Ki-67、P16、Pin1在宮頸癌組織中的表達及臨床意義

陳婷婷，任曉燕，楊棹霞，陶玉梅，袁明明，黃國琴

宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤，其發(fā)展是多步驟的生物過程，由一系列的遺傳和轉錄變化啟動[1]。早期的宮頸癌絕大部分經手術、放療或化療等綜合治療后預后較好，晚期患者的替代治療預后較差。因此，早期診斷宮頸癌并及時給予相應治療可改善患者預后。鱗狀細胞癌和腺癌是常見的組織學亞型，分別約占所有宮頸癌的70%和25%[2]。有研究報道，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌的主要危險因素，而HPV16和HPV18占宮頸癌及癌前病變的70%[3]。HPV的DNA檢測敏感度高，但特異度有限，因此臨床需要更具特異性的標志物進行宮頸癌篩查。Ki-67是一種與細胞周期有關的核蛋白，在細胞周期的所有活躍期均表達。Ki-67被認為是腫瘤發(fā)展的預測因子，其表達水平與多種癌癥的不良預后相關，如乳腺癌和非小細胞肺癌。因此，Ki-67表達水平可反映細胞的增殖狀態(tài)[4]。P16參與調節(jié)細胞內活躍的細胞周期蛋白D/CDK的水平，反饋調節(jié)微小染色體維持蛋白(MCM)、增殖細胞核抗原(PCNA)和細胞周期蛋白E的水平。有研究表明，宮頸癌中P16過度表達是HPV E7蛋白對pRb功能性失活的結果[5]。因此，使用P16免疫細胞化學分析作為傳統(tǒng)宮頸癌篩查方案的補充，可能有助于減少假陽性和假陰性結果[6]。脯氨酰異構酶Pin1在許多腫瘤組織中過度表達，對腫瘤的發(fā)生和進展有著顯著的影響。因此，評估針對Pin1的癌癥治療方案的效果非常重要[7-8]。本研究探討宮頸癌組織中Ki-67、P16、Pin1的表達及臨床意義，旨在為臨床早期診斷和治療提供參考。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2018年3月—2021年5月收治的宮頸癌188例。納入標準：術后病理學檢查確診為宮頸癌；年齡>18歲；經檢查無嚴重內科或外科疾病；臨床資料完整。排除標準：入院前3個月內接受過放療和(或)化療的患者；妊娠期或哺乳期患者。188例中年齡>45歲85例，≤45歲103例；宮頸鱗狀細胞癌163例，宮頸腺癌25例；國際婦產科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期：Ⅰ期98例，Ⅱ期64例，Ⅲ期26例；有淋巴結轉移117例，無淋巴結轉移71例；分化程度：低分化57例，中分化78例，高分化53例。

1.2方法 術中取宮頸癌組織及癌旁正常組織，使用甲醛固定、石蠟包埋，用Leica RM2235全自動輪轉式切片機連續(xù)切片，約5 μm，常規(guī)烘烤脫蠟,最后分別用兔單克隆抗體Ki-67、鼠單克隆抗體P16、兔單克隆抗體Pin1對標本進行免疫組織化學(SP)染色，按照SP檢測試劑盒要求進行。兔單克隆抗體Ki-67、鼠單克隆抗體P16、兔單克隆抗體Pin1及SP檢測試劑盒均購自廣州安必平公司。Ki-67、P16和Pin1主要在細胞核和(或)細胞質中表達，以染色出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒判定為陽性細胞。

1.3觀察指標 觀察Ki-67、P16和Pin1在宮頸癌及癌旁正常組織中的表達情況，并分析陽性表達患者的臨床病理特征。分析Ki-67、P16和Pin1陽性表達的相關性。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SPSS 20.0進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗；相關性分析采用Spearman等級相關分析。α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1Ki-67、P16和Pin1的表達情況 宮頸癌組織中Ki-67、P16、Pin1陽性表達率均高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 宮頸癌組織和癌旁正常組織中Ki-67、P16和Pin1的陽性表達情況[例(%)]

2.2Ki-67、P16、Pin1陽性表達與臨床病理特征的關系 宮頸癌組織中Ki-67和P16陽性表達與年齡、病理類型、FIGO分期、淋巴結轉移和分化程度均無關(P>0.05)；Pin1陽性表達與年齡、FIGO分期、淋巴結轉移和分化程度均無關(P>0.05)，與病理類型有關(P<0.05)。見表2。

