè)：取上清液50 μl，以免疫透射比濁法檢測(cè)唾液中分泌性免疫球蛋白A (sIgA)、免疫球蛋白G(IgG)、IgA、IgM，試劑盒購自美國Epitope Diagnostics公司。

1.4 齲病嚴(yán)重程度評(píng)價(jià) 采用乳牙齲、失、補(bǔ)牙面數(shù)(decayed-missing-filled teeth，dmft)評(píng)估齲病嚴(yán)重程度，dmft是指9歲以下兒童因齲缺、失、補(bǔ)的乳牙總和，并排除生理性脫落乳牙。根據(jù)dmft將患者分為低齲亞組(0～4，42例)、高齲亞組(≥5，65例)[8]。

2 結(jié) 果

2.1 各組唾液中氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 齲病組唾液中MDA水平低于健康對(duì)照組(P<0.05)，TAC、SOD、CAT水平高于健康對(duì)照組(P<0.05)；高齲亞組唾液中MDA水平低于低齲亞組(P<0.05)，TAC、SOD、CAT水平高于低齲亞組(P<0.05)，見表1。

表1 2組及2亞組唾液中氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

2.2 各組唾液中細(xì)胞免疫指標(biāo)比較 齲病組唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM水平高于健康對(duì)照組(P<0.05)；高齲亞組唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM水平高于低齲亞組(P<0.05)，見表2。

表2 2組及2亞組唾液中細(xì)胞免疫指標(biāo)比較

2.3 相關(guān)指標(biāo)與dmft相關(guān)性分析 建立多重線性回歸方程，以dmft為因變量，MDA、TAC、CAT、SOD、sIgA、IgG、IgA、IgM為自變量，回歸分析結(jié)果顯示，MDA與dmft呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，TAC、CAT、SOD、sIgA、IgG、IgA、IgM與dmft呈正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 影響dmft的多重線性回歸方程

2.4 唾液氧化應(yīng)激和免疫指標(biāo)鑒別齲病嚴(yán)重程度的價(jià)值 以兒童齲病嚴(yán)重程度為狀態(tài)變量(賦值：0=低齲亞組，1=高齲亞組)，以MDA、TAC、CAT、SOD、sIgA、IgG、IgA、IgM為檢測(cè)變量，繪制受試者工作特征曲線(ROC)，其中MDA、TAC、sIgA具備鑒別齲病嚴(yán)重程度的價(jià)值(P<0.05)，其曲線下面積(AUC)分別為0.713、0.744、0.730，三者聯(lián)合鑒別兒童齲病嚴(yán)重程度的AUC為0.911，高于單獨(dú)指標(biāo)(Z=3.750、3.581、3.580,P均=0.000)，見表4、圖1。

表4 唾液氧化應(yīng)激和免疫指標(biāo)鑒別兒童齲病嚴(yán)重程度的價(jià)值

圖1 唾液氧化應(yīng)激和免疫指標(biāo)鑒別兒童齲病嚴(yán)重程度的ROC圖

3 討 論

唾液是一種包含蛋白質(zhì)、糖蛋白、電解質(zhì)、有機(jī)小分子的異質(zhì)液體，充當(dāng)清潔溶液、離子儲(chǔ)存器、潤滑劑和緩沖劑的角色，在口腔穩(wěn)態(tài)和健康維持中發(fā)揮重要作用。唾液氧化應(yīng)激在口腔炎性反應(yīng)和齲病的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用[9]。唾液被認(rèn)為是抵御自由基介導(dǎo)的氧化應(yīng)激的第一道防線，含有多種抗氧化劑，抗氧化劑是存在于人體組織和生物液體中的各種酶或非酶化合物，可防止氧化反應(yīng)產(chǎn)生的氧化劑或相關(guān)的潛在并發(fā)癥[10]。口腔感染時(shí)活性氧和自由基自多形核中性粒細(xì)胞釋放，抑制口腔細(xì)菌生長，同時(shí)抗氧化系統(tǒng)也被激活，避免過度氧化應(yīng)激反應(yīng)和氧化損傷，通過檢測(cè)唾液中抗氧化指標(biāo)水平可預(yù)測(cè)口腔疾病的發(fā)生[11]?，F(xiàn)有報(bào)道顯示，大約70%的牙周病患者唾液抗氧化水平較低，牙周炎患者唾液中氧化應(yīng)激指數(shù)、總氧化狀態(tài)水平增高，TAC水平降低[12-13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，齲病患者唾液氧化/抗氧化狀態(tài)與其他口腔疾病不同，齲病兒童唾液中氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡，抗氧化水平增加，氧化應(yīng)激水平下降。Pani[14]報(bào)道也顯示，齲病兒童唾液中TAC水平增加，高于無齲病兒童。分析原因?yàn)辇x病兒童唾液中抗氧化指標(biāo)增高可能是氧化應(yīng)激下的一種代償機(jī)制，以抑制氧化應(yīng)激，減少牙組織氧化損傷。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，高齲亞組唾液中MDA水平低于低齲亞組，TAC、CAT、SOD水平高于低齲亞組，唾液中MDA水平與dmft呈負(fù)相關(guān)，TAC、CAT、SOD與dmft呈正相關(guān)，說明齲病進(jìn)展可能導(dǎo)致更高的抗氧化水平，抗氧化水平與齲病進(jìn)展有關(guān)。Jurczak等[15]報(bào)道也指出，發(fā)生空洞的齲病兒童唾液中抗氧化指標(biāo)還原型/氧化型谷胱甘肽含量比值水平高于無空洞的齲病兒童和無齲兒童，唾液抗氧化水平與齲病進(jìn)展有關(guān)。Araujo等[16]指出，總蛋白、TAC、SOD酶促抗氧化活性和尿酸非酶促抗氧化活性隨著齲齒嚴(yán)重程度的增加而增加，以減少唾液氧化損傷。

