上海地區(qū)白細胞分類計數(shù)項目分析性能規(guī)范探索

繆穎波， 宋 穎， 趙 強， 諸佩超， 周 維， 王 青， 徐 翀

（上海市臨床檢驗中心臨床血液體液學(xué)研究室，上海 200126）

在檢驗醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，如何設(shè)定分析性能規(guī)范（簡稱性能規(guī)范）備受關(guān)注。設(shè)定性能規(guī)范的研究主要是針對定量測定項目，以數(shù)值形式表達的性能規(guī)范可以和室間質(zhì)量評價及室內(nèi)質(zhì)量控制數(shù)據(jù)反映出的分析性能進行比較。2014年，歐洲臨床化學(xué)和檢驗醫(yī)學(xué)聯(lián)合會（European Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，EFLM）等機構(gòu)在意大利米蘭召開會議[1]，推薦基于臨床需求、生物學(xué)變異或當前技術(shù)水平[2]設(shè)定性能規(guī)范。上海市臨床檢驗中心自2015年起開始組織白細胞分類計數(shù)能力驗證活動，因白細胞分類計數(shù)項目無明確的性能規(guī)范，故以美國臨床實驗室改進修正法規(guī)（the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988 ，CLIA′88）推薦的靶值±3s為標準。本研究旨在探索適用于上海地區(qū)白細胞分類計數(shù)項目的性能規(guī)范，以進一步指導(dǎo)醫(yī)學(xué)實驗室科學(xué)、合理地進行白細胞分類計數(shù)項目的室內(nèi)質(zhì)量控制、性能驗證和實驗室管理，不斷提高檢驗質(zhì)量。

1 材料和方法

1.1 數(shù)據(jù)來源

收集2015—2020年上海市臨床檢驗中心12次共60批次白細胞分類計數(shù)能力驗證活動數(shù)據(jù)，包括中性粒細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)、嗜堿性粒細胞計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)、單核細胞計數(shù)5個絕對值計數(shù)項目。白細胞分類計數(shù)項目能力驗證物品均購自美國R&D公司。

1.2 方法

依據(jù)西班牙臨床化學(xué)和分子病理學(xué)協(xié)會匯總?cè)蚋鞯亟】等巳簷z驗項目個體內(nèi)、個體間生物學(xué)變異數(shù)據(jù)庫[3]，通過公式[4]計算出最佳、最適宜和最低性能規(guī)范。以2015—2020年上海市臨床檢驗中心各年能力驗證活動每個批次所有實驗室回報數(shù)據(jù)“百分差值”的P10～P90計算該批次80%的“百分差值”的分布區(qū)間[5]，不同批次回報數(shù)據(jù)均取最大值。區(qū)間計算公式為：（P10，P90）=（中位數(shù)-TEa%當前，中位數(shù)+TEa%當前），即TEa%當前=1/2（P10，P90），式中TEa為允許總誤差（allowable total error）。比較每次能力驗證活動每個項目5個不同濃度水平樣品能力驗證結(jié)果基于生物學(xué)變異和基于當前技術(shù)水平設(shè)定的4種性能規(guī)范的最低通過率。各項目基于生物學(xué)變異和基于當前技術(shù)水平設(shè)定的性能規(guī)范見表1。

表1 各項目基于生物學(xué)變異和基于當前技術(shù)水平設(shè)定的性能規(guī)范 %

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用上海市臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價評分系統(tǒng)和Medcalc 19.1軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的性能規(guī)范項目

2015—2020 年每年2次的白細胞分類計數(shù)能力驗證活動回報結(jié)果中，中性粒細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)和嗜堿性粒細胞計數(shù)3個項目每次能力驗證活動5個不同濃度水平樣品能力驗證結(jié)果基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的最佳性能規(guī)范的最低通過率分別為80.3%、80.0%和80.5%。淋巴細胞計數(shù)項目所有批次基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的最佳、適宜和最低性能規(guī)范的最低通過率分別為17.6%、36.2%和80.1%。

2.2 基于當前技術(shù)水平導(dǎo)出的性能規(guī)范項目

單核細胞計數(shù)項目所有批次基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的最佳、適宜和最低性能規(guī)范的最低通過率分別為2.6%、13.9%和19.1%，而基于當前技術(shù)水平導(dǎo)出的性能規(guī)范最低通過率為81.2%。