表2 Ki-67、P16、Pin1陽性表達與宮頸癌臨床病理特征的關系[例(%)]

2.3Ki-67、P16和Pin1表達的相關性 宮頸癌組織中Ki-67陽性表達與P16表達呈中等正相關(r=0.541，P<0.05)；Ki-67陽性表達與Pin1表達呈較弱正相關(r=0.368，P<0.05)；P16陽性表達與Pin1表達呈中等正相關(r=0.680，P<0.05)。

3 討論

宮頸癌是嚴重危害婦女健康和生命的常見惡性腫瘤，且在世界范圍內有較高的病死率[9-12]，通過改進臨床篩查和診斷方法，其病死率在發(fā)達國家下降了約75%[13]。宮頸活組織檢查為診斷宮頸癌的金標準，然而由于宮頸細胞變異性極高，因此對宮頸癌患者進行準確的臨床診斷和進展風險的預測非常重要[14-16]。

Ki-67是一種只存在于細胞核內的蛋白質，可用于判斷細胞的增殖活性，其位于宮頸上皮內瘤變基底層和副基底層，在具有典型細胞核的細胞中呈陽性表達，隨著宮頸上皮內瘤變程度的增加，其陽性表達水平也隨之升高[17]。本研究結果顯示，宮頸癌組織中Ki-67陽性表達率高于癌旁正常組織，且Ki-67陽性表達與年齡、病理類型、FIGO分期、淋巴結轉移和分化程度均無關。提示Ki-67可作為反映病變程度的敏感生物標志物，與之前的研究結果一致[18]。

P16是一種細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，通過作用于細胞周期的G1檢查點來調節(jié)細胞的增殖。宮頸病變組織中P16的上調與HPV16和18基因的表達有關，表明了P16的上調可引發(fā)HPV感染，導致宮頸癌[19]。本研究結果顯示，宮頸癌組織中P16陽性表達率高于癌旁正常組織，P16的陽性表達與年齡、病理類型、FIGO分期、淋巴結轉移和分化程度均無關，表明P16過度表達是一種有用的標志物。有研究表明，P16在宮頸癌細胞系中表現(xiàn)出致癌活性,表明P16不僅是宮頸腫瘤形成的診斷標志物，也是宮頸癌細胞存活所必需的蛋白[20]。FU等[21]報道P16的消耗可以促進HeLa細胞的化學和放射抗性；ZHANG等[22]發(fā)現(xiàn)敲低P16會抑制SiHa和HeLa細胞系中的細胞增殖、遷移和侵襲；MENDAZA等[23]研究報道，探索P16的亞細胞位置可以提供比P16整體表達檢測更有用的抗腫瘤活性信息。

Pin1是腫瘤進展的關鍵催化劑，涉及脯氨酸介導的磷酸化[24]。Pin1通過破壞癌基因和腫瘤抑制基因之間的平衡來促進腫瘤發(fā)生，并激活許多癌癥驅動途徑[7]。敲低Pin1基因可減少許多腫瘤生長和轉移，如乳腺癌、肺癌和肝癌[25]。本研究結果顯示，宮頸癌組織中Pin1陽性表達率高于癌旁正常組織，Pin1陽性表達與年齡、FIGO分期、淋巴結轉移和分化程度均無關，與病理類型有關。提示Pin1在宮頸癌中有重要作用,且鱗狀細胞癌Pin1陽性表達率低于腺癌，可能與癌細胞的類型不同有關。有研究報道，Pin1抑制劑具有腫瘤抑制作用[26-27]。Pin1抑制劑和激動劑在其他相關疾病中的應用研究有限，需要對Pin1進行更詳細的臨床研究。

已經有研究證明，P16/Ki-67雙染色可提高組織病理學的診斷準確性[27]，但Ki-67、P16和Pin1間的相關性研究報道較少。本研究結果顯示，宮頸癌組織中Ki-67陽性表達與P16和Pin1表達呈正相關，P16陽性表達與Pin1表達呈正相關，推測Ki-67、P16和Pin1可以作為評估宮頸癌病情的生物標志物，并可能存在協(xié)同作用。

綜上所述，Ki-67、P16和Pin1在宮頸癌組織中表達上調，可作為宮頸癌診斷的重要生物標志物。