藥用膠塞中抗氧劑2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚含量測(cè)定及遷移量研究*

吳紅洋，李 莎，張 璞，任學(xué)毅，申麗莎，范能全△

（1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401121；2.重慶市中藥研究院，重慶 400061）

藥用膠塞多采用鹵化丁基膠塞，具有良好的穩(wěn)定性、耐熱性、生物性能等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于藥品包裝材料中。膠塞在生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)加入某些抗氧劑，以延緩或抑制橡膠制品的老化，延長(zhǎng)使用壽命［1-3］。在藥品貯存過(guò)程中，藥品膠塞中部分化學(xué)物質(zhì)可能會(huì)緩慢釋放，被藥物吸附，膠塞與藥物相容，影響藥品質(zhì)量，對(duì)人體健康造成潛在危害［4-5］。據(jù)報(bào)道，藥用膠塞中的抗氧劑2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）會(huì)對(duì)頭孢類(lèi)注射劑溶液的澄清度造成影響［6-7］。目前，其測(cè)定方法主要有高效液相色譜法［8-9］、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［10-11］和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［12-13］。液相色譜法中多以二氯甲烷作為提取溶劑，毒性較大，而與質(zhì)譜聯(lián)用法的檢測(cè)成本較高。本研究中采用氣相色譜法測(cè)定注射用無(wú)菌粉末用溴化丁基橡膠塞中抗氧劑BHT的含量，以及其在頭孢類(lèi)注射劑中的遷移情況。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC-2010 Plus型氣相色譜儀（日本Shimadzu公司）；XPE205型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為0.01 mg）；KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；Multifuge X1R型高速冷凍離心機(jī)（賽默飛世爾科技＜中國(guó)＞有限公司）。

1.2 試藥

BHT標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)為128-37-0，Aladdin公司，批號(hào)為B1926023，純度＞99.7%）；乙酸乙酯（色譜純，Macklin公司，批號(hào)為C11232679）；注射用無(wú)菌粉末用溴化丁基橡膠塞（簡(jiǎn)稱(chēng)膠塞，湖北華強(qiáng)科技有限責(zé)任公司，批號(hào)為B2-201915）；注射用頭孢米諾鈉（北大醫(yī)藥股份有限公司，編號(hào)為B306）；注射用頭孢美唑鈉（重慶藥友制藥有限責(zé)任公司，編號(hào)為B901）；注射用頭孢他啶（福安藥業(yè)集團(tuán)慶余堂制藥有限公司，編號(hào)為B301）；注射用頭孢米諾鈉（重慶天地藥業(yè)有限責(zé)任公司，編號(hào)為B401）；注射用鹽酸頭孢替安（重慶圣華曦藥業(yè)股份有限公司，編號(hào)為B404）；注射用頭孢曲松鈉（重慶科瑞制藥集團(tuán)有限公司，編號(hào)為B005）；注射用頭孢唑肟鈉（西南藥業(yè)股份有限公司，編號(hào)為B043）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：DB-Waxetr毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.00μm）；載氣：N2；進(jìn)樣量：1μL；流速：2.0 mL/min；分流比：20∶1；柱溫：采用程序升溫，80℃保持5 min，以60℃/min的速率升至180℃并保持6 min，以相同的速率升至230℃并保持2 min；氣化室溫度：220℃；檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器，溫度為250℃。在此色譜條件下的色譜圖見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，空白溶劑和樣品基質(zhì)對(duì)BHT的測(cè)定結(jié)果均無(wú)干擾，BHT在11.281 min時(shí)能得到較好分離。

圖1 氣相色譜圖Fig.1 GC chromatograms

2.2 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液：取BHT對(duì)照品0.025 30 g，精密稱(chēng)定，置25 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并定容，精密移取5 mL，置50 mL容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，制成每1 mL含BHT 100.90μg的對(duì)照品中間貯備溶液。

膠塞提取溶液：取膠塞1.010 2 g，精密稱(chēng)定，剪碎，置具塞刻度試管中，加入適量乙酸乙酯溶解，超聲［功率為500 W，頻率為40 kHz，溫度為（25±2）℃］提取30 min，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯反復(fù)洗滌3次，合并提取液，定容，用0.22μm有機(jī)濾膜濾過(guò)，即得。

遷移樣品溶液：取遷移樣品1瓶，加0.9%氯化鈉注射液5 mL，溶解，加入適量乙酸乙酯，溶解，渦旋混勻1 min后離心處理（轉(zhuǎn)速為4 000 r/min）10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯洗滌1次，合并提取液，定容，用0.22μm有機(jī)濾膜濾過(guò)，即得。

