海珠喘息定片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

江 勛

（湖南省衡陽市市場(chǎng)監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖南 衡陽 421001）

海珠喘息定片由珍珠層粉、胡頹子葉、天花粉、蟬蛻、防風(fēng)、冰片、甘草、鹽酸氯丙那林、鹽酸去氯羥嗪制成，具有平喘、祛痰、鎮(zhèn)靜、止咳功效，常用于治療支氣管哮喘和慢性氣管炎［1］，對(duì)改善慢性喘息性支氣管炎平穩(wěn)期患者的咳喘癥狀，提高其生活質(zhì)量，減少住院次數(shù)效果良好［2］。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于1993年版《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第九冊(cè)）》，與國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ02382007內(nèi)容一致，但僅有顯微鑒別1項(xiàng)及化學(xué)鑒別2項(xiàng)，專屬性低，無指標(biāo)性功效成分的定性、定量鑒別，無法有效控制藥品的質(zhì)量。目前，多針對(duì)方中化學(xué)藥成分鹽酸氯丙那林和鹽酸去氯羥嗪的定量研究，對(duì)中藥成分的研究很少［3］。中藥依靠其含有的多種成分協(xié)同發(fā)揮作用而體現(xiàn)藥效，僅以1種或2種成分很難評(píng)價(jià)中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣。薄層色譜（TLC）技術(shù)用于中藥材和中成藥的質(zhì)量控制具有快速、簡(jiǎn)便、直觀等特點(diǎn)，可同時(shí)反映多種化學(xué)成分的信息，為常用檢測(cè)方法［4］。化學(xué)反應(yīng)法用于定性鑒別，雖專屬性有限，但操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，分析速度快，樣品用量少，成本低。課題組前期已完成方中2種化藥成分及君藥胡頹子葉功效成分的定量測(cè)定和評(píng)價(jià)。本研究中采用化學(xué)反應(yīng)法和TLC法對(duì)方中珍珠層粉、防風(fēng)、冰片3味藥材開展定性鑒別，為海珠喘息定片的質(zhì)量控制提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240S型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)公司，精度為十萬分之一）；DK-615HT型超聲波清洗儀（深圳市得康洗凈電器有限公司，功率為360 W，頻率為40 kHz）；ZF-20C型暗箱式自動(dòng)紫外分析儀（上海寶山顧村電光儀器廠）；DZKW-D-4型電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；GZXDH.500BS型電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；硅膠GF254薄層板（批號(hào)為HX02816915，規(guī)格為20 cm×20 cm），硅膠G薄層板（批號(hào)為HX69481826，規(guī)格為10 cm×20 cm），均購自德國(guó)Merck公司。

1.2 試藥

海珠喘息定片（沈陽紅藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)分別為190201，190501，180701；洛陽天生藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為190102，190402；廈門中藥廠有限公司，批號(hào)分別為190601，191017，191106；江西南昌桑海制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為190359，181106）；升麻素苷對(duì)照品（批號(hào)為111522-201913，純度為94.6%），5-О-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（批號(hào)為111523-201811，純度為97.4%），右旋龍腦對(duì)照品（批號(hào)為111688-201602，純度為99.6%），冰片對(duì)照品（批號(hào)為110743-201706，純度為97.6%），均購自中國(guó)食品藥品檢定研究院；水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 化學(xué)反應(yīng)鑒別珍珠層粉

取樣品粉末0.5 g，置錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，超聲提取15 min，濾過，取濾液3 mL，加甲基紅指示液2滴，用濃氨水中和，滴加鹽酸，使其呈酸性，加草酸銨試液即生成白色沉淀，分離，沉淀不溶于醋酸，可溶于鹽酸［5］。結(jié)果顯示，10批樣品均呈明顯正反應(yīng)。同法制備缺珍珠層粉的陰性對(duì)照品溶液，加草酸銨試液后不產(chǎn)生沉淀，表明陰性對(duì)照無干擾。

2.2 TLC鑒別

防風(fēng)：取樣品粉末2 g，置錐形瓶中，加乙醇25 mL，超聲提取30 min，濾過，取濾液，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，棄去乙酸乙酯液，再用水飽和的正丁醇液提取2次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)右掖? mL，使其溶解，作為供試品溶液［6］。同法制備缺防風(fēng)的陰性對(duì)照品溶液。取升麻素苷和5-О-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品適量，精密稱定，加乙醇，制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的對(duì)照品溶液。采用2020年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502 TLC法試驗(yàn)，精密吸取上述對(duì)照品溶液各2μL、供試品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇溶液（4∶1，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（254 nm）下檢視［7］149-150，結(jié)果供試品溶液色譜中檢出升麻素苷和5-О-甲基維斯阿米醇苷，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)（圖1 A）；置紫外光燈（365 nm）下檢視［8-9］，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的藍(lán)綠色熒光斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無干擾（圖1 B）。

