PTEN、TIMP-1及XIAP在老年喉癌癌前病變中的表達及臨床意義

陳建良，魯慧文，蔣志云，劉燕美

喉癌的病變來源于喉黏膜上皮組織，是一種發生在頭頸部的常見惡性腫瘤，以老年人最為多見[1]。據相關報道，喉癌的發病率占全身惡性腫瘤的2.1%[2]，而目前對喉癌的發病機制并未完全明確。喉癌早期無癥狀或癥狀不典型，因此不被患者所重視，發現時已到中晚期，再給予手術等治療會嚴重影響患者生活質量及預后[3]。因此在喉癌癌前病變期行腫瘤標志物檢測及診斷極為重要。既往文獻顯示，基質金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)與腫瘤細胞增殖呈負相關，第10同源染色體丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)作為具有磷酸酶活性的抑癌基因在喉癌癌前病變中呈低表達狀態，而X-連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)表達上調[4-6]。基于此，本研究檢測PTEN、TIMP-1及XIAP在老年喉癌癌前病變中的表達情況，并分析其臨床意義，旨在為喉癌的早期診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1臨床資料 收集我院2018年4月—2020年4月收治的接受手術治療的97例喉癌新鮮手術切除癌組織作為喉癌組，男59例，女38例，年齡49～77(65.26±5.96)歲；有淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移64例。同時選取上述患者距腫瘤組織3 cm的癌旁正常組織作為癌旁組織組。納入標準：均滿足喉癌診斷標準[7]，經影像學及病理檢查確診；手術治療前均未接受放、化療；病歷資料完整；癌旁組織均為正常黏膜；無凝血功能障礙。排除標準：合并其他系統惡性腫瘤或嚴重器質性疾病者；合并嚴重心血管疾病者；有活動性感染疾病者；認知喪失者；有自身免疫系統或血液系統疾病者。

1.2研究方法

1.2.1PTEN、TIMP-1及XIAP檢測：采用免疫組織化學染色法檢測PTEN、TIMP-1及XIAP表達情況。每例組織蠟塊均切片4張，厚度約4 μm。PTEN、uPA、EZH2標本均經甲醛溶液固定，石蠟包埋、載玻片泡酸、高溫滅菌及多聚賴氨酸涂片等處理。DAB顯色劑顯色，蘇木素復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。PTEN、TIMP-1及XIAP兔多克隆抗體均購自美國Epitomics公司。DAB顯色劑及配套試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2.2判定標準：病理科專業醫師在光學顯微鏡下隨機觀察5個視野，要求每個視野至少計數100個完整的腫瘤細胞。PTEN、TIMP-1及XIAP免疫組織化學染色陽性判定標準[8]：腫瘤細胞胞質或胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒，反之則為陰性。陽性細胞比例評分：≤5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分；染色強度評分：未染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。染色指數=陽性細胞比例評分+染色強度評分。染色指數>3分為陽性；染色指數≤3分為陰性。陽性率=陽性例數/總例數×100%。

1.3觀察指標

1.3.1隨訪情況：對97例喉癌患者進行為期1年的隨訪。隨訪方式：來院復查及電話隨訪并統計1年內由喉癌導致死亡的人數。對比不同組織及生存、死亡組患者PTEN、TIMP-1、XIAP的表達情況。

1.3.2死亡相關影響因素：收集患者的病歷資料，包括姓名、性別、年齡、有無淋巴結轉移及腫瘤分化程度、浸潤深度等。分析喉癌患者死亡的相關危險因素。

2 結果

2.1不同組織中PTEN、TIMP-1、XIAP表達情況 喉癌組織組PTEN、TIMP-1陰性表達率均高于癌旁組織組，XIAP陽性表達率高于癌旁組織組(P<0.05)。見表1。

表1 喉癌和癌旁組織中PTEN、TIMP-1、XIAP表達情況比較[例(%)]

2.2生存組與死亡組患者PTEN、TIMP-1、XIAP的表達情況 97例喉癌隨訪期間有29例死亡，病死率為29.90%。死亡組患者PTEN、TIMP-1陰性表達率高于生存組，XIAP陽性表達率高于生存組(P<0.05)。見表2。

表2 生存組與死亡組患者PTEN、TIMP-1、XIAP的表達情況比較[例(%)]

