益生菌對妊娠晚期陰道B族鏈球菌定植、血清炎性因子及妊娠結局的影響

汪靜，施后淵，劉婭，唐琳，葉濤

B族鏈球菌(group B streptococcus，GBS)又稱無乳鏈球菌，是一種β-溶血性革蘭陽性細菌，在孕婦陰道或直腸中的定植率為10%～30%， 妊娠晚期GBS感染率為7.51%～37.30%。GBS作為一種潛在的致病病原體，可導致陰道微生態紊亂，并可垂直傳播給經陰道分娩的新生兒，導致新生兒敗血癥、肺炎和腦膜炎[1-3]。分娩時使用抗生素是降低GBS相關新生兒敗血癥風險的方法，但是并不能預防GBS母嬰傳播。體外研究顯示，乳酸桿菌細胞壁的非蛋白質成分具有抗GBS活性，乳酸菌代謝產生的酸性環境可有效抑制GBS菌落生長[4]?？诜a充含有乳酸桿菌菌株的益生菌可降低孕婦陰道和直腸GBS定植率[5]，但是益生菌對GBS定量值、血清炎性因子和妊娠結局的影響尚不清楚，鑒于此，本研究擬對妊娠晚期GBS感染孕婦進行口服含乳酸桿菌益生菌干預，探討其臨床效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2018年1月—2021年1月西南醫科大學附屬中醫醫院婦產科診治的妊娠晚期GBS感染孕婦103例，按隨機數字表法分為觀察組(52例)和對照組(51例)。2組年齡、妊娠周期、孕產史、文化程度、體質量指數比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究獲得醫院倫理委員會批準(20180612)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

表1 對照組及觀察組患者臨床資料比較 [例

1.2 病例選擇標準[6](1)納入標準：①單活胎妊娠；②妊娠35～37周采集陰道下1/3處陰道分泌物標本，實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)法檢查提示GBS感染。(2)排除標準：①妊娠期合并高血壓、甲亢、先天性心臟病等合并癥；②異位妊娠、胎盤早剝、前置胎盤；③雙胎或多胎妊娠，院外分娩者；④既往GBS感染病史；⑤入組前胎膜已破，妊娠期間抗生素藥物應用史；⑥合并其他病原菌嚴重感染。

1.3 治療方法 2組孕婦均指導定期產檢，補充葉酸和維生素，合理搭配膳食，避免劇烈運動和過度勞累，注意外陰衛生。對照組孕婦不服用益生菌，分娩前4 h靜脈滴注抗生素預防感染，抗生素根據過敏史、皮試結果選擇青霉素、頭孢或克林霉素。觀察組孕婦服用雙歧桿菌四聯活菌片(杭州遠大生物制藥有限公司)0.5 g/次，30℃ 溫水送服，3次/d，服用至分娩發動，分娩前4 h靜脈滴注抗生素預防感染(抗生素治療同對照組)。

1.4 觀察指標與方法

1.4.1 陰道GBS定量值檢測：治療前、治療后(分娩發動)由產科醫生采集陰道下1/3分泌物標本放入保存液管中冷藏密封保存。采用RT-qPCR法檢測GBS定量值，按照GBS核酸檢測試劑盒(上海暉科生物科學有限公司)配制GBS-PCR 反應液(包含Taq DNA Polymerase 0.5 μl，Uracil N-Glycosylase 0.2 μl)加入離心管振蕩混勻離心，分裝至PCR 反應管避光保存備用。取陰道分泌物、陽性和陰性對照樣品，95℃ 干浴和冰浴各2 min，離心取上清液加入PCR 反應管；反應條件：37℃ 2 min，94℃ 2 min，94℃ 15 s，55℃ 45 s，共進行10 個循環；再94℃ 15 s，55℃ 45 s，30個循環。采用SimpliAmp熒光定量PCR儀(美國賽默飛公司)檢測GBS定量值。

1.4.2 血清炎性因子檢測：治療前、治療后采集孕婦靜脈血3 ml離心留取血清，采用Varioskan LUX 多功能酶標儀(美國賽默飛公司)檢測血清白介素-6(IL-6)、C反應蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，試劑盒購自美國賽默飛公司。

1.4.3 記錄分娩方式及圍產期結局：記錄分娩方式(陰道分娩、剖宮產)、分娩時胎齡、新生兒出生體質量、新生兒出生1 min阿氏評分，5 min阿氏評分，胎膜早破、早產、宮內感染、產褥感染、新生兒感染等情況。

2 結 果

2.1 2組治療前后GBS定量值比較 與治療前比較，治療后觀察組陰道GBS定量值降低，且低于對照組(P<0.01)，而對照組治療前后比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 對照組及觀察組孕婦治療前后陰道GBS定量值比較

2.2 2組治療前后血清炎性因子比較 與治療前比較，治療后觀察組血清IL-6、CRP、TNF-α水平較治療前降低，且低于對照組(P<0.01)，而對照組治療前后比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 對照組及觀察組孕婦治療前后血清炎性因子比較

