湖北地區老年漢族人群CYP2C19*2、*3位點基因型分析*

宦麗君,王鵬云

華中科技大學同濟醫學院附屬梨園醫院檢驗科,湖北武漢 430077

細胞色素P450-2C19(由CYP2C19基因編碼)是細胞色素P450超家族的一種具有高度遺傳異質性的同工酶，參與多種臨床藥物的代謝調控，包括氯吡格雷、伏立康唑、質子泵抑制劑、抗抑郁藥、卡里索羅多和地西泮等[1-2]。已鑒定的可造成CYP2C19酶活性改變的單核苷酸多態性(SNP)位點有20多個，其中最常見且已用于臨床診斷的為CYP2C19*2(681G>A)和CYP2C19*3(636G>A)這2個SNP位點[3]。CYP2C19基因多態性具有明顯的地域、民族差異，可能對其診斷價值產生一定的影響。通過研究CYP2C19基因多態性，了解其基因分布差異，可為開發新藥、臨床合理用藥、減少藥物不良反應等提供理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年7月至2021年4月在本院遵醫囑接受CYP2C19基因多態性臨床檢測的1 036例患者為研究對象，其中男606例，女430例；年齡60～98歲，平均(74.9±12.3)歲。所有研究對象均為湖北地區常駐漢族居民，相互之間無血緣關系。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取 采用層析柱式血液基因組提取試劑盒，從2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝外周血中提取基因組DNA，具體方法參考產品說明書。

1.2.2基因分型 采用PCR-熒光探針法對2個位點的基因進行分型。PCR反應試劑購于武漢友芝友醫療科技有限公司。反應體系為25.0 μL，包括DNA模板2.0 μL，反應液23.0 μL(含有PCR 緩沖液、dNTPs、特異性引物和探針、內標引物)。PCR反應程序：37 ℃ UNG處理10 min，95 ℃預變性5 min，然后95 ℃ 15 s、62 ℃ 60 s反應40個循環，反應結束時采集熒光信號。反應結束后，根據擴增曲線，劃定合適的基線和熒光閾值，得到不同通道Ct值并進行結果判讀，確定每份標本各個位點的基因型。

1.2.3基因型的判定 以CYP2C19*2位點為例，ROX通道為內標基因，所有檢測中ROX通道Ct值≤38。FAM通道Ct值≤36，VIC通道Ct值>36或無Ct值，即表示為GG野生型；FAM、VIC通道Ct值均≤36，則為GA雜合突變型(慢代謝雜合型)；而VIC通道Ct值≤36，FAM通道Ct值>36或無Ct值，即表示為AA純合突變型(慢代謝純合型)。

1.3統計學處理 采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據處理及統計分析。計數資料以例數和百分率表示，各基因型頻率在不同性別、地區、民族間的比較采用χ2檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1湖北地區老年漢族人群CYP2C19基因等位基因頻率和基因型頻率分布 基因分型結果顯示，*2位點等位基因G和A的頻率分別為68.05%和31.95%。*3位點等位基因G的頻率為94.88%，等位基因A的頻率為5.12%。見表1。

表1 CYP2C19 基因*2和*3位點等位基因頻率和基因型頻率分布[n(%)]

2.2不同性別湖北老年漢族人群CYP2C19*2、*3基因型比較 1 036例湖北地區老年漢族人中，CYP2C19*2和*3位點基因型野生型占40.35%，*2和*3的等位基因頻率分別為31.95%、5.12%。606例男性中，*2和*3位點的等位基因頻率分別為32.34%和5.28%；430例女性中，*2和*3位點的等位基因頻率分別為31.40%和4.88%。各基因型在男女群體間的分布比較，差異無統計學意義(χ2=2.56，P=0.77)。見表2。

表2 不同性別 CYP2C19 基因*2 和*3位點基因型和等位基因頻率分布[n(%)]

2.3不同地區漢族人群 CYP2C19*2、*3基因型比較 本研究結果與文獻報道的中國其他9個地區漢族人群基因型比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同地區漢族人群 CYP2C19 基因*2 和*3位點基因型分布比較[n(%)]

2.4不同民族人群CYP2C19*2、*3基因型比較 將本研究及上述中國其他9個地區漢族人群數據分析，與其他民族人群基因型比較分析，其中*2等位基因頻率在回族人群中最高，為49.39%，在哈薩克族人群中發生率最低，為15.42%；*3等位基因頻率在撒拉族人群中最高，為13.64%，在藏族人群中發生率最低，為1.16%。傣族、畬族、黎族及藏族這4個民族人群的CYP2C19基因型分布與漢族人群比較，差異無統計學意義(P>0.05)。維吾爾族、回族、蒙古族、侗族、撒拉族和哈薩克族這6個民族人群中的CYP2C19基因型分布與漢族人群比較，差異有統計學意義(P<0.05)。不同民族 CYP2C19 基因*2 和*3位點基因型分布比較,見表4。

表4 不同民族 CYP2C19 基因*2 和*3位點基因型分布比較[n(%)]

3 討 論

CYP2C19酶活性的個體間差異可導致藥物反應、藥物活性或解毒的顯著差異，因此了解影響CYP2C19酶活性的遺傳因素非常重要。本研究分析了1 036例湖北地區老年漢族人CYP2C19*2和*3位點基因型，野生型占40.35%，*2和*3的等位基因頻率分別為31.95%和5.12%，*2 和 *3等位基因攜帶率與日本、韓國、菲律賓等東亞及東南亞人群攜帶率接近[20]，而明顯高于非洲黑種人和歐洲白種人[21]，從而也證實了CYP2C19的基因多態性分布具有種族和地域差異。

本研究發現，湖北地區老年漢族人群CYP2C19*2、*3基因型分布與云南等9個地區漢族人群比較，差異無統計學意義(P>0.05)。傣族、畬族、黎族及藏族這4個民族人群的CYP2C19基因型分布與漢族人群比較，差異無統計學意義(P>0.05)，而維吾爾族、回族、蒙古族、侗族、撒拉族和哈薩克族這6個民族人群的CYP2C19基因型分布與漢族人群比較，差異有統計學意義(P<0.05)。我國是一個多民族國家，不同民族間文化、飲食，尤其是遺傳背景具有一定差異，所以各民族間CYP2C19基因多態性基因頻率分布也存在一定差異。其中，回族人群*2等位基因頻率最高，野生型*1/*1 的頻率在11個民族中最低(19.51%)；哈薩克族人群野生型和 *3位點純合型突變的發生率均最高，而*2位點純合突變發生率為11個民族中最低；撒拉族人群*2/*3基因型發生率最高(11.11%)。此外，個別民族出現某些基因型缺失的情況，如維吾爾族、蒙古族、黎族、侗族、撒拉族人群中均未檢測到*3/*3 基因型，而藏族人群中未檢測到*3/*3 和*2/*3基因型，可能由于個別基因位點突變率低，也與環境和遺傳因素相關。

綜上所述，CYP2C19*2、*3位點基因型在我國不同地域、民族人群差異較大，通過對CYP2C19*2、*3位點基因型分型，可預測個體藥物代謝速度，進而對特定藥物治療進行個體化指導，也為研制新藥提供基礎，促進個性化醫療的發展。