利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術在無痰、菌陰肺結核患者中的臨床診斷價值

林益敏 李 敏 陳鳳娣

廣東省清遠市人民醫院感染科，廣東清遠 511500

肺結核是具有較高危險性的慢性傳染疾病，是全球范圍內均廣泛關注的重大公共衛生問題之一，肺結核的形成是結核分支桿菌感染侵襲肺部引起的疾病，目前我國的肺結核患者人數在世界上排名第二，肺結核成為威脅我國國民生命健康安全的重要因素，抓住早期診斷機會對患者進行病情控制并及時控制傳染源具有十分重要的作用[1]。結核分枝桿菌陰肺結核雖然屬于非傳染性肺結核，但是患者隨著病情發展可能成為傳染原，目前臨床上較為常見的診斷方式有結核分枝桿菌DNA和涂片抗酸染色法檢測[2]。結核分枝桿菌DNA檢測并不能完全明確患者病情，通常還需要結合其他檢查才能確診，抗酸涂片雖然檢測較為快速但是檢測準確性較低，兩種檢測方式均有明顯的局限性，對盡早控制病情發展或控制傳染效果不佳[2-3]。尤其是對于涂片檢測呈現陰性或無痰的患者而言尋找快速準確的診斷方式十分重要。隨著分子生物學診斷技術的不斷進步和發展，利福平（Rifampin，RIF）耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術（Real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification detection technology for drug resistance，Xpert MTB/RIF）在結核分枝桿菌陰肺結核患者檢測中的價值受到廣泛關注[4]。本研究通過對結核分枝桿菌陰肺結核患者使用Xpert MTB/RIF技術檢測的效果進行分析，為臨床肺結核檢測提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年10月清遠市人民醫院收治的56例疑似無痰、菌陰肺結核患者作為研究對象，其中男32例，女 24例；年齡 19～83歲，平均（48.90±6.37）歲。納入標準：①患者均經即時、夜間及晨間3次痰液涂片顯示為陰性且經支氣管檢查符合《中國結核病防治規劃實施工作指南 2008年版》[5]的相關要求；②患者均存在發熱、咯血、咳嗽及胸痛等肺結核臨床癥狀；③患者經臨床影像學檢查經 X線片、痰涂片抗酸染色等檢查均未見典型的肺結核表現；④患者臨床相關檢查資料完善。排除標準：①合并有肺外結核、復治肺結核的患者或存在其他感染性疾病的患者；②患有哮喘疾病，呼吸衰竭的患者；③有支氣管鏡檢查禁忌證的患者；④不規則應用抗結核菌藥物的患者；⑤患者存在明顯的精神障礙或意識障礙，治療依從性差。本研究經醫院醫學倫理委員會審核并批準，患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

①支氣管鏡檢查：所有患者使用奧林巴斯纖維支氣管鏡進行檢查，根據胸部 CT選擇病變累及肺段的支氣管進行刷檢后涂片，然后進行灌洗，將生理鹽水10～20 ml通過纖支鏡灌入相應支氣管肺段內，然后負壓吸引回收灌洗液至無菌瓶內，可重復灌洗 2～3次，收集灌洗液 10 ml左右，送實驗室后平均分裝在 A、B、C三管中，離心半徑13.5 cm，3000 r/min離心20 min后備檢。②Xpert MTB/RIF檢測：將其中一管灌洗液離心后棄去上清液留取1 ml與含氫氧化鈉及異丙醇的處理液按1∶2比例混合，在渦旋震蕩器上震蕩15～30 s，室溫靜置 15 min，取混合液 2 ml轉移至一次性多室塑料反應盒中，然后將反應盒置于Gene-Xpert儀器進行全自動檢測，約2 h即可讀取結果。

所有患者完成標本的采集后均行病理學活組織檢查，肺泡灌洗液分別行抗酸染色涂片、結核分支桿菌復合群DNA、Xpert MTB/RIF檢測。

1.3 觀察指標及評價標準

以患者臨床病理學活檢結果為金標準，比較三種檢測方式陽性預測值、陰性預測值情況及靈敏度、特異度情況。A表示真陽性例數，B表示假陽性例數，C表示假陰性例數，D表示真陰性例數。靈敏度=A/（A+C）；特異度=D/（B+D）；陽性預測值=A/（A+B）×100%，陰性預測值=D/（C+D）×100%）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，采用 t檢驗；計數資料用率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2.結果

