育齡期女性MTHFR基因多態(tài)性觀察及其與VitB12、Hcy、SFA的關(guān)系

孫 艷，強(qiáng)桂彥，李春玲

(河北省滄州市婦幼保健院產(chǎn)三科，河北 滄州 061000)

不良妊娠結(jié)局指正常妊娠之外的病理妊娠與分娩期并發(fā)癥，常見的有早產(chǎn)、胎膜早破、新生兒窒息等，為產(chǎn)婦、新生兒的身心健康及生命安全帶來了嚴(yán)重威脅[1]。目前國內(nèi)外已有較多學(xué)者對(duì)不良妊娠結(jié)局發(fā)生率進(jìn)行了報(bào)道，并指出產(chǎn)前焦慮、肥胖、高齡、被動(dòng)吸煙等是不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素，同時(shí)也指出不良妊娠結(jié)局是多種因素共同作用導(dǎo)致的[2-4]。現(xiàn)階段圍孕期增補(bǔ)葉酸(serum folic acid，SFA)是避免不良妊娠結(jié)局發(fā)生的重要方式，但經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)人群增補(bǔ)SFA效果也存在差異，因此有必要對(duì)育齡期女性相關(guān)遺傳標(biāo)記物的特征進(jìn)行分析[5-6]。5,10 -亞甲基四氫葉酸還原酶(5,10-methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR)與甲硫氨酸合成酶還原酶(methionine synthase reductase,MTRR)是SFA代謝的關(guān)鍵酶，若酶活性降低會(huì)導(dǎo)致甲基供體缺失，同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸也會(huì)出現(xiàn)障礙，易出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局[7-8]。本研究對(duì)育齡期既往有不良孕產(chǎn)史女性MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)基因的多態(tài)性進(jìn)行分析，探討SFA代謝與MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)基因多態(tài)性間的關(guān)系，為育齡期女性妊娠結(jié)局的改善提供幫助，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年4月—2020年4月我院收治的既往有不良孕產(chǎn)史的圍孕期患者124例設(shè)為A組；另選取同期行孕期檢查且既往無不良孕產(chǎn)史的圍孕期產(chǎn)婦124例設(shè)為B組。A組年齡24～31歲，平均(27.43±2.43)歲；體重指數(shù)23～27，平均25.46±1.43；產(chǎn)次1～2次，平均(1.53±0.43)次；B組年齡24～32歲，平均(27.50±2.52)歲；體重指數(shù) 23～27，平均25.41±1.30；產(chǎn)次1～2次，平均(1.51±0.48)次。2組年齡、體重指數(shù)、產(chǎn)次差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(倫理批號(hào)2017-22號(hào))。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為于我院行孕期檢查的圍孕期產(chǎn)婦；②年齡22～35歲；③入院后由我科責(zé)任護(hù)士為其講解本研究的目的及方法，均自愿參與，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有血液或免疫系統(tǒng)疾病；②伴有甲狀腺疾病或系統(tǒng)性紅斑狼瘡；③有酒精依賴或藥物濫用史；④有嚴(yán)重的心腦血管疾病或肝腎功能異常；⑤伴有妊娠期疾病，如妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓等。

1.3方法 ①M(fèi)THFR及MTRR基因檢測：2組均在入院后以采樣拭子采集口腔脫落黏膜細(xì)胞，經(jīng)柱式抽提試劑盒(上海生工生物公司)提取DNA后以Taqman-MGB技術(shù)檢測MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)的基因多態(tài)性，檢測過程中所需相關(guān)儀器、試劑盒均由美國ABI公司提供；將20 mg/L的1 μL DNA模板、20×Taqman-MGB探針0.5 μL、2×Taqman Universal Master Mix 5 μL，投入儀器，每個(gè)反應(yīng)體系總體積10 μL，反應(yīng)溫度調(diào)整為95 ℃，經(jīng)10 min反應(yīng)后92 ℃環(huán)境下變性15 s，60 ℃環(huán)境下退火1 min后進(jìn)行20個(gè)循環(huán)，隨后改變條件，89 ℃反應(yīng)溫度下反應(yīng)15 s，于60 ℃下退火1.5 min后進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，最后在ABI 7900型熒光定量PCR儀讀取反應(yīng)終點(diǎn)，借助分析軟件獲得MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)基因的分型結(jié)果，Taqman-MGB探針設(shè)計(jì)見表1。②血清檢測：2組均在入院后取清晨空腹靜脈血3 mL，經(jīng)3 000 r/min離心8 min后取上清液，使用ADVIA Centaur型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以化學(xué)發(fā)光法檢測維生素B12(vitamin B12,VitB12)、SFA水平，試劑盒由SIEMENS公司提供；使用Olympus AU5400性生化分析儀以酶循環(huán)法檢測Hcy水平，試劑盒由四川邁克生物科技有限公司生產(chǎn)。

