全自動固相萃取氣相色譜-質譜法測定蔬菜中五氯硝基苯和百菌清殘留量

王 鐘，趙志強，徐文杰，何 漪，王 敏

（1.淄博市疾病預防控制中心，山東淄博 255026；2.淄博市環境有機污染與人群健康監測分析重點實驗室，山東淄博 255026）

蔬菜安全是食品安全中十分重要的方面之一，蔬菜在食品中占有十分重要的地位，蔬菜中的農藥殘留量常作為評價食品安全性的主要內容之一[1-2]。為防止蔬菜在生長過程中遭受病蟲害，防止蔬菜在儲存和運輸過程中變質，噴灑農藥和殺菌劑成為有效的措施之一[3]。但是，蔬菜中殘留農藥殺菌劑的毒性嚴重危害人們的身體健康[4]。為確保蔬菜的質量安全，加強對蔬菜農藥殘留檢測方法及農藥污染控制措施的研究就顯得尤為重要。農藥五氯硝基苯具有化學性質穩定、不易揮發、不易氧化分解等特點，對多種蔬菜的苗期病害有較好的防治效果[5]。百菌清是一種高效、低毒的廣譜殺菌劑，已被廣泛應用于蔬菜病害的防治。對于文獻報道的五氯硝基苯農藥殘留量和百菌清殘留量的檢測方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法[6-9]。全自動固相萃取氣相色譜-質譜法測定蔬菜中五氯硝基苯和百菌清殘留量的檢測方法鮮有報道[10-11]。本文研究了全自動固相萃取儀凈化，用氣相色譜質譜儀同時測定蔬菜中的五氯硝基苯和百菌清農藥殘留量的檢測方法，取得了較好的結果。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

氣相色譜-質譜儀（GC-MS QP 2010plus）；全自動固相萃取儀（Reeko Fotector Plus，48位）；氮氣吹干儀（OA-SYS/美國Organomation）；渦旋混勻器（SZ-1型，江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠）；分析天平（賽多利斯sartorius CP225D）：感量0.000 01 g；高速組織搗碎機（Retsch GM200）；離心機（Thermo ST 16R）：轉速5 000 r/min；旋轉蒸發儀（STEROGLASS STRIKE 300）；乙腈（默克，色譜純）；丙酮（默克，色譜純）；甲苯（默克，色譜純）；正己烷（默克，色譜純）；Florisil固相萃取柱（安捷倫公司；1 g，6 mL）；氯化鈉（國藥集團，優級純）；無水硫酸鈉（國藥集團，分析純）：經550 ℃烘烤4 h，儲存于干燥器中，冷卻后備用；五氯硝基苯（GSB 05-1845-2016，100 μg/mL），定值單位：農業部環保科研監測所；百菌清（GSB05-2312-2016，100 μg/mL），定值單位：農業部環保科研監測所。內標溶液配制：稱取美國AccuStandard 環氧七氯純品2.5 mg，用甲苯溶解并定容至100 mL，搖勻，濃度為25 mg/L。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的制備與保存

取蔬菜（以大白菜為例）樣品1 kg左右，取可食部分用勻漿儀充分粉碎。所取樣品平均分為2份，1份供測定，另1份放置于-20 ℃冰箱中保存，備用。

1.2.2 提取

稱取15.00 g蔬菜樣品（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入60 μL內標溶液，加入5.0 g氯化鈉，充分振搖混勻，加入30.0 mL乙腈，渦旋混勻1 min后置于超聲波儀中超聲20 min，加入8 g無水硫酸鈉，再渦旋混勻1 min，于4 000 r/min離心5 min，吸取上清液20.0 mL至25 mL離心管中，于35 ℃水浴中氮吹濃縮至近干，加入5.0 mL正己烷復溶，待凈化。

1.2.3 凈化和濃縮

取Florisil固相萃取柱（1 g，6 mL），依次用4 mL丙酮+正己烷（1∶9，v/v）溶液和4 mL正己烷活化后，吸取1.2.2提取液于固相萃取柱中并及時收集流出液，用6 mL丙酮+正己烷（1∶9，v/v）溶液洗脫，收集并合并洗脫液，于35 ℃水浴中氮吹濃縮至近干，用正己烷定容至1.00 mL，于GC-MS進樣分析，全自動固相萃取儀條件見表1。

表1 全自動固相萃取儀凈化條件

1.2.4 氣相色譜-質譜儀條件

色譜柱：石英毛細管質譜柱（RTX-5 MS，30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱箱溫度控制程序：初始溫度40 ℃，保持1 min，以30 ℃/min速率升至130 ℃，保持0 min，再以5 ℃/min速率升至250 ℃，保持5 min；色譜儀載氣類型：高純氦氣（純度＞99.999%），流速為1.9 mL/min；進樣口溫度：280 ℃；進樣方式：不分流進樣，1.5 min后開啟分流閥；傳輸線溫度：280 ℃；進樣量體積：1.0 μL；電子轟擊源（EI）能量：70 eV；離子源溫度：230 ℃；溶劑延遲：9.5 min；掃描模式：選擇性離子檢測（SIM）；定量方法：峰面積內標法定量，目標物及內標保留時間及定性、定量離子見表2。