2.3喉癌患者死亡的相關因素分析 淋巴結轉移、漿膜浸潤、分化程度、PTEN陰性、TIMP-1陰性、XIAP陽性為喉癌患者死亡的獨立危險因素(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3 喉癌死亡的危險因素多因素Logistic回歸分析

2.4PTEN、TIMP-1、XIAP單一檢測及三者聯合檢測對老年喉癌癌前病變的預測價值 PTEN、TIMP-1、XIAP單一檢測及三者聯合檢測的AUC分別為0.942、0.818、0.928、0.979。三者聯合檢測AUC大于PTEN、TIMP-1、XIAP單一檢測，敏感度、特異度高于PTEN、TIMP-1、XIAP單一檢測(P<0.05)。見圖1和表4。

圖1 PTEN、TIMP-1、XIAP單一檢測及聯合檢測對老年喉癌癌前病變的預測價值ROC曲線

表4 PTEN、TIMP-1、XIAP單一檢測及聯合檢測對老年喉癌癌前病變的預測價值

3 討論

喉癌癌前病變是指臨床表現具有惡變潛能的喉部病變，包括喉黏膜白斑病、喉角化病、喉乳頭狀瘤等臨床癥狀、病理學特征和體征表現類似的疾病，組織病理學表現為上皮單純增生和不典型增生[9]。既往文獻報道，喉癌易發生侵襲和轉移，是影響喉癌患者預后及生存的重要因素[10-11]。近年來除了喉部腫瘤以外的腫瘤治療后總生存率均有所提高，喉部惡性腫瘤主要為喉癌，因此加強對喉癌癌前病變的檢測，探索相關治療方法，對提高喉癌患者生存率具有重要意義。

PTEN為第10同源染色體丟失性磷酸酶-張力蛋白基因，TIMP-1為基質金屬蛋白酶抑制劑-1，XIAP為X-連鎖凋亡抑制蛋白，ROC為受試者工作特征 既往文獻報道，TIMP-1是活性最強的基質金屬蛋白酶(MMPs)抑制劑。在正常細胞中TIMP-1表達比例處于平衡狀態，對組織重建、血管形成等具有重要作用[12-13]。而當TIMP-1與MMPs比例失去平衡時，TIMP-1低表達會導致MMPs失活或不能活化，促進腫瘤侵襲和轉移[14]。PTEN基因是近年來發現的具有磷酸酶活性的抑癌基因，可抑制絲裂原活化的蛋白激酶信號通路[15]。文獻報道，乳腺癌、卵巢癌、胃癌、口腔鱗狀細胞癌等多種惡性腫瘤中均存在PTEN基因缺失[16-17]，因此認為PTEN基因與惡性腫瘤發生、發展密切相關。本研究結果顯示，喉癌組織中PTEN、TIMP-1陰性表達率高于癌旁組織，死亡組患者PTEN、TIMP-1陰性表達率高于生存組，進一步證實上述觀點。

XIAP是近年發現的與細胞凋亡有關的蛋白。研究表明，細胞凋亡對于抑制腫瘤生成起著非常關鍵的作用，多數學者在卵巢癌、膀胱癌等腫瘤中均發現XIAP處于高表達狀態[18-19]。本研究結果顯示，XIAP在喉癌組織中高表達，且在喉癌患者中，死亡組患者XIAP陽性率表達高于生存組，與既往研究結果相符[20]。本研究發現，淋巴結轉移、漿膜浸潤、分化程度、PTEN陰性、TIMP-1陰性、XIAP陽性為喉癌患者死亡的獨立危險因素，提示對喉癌癌前病變患者行PTEN、TIMP-1及XIAP檢測對疾病的早期預測具有積極作用。基于此，筆者通過繪制ROC曲線發現，PTEN、TIMP-1、XIAP三者聯合檢測對老年喉癌癌前病變預測價值的AUC為0.979，敏感度為91.65%、特異度為92.45%，均高于各指標單一檢測，提示三者聯合檢測比單一檢測對老年喉癌癌前病變預后具有較高的判斷價值。

綜上所述，PTEN、TIMP-1及XIAP聯合檢測有助于老年人喉癌癌前病變的早期診斷。