上皮性卵巢癌組織中MUC1、BDNF的表達(dá)及意義

李婭茹，林 萍

河北省衡水市人民醫(yī)院婦科，河北衡水 053000

有流行病學(xué)調(diào)查顯示，在婦科腫瘤性疾病中，上皮性卵巢癌患者的5年生存率僅達(dá)到30%左右[1]。上皮性卵巢癌的發(fā)病較為隱匿，往往在患者確診為上皮性卵巢癌時(shí)，疾病已經(jīng)進(jìn)展至中晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移。目前對(duì)于上皮性卵巢癌的診斷方法還未形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)[2]。有研究報(bào)道顯示，上皮性卵巢癌患者的進(jìn)展與多種分子以及遺傳變化相關(guān)[3]。已有的研究顯示，上皮性卵巢癌的進(jìn)展與基因組的結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)因子受體以及抑癌基因的平衡相關(guān)[4]。黏蛋白1(MUC1)水平在多種腺癌中都明顯升高，其主要由高度糖基化及非糖基化的區(qū)域性蛋白質(zhì)形成，在正常的細(xì)胞中，MUC1含有大量的糖基化片段，而在腫瘤細(xì)胞中，由于細(xì)胞表面的免疫抗原表位支鏈覆蓋，所以在腫瘤細(xì)胞中MUC1水平明顯上升[5]。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)主要存在于神經(jīng)系統(tǒng)中，該蛋白的異常表達(dá)可進(jìn)一步激活磷脂酰肌醇-3激酶信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖以及對(duì)周邊組織的浸潤(rùn)[6]。本研究主要研究上皮性卵巢癌組織中MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平與患者預(yù)后的相關(guān)性，為上皮性卵巢癌的臨床治療以及效果評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 采用前瞻性研究的方法，以2015年9月至2017年12月在本院進(jìn)行診斷并治療的62例上皮性卵巢癌患者作為研究對(duì)象。患者年齡30～64歲，平均(43.52±2.44)歲；平均體質(zhì)量指數(shù)為(24.56±2.55)kg/m2；病理類(lèi)型：黏液性癌23例，漿液性癌癥39例；分化程度：低分化22例，中分化26例，高分化14例；國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期患者29例。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)論證通過(guò)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合上皮性卵巢癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；(2)預(yù)計(jì)生存時(shí)間>6個(gè)月；(3)KPS[6]評(píng)分均≥70分；(4)入組后，所有患者均進(jìn)行手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)心、肝、腎功能?chē)?yán)重不全者；(2)存在交流障礙的患者。采用門(mén)診復(fù)查或電話形式對(duì)患者進(jìn)行3年隨訪，截止時(shí)間為死亡或隨訪結(jié)束。

1.2方法 取患者的病灶部位以及癌旁組織進(jìn)行勻漿處理后，以Trizol法進(jìn)行總RNA提取，然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，采用SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光PCR法進(jìn)行擴(kuò)增，檢測(cè)癌組織和癌旁組織中MUC1和BNDF的mRNA表達(dá)水平。MUC1上游引物：5′-CCCACCAATTTCTCGGACACT-3′，MUC1下游引物：5′-CAGTTCAGGATCCCCGCTATC-3′;BDNF上游引物：5′-TACATCTGGCTACTGGGTGTCGTATC-3′，BDNF下游引物：5′-TCGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′;以GAPDH作為內(nèi)參基因，GAPDH上游引物：5′-TCATGGGTGTGAACCATGAGAA-3′，GAPDH下游引物：5′-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3′。使用2-ΔΔCt計(jì)算MUC1、BDNF mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié) 果

2.1癌組織和癌旁組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平比較 癌組織的MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平均高于癌旁組織(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 癌組織和癌旁組織的MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平比較

2.2不同臨床病理特征患者癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平比較 不同年齡上皮性卵巢癌患者癌組織的MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。病理類(lèi)型為漿液性癌的患者癌組織中MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平明顯高于黏液性癌患者(P<0.05)；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期的患者癌組織中MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)；低分化程度的患者癌組織中MUC1、BDNF mRNA水平明顯高于中、高分化的患者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理特征患者癌組織TMUC1、BDNF mRNA水平比較

續(xù)表2 不同臨床病理特征患者癌組織TMUC1、BDNF mRNA水平比較

2.3不同預(yù)后患者癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平比較 隨訪結(jié)束后，生存組42例，死亡組20例，生存組患者癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平均明顯低于死亡組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同預(yù)后患者癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平比較