冰片：取樣品粉末2 g，置錐形瓶中，加三氯甲烷25 mL，超聲提取20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，即得供試品溶液［10］。同法制備缺冰片的陰性對(duì)照品溶液。分別取右旋龍腦和冰片對(duì)照品適量，精密稱定，加三氯甲烷制成質(zhì)量濃度為2 mg/mL的對(duì)照品溶液。照2020年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502 TLC法試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯溶液（17∶3，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視［7］61，90-91，152-153。結(jié)果供試品溶液色譜中檢出右旋龍腦和冰片，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的玫瑰紅色斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1 C。

圖1 薄層色譜圖Fig.1 TLC chromatograms

3 討論

海珠喘息定片中，珍珠層粉為由蚌科動(dòng)物三角帆蚌Hyriopsis cumingii（Lea）、褶紋冠蚌Cristaria plicata（Leach）或珍珠貝科動(dòng)物馬氏珍珠貝Pteria martensii（Dunker）的貝殼［11］內(nèi)層部分加工而成的粉末，由蛋白質(zhì)等有機(jī)成分及碳酸鈣、微量元素等無機(jī)成分組成，具有安神、鎮(zhèn)靜定痙、明目袪翳、收斂生肌、緩解支氣管痙攣［12-13］等功效，為君藥；防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.未抽花莖植株的干燥根，味辛、微甘，性溫，歸肝、膀胱、脾經(jīng)，具有祛風(fēng)、解表、勝濕、止痙功效［7］，主治外感風(fēng)寒、頭痛目眩、周身疼痛、骨節(jié)疼痛、風(fēng)寒濕痹等證［14-15］，為臣藥；2020年版《中國(guó)藥典（一部）》中收載了冰片的3個(gè)品種，分別為天然冰片［樟科植物樟Cinnamomumcamphora（L.）Presl新鮮枝、葉經(jīng)提取加工制成的結(jié)晶］、艾片［菊科植物艾納香Blumea balsamifera（L.）DC新鮮葉經(jīng)提取加工制成的結(jié)晶］、合成冰片（合成龍腦），性微寒、涼，味辛、苦，歸心、脾、肺經(jīng)，具有明心鎮(zhèn)靜、開竅醒神、清熱止痛、散郁火功效［7］，常以引藥上行，芳香走竄，能開啟閉阻心竅，用于治療喉痹、腦痛、鼻瘜、齒痛、傷寒舌出、小兒痘陷，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、促透、保護(hù)循環(huán)系統(tǒng)等藥理學(xué)作用［16-18］，為佐藥。

珍珠層粉主要無機(jī)成分為碳酸鈣，參考2020年版《中國(guó)藥典（四部）》鈣鹽化學(xué)鑒別試驗(yàn)建立定性鑒別方法。防風(fēng)藥材含有揮發(fā)油［19］、色原酮類、香豆素類［20］、多糖類等成分［21］，參考2020年版《中國(guó)藥典（一部）》對(duì)防風(fēng)鑒別方法進(jìn)行TLC鑒別試驗(yàn)。由于處方藥味多、成分復(fù)雜，導(dǎo)致干擾嚴(yán)重，結(jié)合文獻(xiàn)［6-9］，改進(jìn)提取方法，增加萃取步驟，較好地除去各種雜質(zhì)成分的干擾，特征性指標(biāo)成分升麻素苷、5-О-甲基維斯阿米醇苷，所得TLC斑點(diǎn)分別在紫外光燈（254 nm和365 nm）下顯色清晰。冰片又稱龍腦，屬雙環(huán)單萜類仲醇，有正龍腦和異龍腦2個(gè)差向異構(gòu)體，天然龍腦按旋光性的不同分為右旋龍腦和左旋龍腦，右旋龍腦的藥用價(jià)值更大［22-23］，臨床常用合成冰片，以樟腦、松節(jié)油等為原料經(jīng)化學(xué)反應(yīng)人工合成，除含有不低于55%的消旋龍腦外，還含有約35%的異龍腦及其他成分［24］。本研究中結(jié)合2020年版《中國(guó)藥典（一部）》中天然冰片（右旋龍腦）和艾片（左旋龍腦）及文獻(xiàn)［11］的方法進(jìn)行TLC鑒別，其色譜圖清晰，分離效果良好。

本研究中建立的方法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，分析速度快，可更全面地控制海珠喘息定片的質(zhì)量。