肺炎克雷伯菌核酸分子與耐藥基因KPC/CMY-2 熒光定量PCR 檢測體系的建立與驗證

張畢明，張 利，侯正利，譚德勇，孫 菁

（1.長沙市第四醫院，長沙 410006；2.圣湘生物科技有限公司，長沙 410006）

肺炎克雷伯菌（Klebsiella），革蘭染色陰性、可發酵乳糖、無動力的需氧桿狀細菌，是一種機會性感染病原體可引起社區獲得性感染和醫院感染，可導致尿路感染、肺炎、外科傷口感染甚至敗血癥等［1-4］。碳青霉烯類抗生素是一類廣譜的β-內酰胺類抗生素，常用于治療各類肺炎克雷伯菌感染的疾病。但據2016 年中國CHINET 耐藥數據監測網數據顯示，肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗生素耐藥已超10%［5］。產碳青霉烯酶是肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗生素耐藥的主要原因，目前陸續鑒定出了多種耐藥基團如KPC、CMY-2、CTX-M、SHV 等，耐藥率高，多耐藥和泛耐藥肺炎克雷伯菌株給臨床診療用藥提出了巨大的挑戰。

目前，培養仍舊是分離鑒定肺炎克雷伯菌株的金標準，但臨床樣本培養時間長，不能滿足快速診斷的要求。基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜技術［6］、全基因組測序技術［7］、環介導等溫擴增技術［8］等檢測技術不斷革新肺炎克雷伯菌株的耐藥基因診斷，但受限于引物和探針設計、檢測成本、報告周期長等諸多因素，大部分尚未實現臨床落地開展檢測［9］。實時熒光定量PCR 技術與常規細菌培養法比較，具有特異性強、重復性好、定量準確、大批量檢測、自動化程度高等優點，可滿足臨床快速檢測需求。

本研究通過設計特異性探針和引物，優化檢測體系條件、反應體組分用量、靈敏性和特異性驗證等，建立……