表2 保留時間和質譜特征離子

1.2.5 標準曲線繪制

分別吸取五氯硝基苯、百菌清標準儲備溶液各0 μL、1.0 μL、2.0 μL、5.0 μL、10.0 μL 和 20.0 μL 于 6個1 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，每個容量瓶中加入40 μL內標溶液，配制成混合標準工作溶液。

1.2.6 測定

（1）定性測定。對混合標準溶液及樣液按上述規定的條件進行測定時，如果樣液與混合標準溶液的選擇離子圖中在相同保留時間有峰出現，則根據定性選擇離子的種類及其豐度比對其進行陽性確證。

（2）定量測定。取凈化濃縮后的樣品溶液，按照上述儀器條件，進樣分析。將目標物和內標物響應值的比值帶入標準曲線，計算目標物濃度。

2 結果與討論

2.1 優化固相萃取條件

2.1.1 選擇合適的固相萃取凈化柱

在固相萃取法中，常用的吸附劑有反相C18、弗羅里硅土、石墨化碳黑、中性氧化鋁等。本文試驗了弗羅里硅土、反相C18、中性氧化鋁和石墨化碳黑的加標回收率。當用弗羅里硅土作為固相萃取劑時，五氯硝基苯和百菌清的回收率均在90%左右；當使用中性氧化鋁為固相萃取劑，兩者的回收率在70%左右，均高于反相C18和石墨化炭黑固相萃取柱；但中性氧化鋁的活性易受到樣品中含水量變化的影響，在相同條件下，其對色素的吸附能力比弗羅里硅土差，因此，最終選用弗羅里硅土為填充劑的固相萃取柱。

2.1.2 選擇固相萃取劑用量（固相萃取柱的規格）

在固相萃取法中，固相萃取柱填料的用量過少，凈化效果差；但如果填料用量過多，則需要用更大量的洗脫溶劑洗脫。試驗研究發現，當弗羅里硅土與蔬菜基質的質量比為1∶10時，方法回收率較高，且凈化效果較好。故本試驗選擇弗羅里固相萃取劑的用量為1.0 g（實際凈化蔬菜基質為10 g）。

2.1.3 選擇洗脫溶劑種類和洗脫液體積

大多數有機氯農藥能較好的溶解在溶劑丙酮和正己烷中。根據此特點，本試驗分別以正己烷、丙酮+正己烷（1∶9）、丙酮+正己烷（1+1）和丙酮+正己烷（1+9）為洗脫溶劑，各取10 mL用量來考察對五氯硝基苯和百菌清的洗脫回收率。試驗研究發現，當用正己烷作為洗脫溶劑時，對目標物的洗脫強度較弱，回收率較低；當用丙酮+正己烷（1+9）作為洗脫溶劑時，對目標物的洗脫效果最好，五氯硝基苯和百菌清的添加回收率均在90%以上。在選定的丙酮+正己烷（1+9）作為洗脫溶劑的條件下，用20 mL洗脫溶劑考察了最佳用量，見圖1。由圖1可知，當用10 mL洗脫液時可以把90%以上的目標物洗脫下來。但當隨著洗脫液用量的進一步增大，加標回收率變化不明顯。最后確定最佳洗脫劑為丙酮+正己烷（1+9），用量為10 mL。

圖1 丙酮+正己烷（V/V=1+9）洗脫曲線

2.2 方法的線性范圍與最低檢測濃度

試驗表明，在所選五氯硝基苯、百菌清標準溶液濃度在0.10～2.00 μg/mL，按照上述優化好的儀器條件進樣分析，色譜圖見圖2。以濃度為橫坐標，以目標物的響應值（峰面積）與內標物響應值（峰面積）的比值為縱坐標繪制標準曲線，五氯硝基苯的方程為y=-0.006 8+0.28x，相關系數r大于0.999；百菌清的方程為y=-0.063+0.98x，相關系數r大于0.999。以3倍的基線噪音計算檢出限，當取樣量為15.0 g時，方法的最低檢測濃度分別為五氯硝基苯0.003 mg/kg，百菌清0.001 mg/kg。

圖2 標準色譜圖（1.0 μg/mL）

2.3 精密度和準確度試驗

稱取蔬菜（以大白菜為例）4份，1份作為本底檢測，另3份分別加入濃度0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、1.50 μg/mL的五氯硝基苯和百菌清混合標準溶液各1.0 mL進行加標回收試驗來表示方法的準確度。同時對加標樣品進行（n=10）多次重復測定，用結果的相對標準偏差（RSD）來表示方法的精密度。試驗結果顯示，五氯硝基苯加標回收率為82.6%～91.6%，精密度為7.0%～9.6%；百菌清的加標回收率為83.0%～95.1%，精密度為6.5%～11.0%。

3 結論

本文研究了全自動固相萃取氣相色譜-質譜聯用法同時測定蔬菜中五氯硝基苯、百菌清農藥殘留量。該方法檢測全過程全自動化程度高、精密度好、準確度高、檢出限低，適用于蔬菜中五氯硝基苯、百菌清殘留量的測定要求。