Xpert MTB/RIF技術檢測的靈敏度、陽性預測值及陰性預測值均高于結核分支桿菌復合群DNA檢測及抗酸涂片檢測，特異度高于結核分支桿菌復合群DNA檢測，差異有統計學意義（P<0.05）；結核分支桿菌復合群DNA檢測靈敏度高于抗酸涂片檢測，特異度、陽性預測值低于抗酸涂片檢測，差異有統計學意義（P<0.05）（表 1、表 2）。

表1 三種檢測方式與病理學活檢檢出情況比較（例）

表2 三種檢測方式診斷效果比較[%（n/N）

3 討論

近年來，隨著社會的發展，人們的生活水平得到了極大的提升，然而空氣污染問題卻變得愈發嚴重，導致呼吸系統疾病的患病率也隨之增長，肺結核作為一種臨床上較為常見的呼吸系統疾病，其具有極高的傳染性，患者的臨床癥狀主要表現為咳痰、胸痛、呼吸困難、乏力等，對其日常生活影響較大，但若能夠得到及時且正確的治療，大部分患者都可以痊愈[7]。但是抓住患者早期診療的良好時機具有一定的難度，這主要是因為早期診斷采用的方法具有明顯的局限性。目前通常針對肺結核患者進行痰涂片檢查以求達到早期診斷的效果，抗酸涂片檢測雖然能夠達到快速檢測的目的，但是檢測敏感度與診斷準確性較低，尤其是對于結核分枝桿菌陰肺結核或無痰的患者而言診斷難度更大[8]。這類患者痰液中含菌量較少，檢測難度更大，容易造成漏診或誤診狀況[9]。因此尋找提高結核分枝桿菌陰肺結核患者早期診斷準確性的方法，對于及時控制患者病情，減少傳染風險具有積極作用。在臨床上，對肺結核患者的常規治療以利福平等抗結核藥物為主，在治療過程中，部分患者會出現耐藥情況，進而引發耐多藥肺結核疾病的出現，因此利福平耐藥檢測是肺結核患者耐藥性檢測以及耐多藥檢測的主要參考標準，對盡快確定患者后續治療方案具有積極作用[10-11]。

本研究結果顯示，Xpert MTB/RIF技術檢測的靈敏度、陽性預測值及陰性預測值均高于結核分支桿菌復合群DNA檢測及抗酸涂片檢測，特異度高于結核分支桿菌復合群DNA檢測，差異有統計學意義（P<0.05），指出Xpert MTB/RIF技術在診斷結核分枝桿菌陰肺結核患者的準確性較高，在患者診斷及非患者篩選中的作用較好，診斷準確性高于抗酸涂片檢測，檢測結果獲得時間可早于病理活檢，符合早期診斷要求，因而將其作為臨床診斷的方式具有較高的價值[12]。Xpert MTB/RIF是一種半巢式實時熒光定量擴增體外診斷技術，能夠對與結核分枝桿菌特有的且和利福平耐藥存在密切聯系的rpoB基因片段進行擴增檢測，對檢測標本中的結核分枝桿菌載量產生反應，操作簡單，結果生成速度快，具有明顯的優勢[13-14]。除了診斷作用之外，Xpert MTB/RIF技術還能快速檢出患者的耐藥情況，盡快確定治療方案。劉巧等[15]的研究同樣指出Xpert MTB/RIF技術與痰涂片檢測的時效性相當且診斷準確性與液體培養相仿，本研究結果與之吻合。

綜上所述，Xpert MTB/RIF技術應用于結核分枝桿菌陰肺結核患者的臨床檢測和藥敏實驗檢測具有重要作用，具有較高的準確性，檢測速度快，能夠盡快檢測患者耐藥情況，有利于患者早期診斷及治療方案的確定，可盡早控制患者病情，減少傳染風險，具有極高的臨床應用價值。