胃癌患者血清miR-135與miR-601水平變化及臨床意義*

趙艷云，趙淑穎，宮向良，于大中，劉 征

1.河北省唐山市第三醫院腫瘤科,河北唐山 063100；2.河北省唐山市人民醫院檢驗科，河北唐山 063000

胃癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，具有較高的發病率和病死率，嚴重威脅人們的生命健康[1]。據統計，2018年全球新發胃癌患者超過10萬例，其中死亡例數約為7.8萬[2]。目前，胃癌的治療仍然以手術為主，但晚期胃癌的生存率普遍較低[3]，且胃癌術后復發轉移已成為胃癌患者死亡的主要原因[4]。病理活檢是診斷胃癌的金標準，但也存在患者不耐受檢查的弊端[5]。血清標志物對于腫瘤的早期篩選具有微創、高效等優點，尋找可以用于胃癌患者早期診斷和預后評估的血清標志物具有重要的臨床意義。糖類抗原72-4(CA72-4)和糖類抗原19-9(CA19-9)是臨床常用的腫瘤標志物[5]，但用于胃癌診斷的靈敏度和特異度較低[6]。近年來研究發現，微小核糖核酸(miRNA)的表達水平與胃癌的發病密切相關[7]，有望成為診斷胃癌和評估胃癌預后的新型標志物。血清miR-135和miR-601作為miRNA家族中的重要成員，同時也是重要的癌基因，對于癌癥的發生、發展具有十分重要的作用[8-9]，但目前將血清miR-135和miR-601用于評估胃癌預后的臨床研究仍然較少。本研究通過研究血清miR-135和miR-601在胃癌中的表達特征，探討其對胃癌的早期診斷和預后評估的價值，以期為胃癌患者的臨床診療提供相關依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性選擇2019-2020年唐山市第三醫院收治的90例胃癌患者作為觀察組，另選擇同期84例體檢健康者作為對照組。納入標準：(1)患者均符合胃癌的診斷標準[10]，且經胃鏡及組織病理檢查確診；(2)年齡40～70歲；(3)未接受抗腫瘤治療；(4)預計生存時間>5個月；(5)臨床資料完整。排除標準：(1)消化道出血患者；(2)合并其他部位惡性腫瘤患者；(3)嚴重肝、腎、心、腦功能不全及結核、血液病患者；(4)近期參與過其他臨床試驗或經其他特殊治療的患者；(5)中途退出或隨訪資料不全的受試者。觀察組中男性58例(64.44%)，女性32例(35.56%)；平均年齡(59.18±6.35)歲；早期胃癌36例(40.00%)，進展期胃癌54例(60.00%)；發生淋巴結轉移46例(51.11%)，未發生淋巴結轉移44例(48.89%)。對照組中男性49例(58.33%)，女性35例(41.67%)；平均年齡(58.64±7.42)歲。2組性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經唐山市第三醫院醫學倫理委員會批準，所有研究對象均自愿參與本研究并簽署知情同意書。

1.2方法 觀察組患者于入院次日晨，對照組于體檢當日空腹抽取靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心15 min，分離血清置于-80 ℃冷存備用。實時熒光定量聚合酶鏈反應(q-PCR)在美國ABI 7500 q-PCR儀上進行，PCR試劑盒由日本Takara公司提供，反應體系為20.00 μL，混合離心置入q-PCR儀，測定2組血清miR-135和miR-601水平。95 ℃變性15 s，60 ℃復性60 s，45個循環。通過2-ΔΔCt法(ΔCt=Ct目的基因-CtU6)測定血清miR-135和miR-601水平，試驗重復3次，取均值。引物序列見表1。通過羅氏E601電化學發光免疫分析儀采用化學發光法測定CA72-4及CA19-9水平。

表1 引物序列

1.3觀察指標 比較觀察組和對照組、早期胃癌組和進展期胃癌組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平差異，分析miR-135、miR-601水平與臨床病理特征的關系，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨和聯合檢測在胃癌患者早期診斷及預后評估中的價值。

2 結 果

2.1觀察組和對照組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較 觀察組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組和對照組血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較

2.2不同時期胃癌血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較 進展期胃癌患者血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9表達水平明顯高于早期胃癌患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同時期胃癌血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平比較

2.3血清miR-135、miR-601水平與胃癌患者臨床病理特征的關系 血清miR-135、miR-601水平與胃癌臨床分期及腫瘤分化程度有關(P<0.05)，而與年齡、性別、腫瘤最大徑、組織學類型以及腫瘤位置無關(P>0.05)，見表4。

表4 血清miR-135、miR-601水平與胃癌患者臨床病理特征的關系

2.4血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨及聯合檢測對早期胃癌的診斷效能 ROC曲線結果顯示，miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨檢測診斷早期胃癌的曲線下面積(AUC)分別為0.952、0.943、0.557、0.677，當該4項指標的最佳臨界值分別為3.28、6.79、17.13 ng/mL、34.67 ng/mL時，其靈敏度分別為0.820、0.845、0.799、0.812，特異度分別為0.796、0.803、0.748、0.790；4項指標聯合檢測診斷早期胃癌的AUC為0.961，靈敏度為0.872，特異度為0.835。見圖1。

