現代分離技術在藥品分析中的應用研究進展

唐郡遙

（沈陽藥科大學 藥學院，遼寧 沈陽 110016）

藥物分析是藥品質量保障的關鍵，隨著人們對美好生活的追求，醫藥工業面臨著激烈的國際競爭，因此對藥物分析提出了更高的要求。在藥品結構認證及藥品鑒定中常采用色譜法與毛細管電泳法解決問題。氣相色譜技術現已被廣泛應用，是一種高選擇性、操作簡單的技術，一般對固定液載體要求較高，在中藥揮發油分析、體內藥物分析、溶劑殘留分析中發揮重要作用。高效液相色譜技術由于不受試樣揮發性限制，應用范圍更廣，選擇性高。毛細管電泳法注效很高，溶劑和試樣消耗少，通過改變操作與緩沖溶液組成可以使選擇性提高，從而被廣泛應用。

1 氣相色譜法

1.1 西藥

托莫西汀的半衰期約為5 h，在代謝不良者中可達 21 h，因此分析托莫西汀含量是非常重要的。KUL[1]等利用氣相色譜法分析血漿中托莫西汀的含量。該方法分析時間短，樣品制備簡單，定量下限為200 ng·mL-1，相關系數＞0.99。全血樣品雙氯芬酸雖被認為是安全性較高的藥物，但對于動物群類而言具有劇毒性。因此 SZPOT[2]等結合電子沖擊建立了一種超靈敏的氣相色譜法，經采用雙氯芬酸-d4作為內標，在多反應模式下測定分析物，回收率和基質效應值分別在 92.2%~105.9%和 7.8%~5.9%之間。同時，氣相色譜也廣泛應用于分析沉淀藥物的測定標準，DAVIDSON[3]等在此提供了在 3個不同實驗室的5種不同儀器上測量的13種不同藥物標準的GC-MS測量的附加結果，經過數據分析，結果顯示一些離子豐度與相關系數超過0.9，得出結論GC方法測定更嚴格。LIU[4]等在沙坦類藥物中，建立了一種氣相色譜-質譜方法，通過測定沙坦類藥物中的n-亞硝胺從而觀測檢測范圍，在新的氣相色譜-質譜研究下，亞硝胺的沙坦物質檢測范圍從0.002 μg·g-1到 0.150 μg·g-1，回收率為 87.68%~123.76%。α-吡咯啉酮（α-PVP）可以檢測急性中毒患者，GRAPP[5]等通過氣相色譜-質譜方法檢測出α-PVP資料濃度為29 ng·mL-1，同時檢測出尿液乙酰化后的產物。

1.2 中藥

中藥中提取的成分精油（EOs）被認為是在抗真菌物質應用中很好的天然替代品，MOU[6]等通過采用氣相色譜-質譜法分析化學成分，以及主成分分析（PCA）確定EOs組成與生境之間可能的關系，得出開發 CPEOs微乳液（M-CPEOs），可以提高生物利用度的結論。菖蒲根莖是一種化濕開胃較好的藥物，在菖蒲的石油醚提取物研究中，PRABHA[7]等利用氣相色譜分析，發現其中5種化合物可能對植物病原體敏感，認為可能與治療微生物疾病有關。西達藥是由多種中草藥合成的，MEENA[8]等利用氣相色譜質譜分析，鑒定出西達藥中有24種化合物，其中的十六烷酸具有抗真菌作用，以此證明其在感染病中應用。連花清瘟膠囊是一種抗病毒常用藥，但其中結構復雜，故很少人研究其中的化學結構。FU[9]等采用氣相色譜結合高效液相色譜方法，證明有17種化合物特征，主成分為薄荷醇，其他為萜類化合物。WAN[10]等采用氣相色譜法對雙唑草腈原藥進行分析，以三氯甲烷為溶劑，結果表明回歸系數為0.999 8，平均回收率為100.20%。

陳皮與青皮均為常用中藥，二者化學組成成分相似，但也有著差異。ZHAO[11]等利用陳皮、青皮含有大量揮發性成分這一性質，通過二維氣相色譜方法，分析樣品中的揮發成分進行鑒別，并且二維氣相色譜鑒定出的組分多于普通氣相色譜，降低了化合物的共洗脫。當歸是一種可以用來止血的中藥材，ZHANG[12]等利用氣相色譜-質譜技術，對當歸成分進行分析，當采用甲醇超聲提取15 min時，鑒定出33種化合物，可以證明氣相色譜-質譜方法可以有效研究中藥成分。乳香揮發油具有陣痛功效，WANG[13]等利用氣相色譜質譜方法分析乳香揮發油成分，并進行結構分析，證明其中乙酸辛酯、萜品油烯等化學成分16個，可能與靶點作用，通過神經活動調節達到鎮痛作用。ZHANG[14]等利用氣相色譜質譜結合固相萃取方法，鑒定蒼術水煎液的化學成分，結果確定茅術醇等 4種化學成分，回收率達93.23%～104.52%。連翹是木犀科植物連翹的果實，具有清熱解毒作用，FENG[15]等通過不同時期揮發油成分進行氣相色譜質譜方法研究，共鑒定出 28種化學成分，比較不同時期成分，發現4種差異成分。通過研究中藥材成分，可以為后期藥材開發利用提供依據，XUE[16]等通過對照法，利用氣相色譜-質譜技術對太行菊揮發油成分進行分析，證明太行菊揮發油主要含有醇類、萜烯類、酮類等成分。中藥材是我國寶貴的資源，在其種植時常噴灑農藥以保證產率，REN[17]等通過氣相色譜法檢測藥材中易氣化、熱穩定的農藥殘留，結果證明各組分的分離效果較好。草藥壓縮球可以緩解炎癥與疼痛，TANGYUENYONGWATANA[18]等采用頂空氣相色譜-質譜技術，測定中草藥中的揮發性成分，結果證明有51種揮發成分。