遷移樣品加標(biāo)溶液：取遷移樣品（編號(hào)為B306）9瓶，分別加入0.9%氯化鈉注射液5 mL，溶解，其中3份作為樣品本底，其余6份均加入質(zhì)量濃度為100.90μg/mL的對(duì)照品中間貯備液0.1 mL，加入適量乙酸乙酯，溶解，渦旋混勻1 min后離心（轉(zhuǎn)速為4 000 r/min）10 min，取上清液，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯洗滌1次，合并提取液，定容，用0.22μm有機(jī)濾膜濾過(guò)，即得。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密移取對(duì)照品中間貯備溶液適量，加乙酸乙酯配制成每1 mL含對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為0.504 5，1.009 0，2.018 0，5.045 0，10.090 0，20.180 0，50.450 0μg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。依法進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得BHT回歸方程Y=1 014.84X-126.939（r=1.000 0，n=7），表明BHT質(zhì)量濃度在0.504 5～50.450 0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

檢測(cè)限與定量限確定：將對(duì)照品中間貯備溶液逐級(jí)稀釋?zhuān)?.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比（S/N）為3∶1時(shí)的質(zhì)量濃度為檢測(cè)限，S/N為10∶1時(shí)的質(zhì)量濃度為定量限。結(jié)果方法的檢測(cè)限為0.201 8μg/mL，定量限為0.504 5μg/mL。

精密度試驗(yàn)：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下質(zhì)量濃度為5.045 0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次。結(jié)果對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.44%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下質(zhì)量濃度為5.045 0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別于0，3，6，10，19，28 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果BHT峰面積的RSD均小于1.72%（n=6），表明對(duì)照品溶液在28 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：按2.2項(xiàng)下方法制備遷移樣品加標(biāo)溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取2.2項(xiàng)下膠塞提取溶液與遷移樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算BHT的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 藥用膠塞中BHT含量和各批頭孢類(lèi)注射劑中BHT遷移量測(cè)定結(jié)果（μg/g）Tab.2 Results of determination of BHT content in medicinal rubber stopper and BHT migration in each batch of cephalosporins injection（μg/g）

3 討論

3.1 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

曾以色譜純乙酸乙酯和無(wú)水乙醇作為提取溶劑，提取方式包括振蕩提取、超聲提取和微波萃取，提取時(shí)間選擇10，20，30，40 min。結(jié)果表明，以乙酸乙酯作為提取溶劑，超聲提取30 min（溫度低于20℃），對(duì)樣品進(jìn)行前處理，樣品中BHT提取效果最好，回收率較高，且該前處理選擇的提取溶劑毒性較小，操作簡(jiǎn)單、快速。

3.2 色譜條件優(yōu)化

曾選用DB-5和DB-WAX色譜柱，以BHT在毛細(xì)管柱上的保留性、分離度、峰形為判斷依據(jù)，通過(guò)優(yōu)化升溫程序、流速、氣化室溫度等儀器參數(shù)。最終在優(yōu)化后的色譜條件下，BHT在11.281 min時(shí)可得到有效分離，且目標(biāo)物質(zhì)附近無(wú)雜質(zhì)干擾，該方法能滿(mǎn)足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

3.3 安全性評(píng)價(jià)

《歐洲藥典（7.0版）》要求塑料包裝材料中的BHT添加限度不得超過(guò)0.125%［14］，美國(guó)食品藥物管理局批準(zhǔn)藥物非活性成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)規(guī)定靜脈注射類(lèi)抗氧劑BHT最大用量為0.002%［15］。本試驗(yàn)中膠塞和藥品（注射用頭孢他啶，編號(hào)為B301）中BHT最高含量分別為0.006%和0.001%，均在規(guī)定限度范圍內(nèi)。但隨著加速試驗(yàn)的進(jìn)行，該藥品BHT遷移量可能會(huì)增加，存在一定安全隱患，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)BHT含量的控制。

3.4 方法評(píng)價(jià)

本方法前處理簡(jiǎn)單、快速，靈敏度和準(zhǔn)確度均較高，重復(fù)性良好，應(yīng)用范圍較廣，可用于藥用膠塞中BHT的含量及在藥品中遷移量的測(cè)定，同時(shí)可為后續(xù)研究頭孢類(lèi)注射劑澄清度的影響因素提供參考。