農桿菌介導的水稻遺傳轉化體系的建立

殷 敏

（寧夏葡萄酒與防沙治沙職業技術學院，寧夏 銀川 750001）

水稻是重要的糧食作物，其產量對保障我國糧食安全具有重要意義。利用植物基因工程技術將抗逆、豐產基因通過農桿菌介導法[1-4]轉化水稻可以提高水稻的抗逆性、產量。目前，對于水稻材料，農桿菌介導的遺傳轉化體系已經很成熟，但是寧夏回族自治區選育出來的水稻品種在農桿菌介導的遺傳轉化方面明顯滯后，報道較少。為此，首先建立寧夏回族自治區水稻高頻再生體系，培養出高品質的水稻愈傷組織，然后通過農桿菌介導法轉化水稻愈傷組織，建立水稻遺傳轉化體系，為通過基因工程技術提高寧夏回族自治區水稻抗逆性、產量奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

水稻材料為寧粳23號、寧粳25號、寧粳27號、寧粳29號、寧粳33號、寧粳35號、寧粳38號、寧粳40號、寧粳花89號。

農桿菌菌株為EHA105（已經將含有卡那霉素、羧芐青霉素抗性基因的質粒轉化進該農桿菌菌株），由寧夏葡萄酒與防沙治沙職業技術學院保存。

培養基為YEP培養基和MS培養基[5-6]。

1.2 試驗方法

1.2.1 愈傷組織的培養挑選籽粒飽滿的水稻種子，剝去穎殼，去掉發黑的種子，選取干凈完整的種子浸泡在75%乙醇溶液中4~6 min進行殺菌消毒，然后用0.1%氯化汞消毒15 min（可在搖床上進行），最后用無菌水沖洗3~4次。將沖洗干凈的種子放在無菌濾紙上，待水分被吸干，分別置于含有不同質量濃度脫落酸（ABA，0、1 mg/L）的MS培養基（MS+ABA培養基）中，然后分別在光照、黑暗條件下培養12~15 d，確定最佳培養條件。……