表1 Taqman-MGB探針設(shè)計(jì)Table 1 TaQman-MGB probe design

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)、單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組MTHFR C677T基因型及等位基因分布分析 A組MTHFR C677T基因型CT、TT型及T等位基因分布檢出率顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組MTHFR C677T基因型及等位基因分布分析Table 2 Distribution of MTHFR C677T genotypes and alleles between two groups (n=124，例數(shù)，%)

2.22組MTHFR A1298C基因型及等位基因分布分析 2組MTHFR A1298C基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 2組MTHFR A1298C基因型及等位基因分布分析Table 3 Distribution of MTHFR A1298C genotypes and alleles between two groups (n=124，例數(shù)，%)

2.32組MTRR A66G基因型及等位基因分布分析 2組MTHFR A66G基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 2組MTRR A66G基因型及等位基因分布分析Table 4 Distribution of MTRR A66G genotypes and alleles between two groups (n=124，例數(shù)，%)

2.42組血清VitB12、Hcy、SFA水平比較 A組Hcy水平顯著高于B組，SFA水平顯著低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，2組VitB12水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 2組血清VitB12、Hcy、SFA水平比較Table 5 Comparison of serum VitB12, Hcy and SFA levels between two groups

2.5A組不同MTHFR C677T基因型患者血清VitB12、Hcy、SFA水平比較 MTHFR C677T基因型CT、TT型Hcy水平高于CC型，SFA水平顯著低于CC型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，3種基因型VitB12水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表6。

表6 A組不同MTHFR C677T基因型患者血清VitB12、Hcy、SFA水平比較Table 6 Comparison of VitB12, Hcy and SFA levels in patients with different MTHFR C677T genotypes in group A

2.6血清VitB12、Hcy、SFA水平與MTHFR C677T基因型的相關(guān)性分析 經(jīng)相關(guān)性分析證實(shí)血清Hcy水平與MTHFR C677T基因型CT、TT型呈正相關(guān)，血清SFA水平與MTHFR C677T基因型CT、TT型呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表7。

表7 血清VitB12、Hcy、SFA水平與MTHFR C677T基因型的相關(guān)性分析Table 7 Correlation analysis between serum VitB12, Hcy, SFA levels and MTHFR C677T genotype

3 討 論

目前提高出生人口素質(zhì)為婦女保健及計(jì)劃生育工作的重點(diǎn)內(nèi)容，而不良妊娠結(jié)局則是影響出生人口素質(zhì)的重要原因，同時(shí)還會(huì)對(duì)產(chǎn)婦的身心健康帶來嚴(yán)重的負(fù)面影響[9]。SFA能夠參與到核酸、氨基酸、磷脂等代謝中，能夠?qū)?xì)胞分化及其功能產(chǎn)生影響，若妊娠期間出現(xiàn)SFA缺乏則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分化受阻、胎盤滋養(yǎng)層發(fā)育障礙，進(jìn)而引發(fā)不良妊娠結(jié)局[10-11]。MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)基因?yàn)镾FA代謝過程中所需的關(guān)鍵酶，當(dāng)關(guān)鍵酶基因發(fā)生突變則會(huì)導(dǎo)致SFA缺乏，影響妊娠結(jié)局。基于此，本研究分別選取既往有、無不良孕產(chǎn)史的248例圍孕期產(chǎn)婦，探討育齡期女性MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)基因多態(tài)性及其與VitB12、Hcy、SFA間的關(guān)系，為改善妊娠結(jié)局工作的開展提供參考依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，A組MTHFR C677T基因型CT、TT型及T等位基因分布檢出率顯著高于B組，且2組MTHFR(A1298C、A66G)基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示育齡期既往有不良孕產(chǎn)史的女性MTHFR C677T基因存在突變，MTHFR(A1298C、A66G)基因未發(fā)生突變。于玲等[12]研究指出山東臨淄地區(qū)胚胎停止發(fā)育產(chǎn)婦及正常妊娠產(chǎn)婦MTHFR(C677T、A1298C)、MTRR(A66G)基因特點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，本研究結(jié)果與之存在差異，筆者分析可能與地區(qū)及研究納入樣本量存在差異有關(guān)。邢金芳[13]研究指出，河南、淄博、廣西及海南地區(qū)MTHFR C677T突變等位基因頻率為62.1%、43.6%、39.1%、26.2%，從南至北呈降低趨勢，認(rèn)為不同地區(qū)的基因多態(tài)性分布存在明顯差異。