3 討論

在靶值±3s的可接受限規(guī)則下，離散程度越大，控制限就越寬；離散程度越小，控制限就越窄。若結(jié)果超出極窄的控制限，就會被評判為不合格；而在較大的控制限內(nèi)，卻可評判為合格。故不能客觀、準確地評價參評實驗室的檢測水平。中國合格評定國家認可委員會建議能力驗證或室間質(zhì)量評價項目評價界限以固定百分比或數(shù)值作為可接受限[6]。相較于靶值±3s的可接受限規(guī)則，這個建議可以提供給醫(yī)學(xué)實驗室一個明確的、方便使用的性能規(guī)范，且可避免因傳統(tǒng)s倍數(shù)評價方式中s的不同而導(dǎo)致的同一項目不同濃度水平能力驗證結(jié)果的評價標準不同。

目前，我國尚未建立基于我國人群的生物學(xué)變異數(shù)據(jù)庫，因此本研究利用國外學(xué)者基于全球健康人群建立的研究數(shù)據(jù)[3]導(dǎo)出相關(guān)標準（表1）。

本研究結(jié)果顯示，2015—2020年上海地區(qū)白細胞分類計數(shù)能力驗證活動中，中性粒細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)和嗜堿性粒細胞計數(shù)3個項目可達到基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的最佳性能規(guī)范。可能與中性粒細胞計數(shù)是白細胞分類計數(shù)項目中數(shù)值最高、計數(shù)重復(fù)性高的項目有關(guān)；嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞雖然在白細胞中的含量較低，但由于細胞質(zhì)中含有特殊顆粒，采用阻抗法、激光散射法和熒光染色法檢測[7]可清晰辨別。本研究淋巴細胞計數(shù)項目只能達到最低性能規(guī)范，可能是其與單核細胞計數(shù)項目在采用熒光染色法檢測時，側(cè)向熒光和散色光散點圖表現(xiàn)近似等有關(guān)[8-10]。另外，由于單核細胞計數(shù)項目在低濃度水平（＜1.0×109/L）時數(shù)值極低，基于當前技術(shù)水平導(dǎo)出的性能規(guī)范以百分數(shù)表示可能達到200%，如濃度為0.02×109/L時，TEa%當前為225%；濃度為0.1×109/L時，TEa%當前為75%，故采用CLIA′88推薦的低濃度檢測項目以絕對值表示可接受限[11]。分析原因可能與目前無法對血液分析儀的分類計數(shù)結(jié)果進行常規(guī)校準有關(guān)，也可能與目前分類計數(shù)質(zhì)控品是采用人紅細胞添加其他物質(zhì)組成的混懸液，且添加的數(shù)量較少，導(dǎo)致每次檢測結(jié)果差異較大有關(guān)。

本研究建立的白細胞分類計數(shù)項目的性能規(guī)范可應(yīng)用于室間質(zhì)量評價（能力驗證）結(jié)果的分析，醫(yī)學(xué)實驗室也可以將其作為白細胞分類計數(shù)項目的質(zhì)量目標，評價該項目的實驗室不精密度和偏移，計算西格瑪值，選擇合適的質(zhì)控規(guī)則。整體質(zhì)量較高的醫(yī)學(xué)實驗室也可以選擇基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的適宜或最佳性能規(guī)范作為質(zhì)量目標。能力驗證計劃的質(zhì)量目標不一定與醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量目標相一致。能力驗證的要求是以監(jiān)管為主，以大多數(shù)實驗室通過為標準，但作為不同質(zhì)量水平的醫(yī)學(xué)實驗室在達到此要求的同時，可設(shè)定更高的要求，以幫助其提高檢測水平或判斷哪種檢測系統(tǒng)更為優(yōu)秀（性能驗證或方法學(xué)確認）。作為監(jiān)管部門的臨床檢驗中心，可將不同水平的可接受限用于不同場景，如在能力驗證活動中，可使用范圍較大的可接受限，以保證醫(yī)學(xué)實驗室達到基本要求；在正確度驗證活動中，可使用范圍較小的可接受限，以提高各檢測系統(tǒng)的一致性。

綜上所述，基于生物學(xué)變異導(dǎo)出的最佳性能規(guī)范和最低性能規(guī)范分別適用于上海地區(qū)臨床實驗室白細胞分類計數(shù)中中性粒細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)、嗜堿性粒細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)4個項目能力驗證結(jié)果評價；而基于當前技術(shù)水平導(dǎo)出的性能規(guī)范適用于單核細胞計數(shù)項目的能力驗證結(jié)果評價。這一標準可為醫(yī)學(xué)實驗室制定量化的質(zhì)量目標提供依據(jù)，從而持續(xù)提高白細胞分類計數(shù)項目的檢測水平。