2.3 2組孕婦妊娠結局比較 觀察組孕婦胎膜早破、早產、宮內感染、產褥感染發生率低于對照組(P<0.05)，2組剖宮產率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表4 對照組及觀察組孕婦妊娠結局比較 [例(%)]

2.4 2組新生兒結局比較 觀察組新生兒感染發生率低于對照組(P<0.05)，2組分娩時胎齡、新生兒出生體質量、1 min阿氏評分、5 min阿氏評分比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表5。

表5 對照組及觀察組新生兒結局比較例(%)]

3 討 論

GBS是一種常見的陰道細菌，也是導致侵入性胎盤感染的主要原因。陰道內GBS可通過宮頸侵入引起上行子宮胎盤感染，也可在陰道分娩時傳染給新生兒，發生早產、死胎，以及新生兒敗血癥、肺炎、腦膜炎和腦病等嚴重不良妊娠結局[7]。2019年美國婦產科醫師學會委員會推薦臨產或破膜后GBS感染孕婦至少接受4 h的腸外抗生素治療[8]，但是抗生素治療對胎兒存在潛在危害，且廣譜抗生素應用可增加耐藥風險，因此，尋找更有效的減少GBS定植的治療途徑十分重要。

本結果說明，補充雙歧桿菌四聯活菌片可減少GBS定植，雙歧桿菌四聯活菌片主要成分為雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、蠟樣芽孢桿菌，其中雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌和糞腸球菌不低于0.5×106CFU，蠟樣芽孢桿菌不低于0.5×105CFU，腸道桿菌是最常見的益生菌，屬于一種無芽孢的桿菌，具有強代謝碳水化合物產酸能力，能拮抗致病菌，維持機體對抗原的細胞和體液免疫反應。一項隨機對照研究顯示，妊娠晚期GBS感染孕婦給予乳酸桿菌GR-1&RC-14膠囊干預3周后GBS轉陰率42.9%，明顯高于安慰劑組的18.0%[5]，Hanson等[9]發現，妊娠期間給予益生菌干預，妊娠36周時GBS菌落計數較未服用益生菌者明顯降低，動物研究也顯示，羅伊氏乳桿菌 CRL1324可顯著降低小鼠陰道 pH，減少GBS數量[10]，以上結果提示口服補充益生菌有助于降低GBS定植率，與本結果一致。而劉映玲等[11]報道結果則顯示，補充益生菌組GBS轉陰率與未補充益生菌組無差異(30% vs. 23%)，分析原因可能與益生菌干預時間有關，本研究益生菌干預至分娩，平均治療時間為3.12周，長于劉映玲等[11]干預時間(2周)。乳酸桿菌可維持機體細胞和體液免疫反應，陰道微生態失衡或乳酸桿菌消耗與女性妊娠晚期GBS感染有關，補充乳酸桿菌是根除陰道和直腸GBS定植的有效方法[12-14]?，F有研究發現，乳酸桿菌產生的抗菌肽Lactocin160可抑制陰道加德納菌生長，而陰道加德納菌是陰道微生態失衡的主要致病菌，可促使GBS生殖道定植及子宮或胎盤逆行侵襲性感染[15]。Lactocin160 還可破壞細胞膜并誘導三磷酸腺苷產生，殺死細菌性陰道病相關的微生物，維持健康的陰道微生物群落。乳酸桿菌還可產生過氧化氫，與其他細菌競爭黏附上皮細胞并產生微菌酸，酸化陰道環境，恢復正常的陰道菌群[16]。口服含乳酸桿菌的益生菌可從腸道進入陰道，并通過屏障作用對抗病原微生物，治療菌群失調及其介導的反復感染性疾病[17]。

本結果說明，補充益生菌可降低機體炎性反應?，F有研究發現，妊娠晚期GBS陽性孕婦血清白介素-18、趨化因子CCL-1水平升高，且與妊娠不良結局有關，而補充益生菌被臨床研究證實可抑制 T 細胞活性和輔助性T細胞1分化，抑制白細胞黏附和炎性因子的產生，降低炎性因子水平[18-20]。益生菌抑制炎性反應的機制可能與其改變腸道微生物群、加強腸道上皮屏障和調節免疫功能有關，越來越多研究也表明，益生菌可通過識別Toll 樣受體和含有核苷酸結合寡聚化結構域的蛋白樣受體，調節核因子-κB 和絲裂原活化蛋白激酶等炎性反應相關信號通路，抑制其下游炎性因子釋放[21]。本結果說明，補充益生菌可降低母嬰感染率及胎膜早破和早產發生率，分析原因為補充益生菌治療有效抑制了GBS在陰道內定植，繼而降低GBS上行感染和胎盤侵襲性感染幾率，所以胎膜早破和早產發生率降低。

綜上，口服益生菌可抑制妊娠晚期GBS定植，降低血清炎性因子水平和母嬰圍產期感染率，改善妊娠結局，優于單純抗生素治療。本研究局限性在于未觀察益生菌對陰道微生態的影響，其是否能改善陰道微生態尚待進一步探討。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

汪靜：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫及修改;施后淵、劉婭：資料搜集整理;唐琳：收集試驗數據、統計學分析;葉濤：確定研究方案，分析試驗數據、論文指導