A組Hcy水平顯著高于B組，SFA水平顯著低于B組，提示Hcy增高、SFA降低可能是出現(xiàn)不良孕產(chǎn)史的原因之一。Hcy為人體硫酸氨基代謝的重要中間產(chǎn)物，當(dāng)Hcy呈現(xiàn)出高表達(dá)時(shí)會(huì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能，破壞凝血及纖溶系統(tǒng)，此時(shí)機(jī)體處于血栓前狀態(tài)，可導(dǎo)致胎盤微血栓形成，增加產(chǎn)婦及新生兒的并發(fā)癥[14-15]。SFA屬于水溶性維生素，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)SFA缺乏時(shí)可為產(chǎn)婦的胎兒帶來傷害，增加習(xí)慣性流產(chǎn)、早產(chǎn)、低體重兒等發(fā)生率[16-17]。王榀華等[18]研究指出，不良妊娠結(jié)局產(chǎn)婦Hcy明顯增高，SFA明顯降低，且兩項(xiàng)指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)，本研究結(jié)果能夠與之相互印證。

A組MTHFR C677T基因型CT、TT型Hcy水平高于CC型，SFA水平顯著低于CC型，表明MTHFR C677T基因突變與SFA缺乏關(guān)系密切，同時(shí)經(jīng)相關(guān)性分析證實(shí)血清Hcy水平與MTHFR C677T基因型CT、TT型呈正相關(guān)，血清SFA水平與MTHFR C677T基因型CT、TT型呈負(fù)相關(guān)，因此對(duì)于MTHFR C677T基因型CT、TT型孕婦應(yīng)及時(shí)增補(bǔ)SFA。SFA可參與到嘌呤、核苷酸等多種物質(zhì)的合成中，而MTHFR又是SFA代謝所需的一種關(guān)鍵酶，編碼中的氨基酸會(huì)由丙氨酸變?yōu)槔i氨酸，可導(dǎo)致酶活性降低，導(dǎo)致血清Hcy水平異常，并形成不良妊娠結(jié)局，因此及時(shí)采取相應(yīng)的措施，增補(bǔ)體內(nèi)SFA，或可對(duì)SFA代謝情況進(jìn)行改善，促使Hcy維持在正常狀態(tài)，改善妊娠結(jié)局。與袁春雷等[19]、安妮等[20]研究結(jié)果基本相符。另外，在既往研究中王艷輝等[21]研究指出，被動(dòng)、孕前吸煙，既往有流產(chǎn)史，貧血是引起不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素，鄭玉等[22]指出，高齡、肥胖、既往有不良妊娠史也是育齡期女性出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素，因此對(duì)于育齡女性增補(bǔ)SFA的同時(shí)也應(yīng)對(duì)引起不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素予以關(guān)注，以便于及時(shí)采取相應(yīng)的措施改善妊娠結(jié)局。

綜上所述，育齡期既往有不良孕產(chǎn)史的女性MTHFR C677T基因存在突變，CT、TT型血清SFA低于CC型，Hcy高于CC型，對(duì)MTHFR C677T基因型CT、TT型的育齡期女性及時(shí)增補(bǔ)SFA或可降低不良妊娠的發(fā)生率。