圖1 血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9診斷早期胃癌的ROC曲線

2.5血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨及聯合檢測對胃癌預后的評估價值 ROC曲線結果顯示，miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9單獨檢測評估胃癌預后的AUC分別為0.948、0.675、0.566、0.625，當該4項指標的最佳臨界值分別為3.37、6.82、18.48 ng/mL、35.41 ng/mL時，其靈敏度分別為0.834、0.825、0.785、0.811，特異度分別為0.810、0.832、0.767、0.807。4項指標聯合檢測評估胃癌預后的AUC為0.953，靈敏度為0.890，特異度為0.843。見圖2。

圖2 血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9評估胃癌預后的ROC曲線

3 討 論

胃癌是臨床最常見的消化系統惡性腫瘤[11]，其發病率逐年升高，且預后較差[12]。因此，胃癌的有效篩查、及早診斷及預后評估工作十分重要[13]。其中，血清腫瘤標志物的無創篩查方式備受臨床關注。CA72-4和CA19-9是糖鏈蛋白家族成員[14]，同時也是臨床常見診斷胃癌的腫瘤標志物，對于胃癌患者的早期篩查具有一定參考價值。CA72-4是高相對分子質量的一種黏蛋白，通常在腫瘤組織中呈高表達趨勢[15]。而CA19-9作為一種糖類抗原，是腫瘤廣譜標志物，近年來也常被用于胃癌的診斷及預后評估[16]。但由于單一腫瘤標志物對于診斷胃癌和預后評估的靈敏度和特異度較低，限制了其臨床應用推廣[17-18]，在此基礎上，探索新型血清標志物以預測胃癌進展并輔助靶向治療漸成熱點[3]。

miRNA屬于內源性非編碼單鏈RNA，具有組織特異性和時間性[19-20]，作為新的癌基因與胃癌的發病密切相關[21]。miRNA主要通過調控靶基因的表達參與細胞的增殖、生長和分化[22]，對于癌癥的診斷和治療均具有重要的參考價值。血清miR-135和miR-601是miRNA家族中的重要成員，對于癌癥判斷及預后評估具有重要的意義。研究表明，血清miR-135和miR-601在胃癌[6]、乳腺癌[23]、肺癌[24]、宮頸癌[25]等多種癌癥中均呈現出高表達，且與腫瘤的臨床分期、淋巴結轉移以及分化程度等密切相關[26]。有學者指出，血清miR-135和miR-601的異常表達，將有望成為癌癥診斷及預后評估的重要指標[27]。

本研究結果顯示，觀察組血清miR-135、miR-601、CA72-4和CA19-9水平較對照組明顯升高(P<0.05)，提示血清miR-135、miR-601、CA72-4和CA19-9在胃癌患者中呈現高表達趨勢；而進展期胃癌患者血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9水平較早期胃癌明顯升高(P<0.05)，提示血清miR-135、miR-601、CA72-4和CA19-9隨著胃癌的發展，其血清水平均逐漸升高。于偉等[28]研究指出，血清miR-135和miR-601水平與胃癌的發生呈正相關，該結論與本研究結果相一致。

本研究ROC曲線結果顯示，血清miR-135、miR-601、CA72-4、CA19-9聯合檢測診斷早期胃癌的AUC(0.961)、靈敏度(0.872)、特異度(0.835)均高于4項單獨檢測，提示4項指標聯合檢測對早期胃癌具有較高的診斷價值。有研究報道，血清miR-135水平在胃癌患者中呈升高趨勢，且與CA19-9密切相關，對于早期胃癌具有較高的診斷價值[29]，該結論與本研究結果大致相同；本研究結果還顯示，4項指標聯合檢測評估胃癌預后的AUC(0.953)、靈敏度(0.890)、特異度(0.843)均高于4項指標單獨檢測，提示4項指標聯合檢測對于評估胃癌預后具有重要的臨床價值。有研究指出，血清miR-601水平在胃癌患者中升高，其水平升高能反映胃癌的病理進展，對于胃癌患者的預后具有重要的預測價值[30]，該結論與本項研究結果具有相似之處。

本研究結果還發現，血清miR-135和miR-601水平與臨床分期及腫瘤分化程度有關(P<0.05)，這與李利義等[31]、吳朝旭等[32]的結論相似。在本研究中，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的胃癌患者血清miR-135和miR-601水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)；腫瘤分化程度低水平的胃癌患者血清miR-135和miR-601水平越高，提示臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期，腫瘤分化程度為中、低水平的胃癌患者應給予足夠的臨床重視，及早診治，以改善預后。

由于研究時間短、樣本量較小、單中心研究等條件的限制，導致了本研究結果可能存在一定程度的偏差。本課題組接下來將通過長期、大樣本、多中心的臨床數據來對本研究結果進行進一步的驗證和完善。

綜上所述，血清miR-135和miR-601水平在胃癌患者中明顯升高，二者聯合CA72-4、CA19-9水平檢測對胃癌的早期診斷和預后評估具有較高價值，有望成為胃癌早期診斷和預后評估的新型血清標志物。