現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，口腔局部免疫功能障礙與齲病的發(fā)生也存在密切關(guān)系[17]，本研究結(jié)果也顯示，齲病組唾液中sIgA、IgG、IgA和 IgM水平高于健康對(duì)照組，且高齲亞組高于低齲亞組。正常人唾液中含豐富免疫球蛋白，包括sIgA、IgG、IgA和IgM等，可控制致齲口腔微生物群落的生長[18]。其中sIgA是口腔特定的局部獲得性防御機(jī)制，可有效抑制細(xì)菌黏附，中和病毒細(xì)菌使細(xì)菌酶和毒素失活，預(yù)防齲齒形成[19]。IgA、IgG、IgM參與體液免疫，在補(bǔ)體激活的次級(jí)反應(yīng)中起到重要作用。IgM 是抗原刺激后最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，IgG、IgM作為抗體激活物質(zhì)參與補(bǔ)體經(jīng)典途徑激活[20]。由此可見，齲病兒童口腔局部免疫功能發(fā)生明顯的變化，受齲齒感染影響，口腔體液免疫系統(tǒng)處于激活狀態(tài)。

本研究多重線性回歸分析結(jié)果顯示，sIgA、IgG、IgA、IgM水平與dmft呈正相關(guān)。Gornowicz等[21]研究結(jié)果同樣顯示，齲病青少年唾液sIgA水平增高，恒牙齲失補(bǔ)牙面數(shù)>11的患者唾液sIgA水平高于恒牙齲失補(bǔ)牙面數(shù)=3的患者，說明唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM水平增高與齲病的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，齲齒活動(dòng)性增強(qiáng)可誘導(dǎo)sIgA水平升高，發(fā)揮殺菌或抑菌作用，清除口腔致病菌，sIgA可防止變形鏈球菌黏附在牙齒表面形成葡聚糖，進(jìn)而抑制牙體硬組織的脫礦過程，在齲病發(fā)病過程中發(fā)揮保護(hù)作用，sIgA分泌量與齲患程度呈正相關(guān)[22-23]。ROC分析結(jié)果顯示，唾液中MDA、TAC、sIgA具備鑒別齲病嚴(yán)重程度的價(jià)值，AUC值分別為0.713、0.744、0.730，聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)后鑒別齲病嚴(yán)重程度的效能明顯提高，說明檢測(cè)唾液氧化應(yīng)激和免疫指標(biāo)對(duì)兒童齲病病情評(píng)估具有重要意義。

綜上，兒童齲病唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM、TAC、CAT、SOD水平升高，MDA水平降低，且與齲病嚴(yán)重程度相關(guān)。檢測(cè)唾液中氧化指標(biāo)、抗氧化指標(biāo)、免疫指標(biāo)水平有助于評(píng)估齲病風(fēng)險(xiǎn)和病情嚴(yán)重程度。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

李瀟瀟：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過程，論文撰寫；李芝香:提出研究思路，課題設(shè)計(jì)；董寧：項(xiàng)目指導(dǎo),分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；孔玉：資料搜集整理，論文修改；肖剛：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析