2 高效液相色譜法

2.1 西藥

HPLC是最適合檢測和質量控制最常用的技術，ARAúJO[19]等對金絲桃甲烷提取物進行 HPLC檢驗，保留時間為22.93 min，KOYU[20]等用HPLC檢測了不同條件下穿葉草提取物貯藏條件的影響。在室溫下 6個月，HYP的降解率約為 62%，而在40 ℃下，降解量為85%，在5 ℃時的最大降解率為45%。因此，HPLC用于植物提取物中以及藥物和給藥系統中的穩定性研究是可行的。HPLC的使用提供了固體劑型中HYP的含量測定，也證明了在這些藥物劑型的穩定性研究中是可行的。ZHENG[21]等利用高效液相色譜結合液液萃取測定人血漿中9種精神類藥物，在甲醇甲酸水溶液洗脫之后，得到較好提取率，相關系數大于 0.995，精度為77.24%~1 217.71%。癲癇病是較為普通的神經疾病之一，人們將在唾液中檢測抗癲癇藥物作為有效的替代方法，CARONA[22]等利用高效液相色譜技術進行檢測，結果證明精度值在 3.45%~10.76%之間變化。為了研究注射用乙酰谷酰胺中乙酰谷酰胺的含量，ZHOU[23]等利用高效液相色譜方法，以磷酸鹽為緩沖液，檢測波長為210 nm下進行檢測。結果表明建立的方法穩定性高，可有效測定乙酰谷酰胺的含量和有關物質。鹽酸阿霉素是一種抗腫瘤藥物，CHEN[24]等通過高效液相色譜法，以甲醇-水對鹽酸阿霉素進行分析。平均回收率為97%～116%，相對標準偏差均小于0.3%。復方制劑厄貝沙坦氫氯噻嗪片可以治療原發性高血壓，ZHAO[25]等利用高效液相色譜方法進行測定，以磷酸二氫鉀作為緩沖液，結果表明精密度和重復性均小于5.0%。

2.2 中藥

桂花根可以治療筋骨疼痛，LIAO[26]等通過高效液相色譜法，測定桂花根中提取物的化學成分，在高效液相色譜法的基礎上，加以定性與定量分析，提高靈敏度，并首次發現了根中32種成分。文大麻湯是一種傳統草藥處方，SEO[27]等采用高效液相色譜法對其8種主要成分進行分析，對精密度與精度進行驗證，是一種評價大麻湯藥質量有效的測評方法。金銀花是眾多草本植物之一，其中含有抗氧化成分。CHO[28]等對金銀花熱水提取物中的多酚類成分進行高效液相色譜研究，結果證明4種成分被證實是多酚葡萄糖醛酸結合物，此方法還可以用于多酚偶聯物相關代謝過程的監測。靈龍感冒藥的成分已被知曉，但含量還未測定，TAN[29]等利用高效液相色譜法并洗脫測定其中含量，樣品回收率均在97%以上，證明該方法可以對靈龍感冒膠囊中9種成分進行同時測定。益氣逐瘀利水方可以治療腰間盤突出，CHEN[30]等通過高效液相色譜法檢測其成分，證明此方法穩定性強。

3 毛細管電泳法

3.1 西藥

ANSAR[31]等分離藥物通過紫外-可見檢測的毛細管電泳法，證明阿霉素極限定量為0.5 μmol·L-1，也可以從脂質體中量化未封裝的藥物。糖尿病是最常見的慢性病之一，需要采用多種藥物共同治療，AMIRA[32]等通過毛細管電泳方法測定藥物中二甲雙胍、沙格列汀等藥物，結果證明r＞0.999 3，降低實驗成本。阿霉素是一種抗腫瘤藥物，ARRIAGA[33]等利用毛細管電泳結合熒光檢測方法，測定單核中阿霉素含量，證明該種方法可以避免細胞環境對阿霉素影響，是一種有效的測定分析方式。神經霉素是一種陣痛藥物，但若注射高劑量則會引發呼吸抑制，因此Li[34]等采用毛細管電泳結合熒光分析測定其含量，證明該方法重現性好，準確度高。

3.2 中藥

復方甘草片對于治療咳嗽有所作用，GONG[35]等對7種主要成分進行定量分析，其中Mor含量在0.37~0.44 mg范圍內，證明是一種既環保又可以分離良好的技術。鼠尾草是一種治療多種疾病的中草藥，VESELINA[36]等通過毛細管電泳法收集其中迷迭香酸與焦石酸含量，二者的相關系數均為0.998，并發現與丹參樣品有相關性，為后期鼠尾草作為草藥以及功能性食品提供了依據。山梨醇是腎衰竭病人常用的利尿劑，XIAO[37]等證明在電泳運行中，加入的硼酸鹽緩沖溶液可以促進復合物形成，是一種對糖醇定量分析的方法。麻黃堿可以預防支氣管哮喘，DENG[38]等采用毛細管電泳法分離麻黃草中的兩種生物堿，在低電導率的條件下，結果證明檢測靈敏度約擴大了1 000倍。

4 結 論

本文總結了多種現代技術在藥物分析中應用，其中包括氣相色譜、高效液相色譜、毛細管電泳、毛細管電泳-熒光檢測方法。對最近發表的文章回顧表明，氣相色譜與高效液相色譜在中藥、西藥分析中在保證樣品有效性安全性的條件下，具有簡單、快速、敏感的優點，毛細管電泳等方法可以提高靈敏度，也具有廣闊的應用前景。