2.4相關(guān)性分析 上皮性卵巢癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平與患者生存情況呈負(fù)相關(guān)(r=-0.689、-0.551，P<0.05)，與病理類(lèi)型由黏液性癌變?yōu)闈{液性癌呈正相關(guān)(r=0.581、0.462，P<0.05)，與FIGO分期呈正相關(guān)(r=0.470、0.774，P<0.05)，與癌組織分化程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.592、-0.513，P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 癌組織中MUC1、BDNF mRNA水平與患者臨床病理特征、預(yù)后的相關(guān)性分析

3 討 論

上皮性卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在婦科惡性腫瘤的發(fā)病率中，上皮性卵巢癌位列第3[8]。在臨床診療過(guò)程中，上皮性卵巢癌因其較高的病死率和發(fā)病率，已經(jīng)成為臨床醫(yī)師共同關(guān)注的焦點(diǎn)。目前對(duì)于上皮性卵巢癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確，多數(shù)患者在明確診斷時(shí)已處于中晚期，這也是造成上皮性卵巢癌患者病死率較高的原因之一[8]。目前在上皮性卵巢癌的治療中，化療是主要的輔助性手段，但有嚴(yán)重的不良反應(yīng)，所以臨床對(duì)于靶向治療藥物的研發(fā)具有重要的意義[9]。有研究顯示，在上皮性卵巢癌患者的治療中，MUC1可作為重要的靶向治療點(diǎn)[10]。BDNF主要存在于機(jī)體的神經(jīng)系統(tǒng)中，BDNF 異常高表達(dá)能夠通過(guò)激活磷脂酰肌醇-3 激酶信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖以及向周邊組織的浸潤(rùn)[11]。

本研究顯示，與癌旁組織相比，上皮性卵巢癌患者癌組織的MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平均升高(P<0.05)。有分析認(rèn)為，隨著患者BDNF mRNA表達(dá)水平的升高，BDNF/TrkB 信號(hào)通路呈現(xiàn)明顯的過(guò)度活化，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖能力[12-13]。也有研究顯示，BDNF可通過(guò)對(duì)鈣離子依賴(lài)性酪氨酸激酶的磷酸化，促進(jìn)鈣離子的流動(dòng)性，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展[14]。閆洪亮等[15]通過(guò)下調(diào)上皮性卵巢癌組織的BDNF基因表達(dá)，降低了Akt磷酸化水平，進(jìn)而促進(jìn)人上皮性卵巢癌 OV2008 細(xì)胞凋亡和侵襲能力減弱。有研究報(bào)道顯示，MUC1可通過(guò)與核因子-κB結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞程式死亡-配體1(PDL1)水平的升高，在一定程度上增強(qiáng)了免疫逃逸機(jī)制，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[16]。在直腸癌患者的治療中，通過(guò)對(duì)患者的MUC1靶向抑制性作用，可抑制腫瘤細(xì)胞的增生[17]。李程程等[18]對(duì)上皮性卵巢癌患者的MUC1水平進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)隨著疾病的進(jìn)展，患者的MUC1水平呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)，并且與卵巢癌細(xì)胞的黏附性相關(guān)。在本研究中，上皮性卵巢癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平比較，死亡組高于生存組(P<0.05)，病理類(lèi)型為漿液性癌的患者高于黏液性癌患者(P<0.05)，F(xiàn)IGO分期Ⅲ～Ⅳ期的患者高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，低分化程度的患者高于中、高分化程度患者(P<0.05)，這均與上述研究相互印證。

本研究相關(guān)性分析顯示，上皮性卵巢癌患者癌組織MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平與患者生存情況呈負(fù)相關(guān)(r<0，P<0.05)，與病理類(lèi)型由黏液性癌變?yōu)闈{液性癌呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)，與FIGO分期等級(jí)呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)(r<0，P<0.05)，提示分析上皮性卵巢癌組織的MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平對(duì)于患者預(yù)后判斷具有積極的意義。但是本研究存在一定的局限性，即樣本量少，有待日后采集更大樣本量進(jìn)行分析。

綜上所述，上皮性卵巢癌組織中MUC1、BDNF mRNA表達(dá)水平與患者生存情況、病理類(lèi)型、FIGO分期及分化程度密切相關(guān)，可為評(píng)估患者治療效果及疾病進(jìn)展提供重要依據(jù)。