何首烏復(fù)方口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

蘇 穆,王遠(yuǎn)敏,羅 敏

(遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院/遵義市第一人民醫(yī)院,貴州 遵義563000)

何首烏復(fù)方口服液是貴州大學(xué)藥物制劑室研發(fā)的專(zhuān)利制劑,其主要功能為補(bǔ)肝腎、行氣活血,用于肝腎陰虛、頭暈?zāi)炕琛㈨毎l(fā)早白等癥的治療。何首烏復(fù)方口服液中有何首烏、黃精、太子參等多種中藥成分,何首烏作為主要藥物發(fā)揮了重要的治療作用。何首烏中二苯乙烯苷(TSG)是主要有效活性成分[1],對(duì)于神經(jīng)、心血管、消化、內(nèi)分泌、泌尿、呼吸系統(tǒng)等疾病都有治療作用[2-4]。具有保護(hù)神經(jīng)、提高記憶力、抗衰老、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、抗炎、保肝、保護(hù)腎臟、抗骨質(zhì)疏松、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)造血功能、抗腫瘤等作用[5-7]。本研究通過(guò)一定的制劑工藝研制何首烏復(fù)方口服液,應(yīng)用二苯乙烯苷(TSG)定性鑒別和含量測(cè)定來(lái)建立準(zhǔn)確、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[10-11],為何首烏復(fù)方口服液的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料與設(shè)備

1.1 儀器

FA1004型電子分析天平(上海分析儀器總廠);UV200型紫外檢測(cè)器(大連依利特分析儀器有限公司);LC-20AT型液相色譜儀泵主機(jī)(島津);QT-330柱溫箱(旗美)。

1.2 原料與試劑

本研究所用何首烏由同濟(jì)堂藥房提供,由貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院何順志教授鑒定為何首烏正品;2,3,5,4-四羥基二苯乙烯-2-0一β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品研究院檢定,批號(hào):110943-201003);何首烏復(fù)方口服液(自制);甲醇(色譜純,天津市大茂化學(xué)試劑廠);乙腈(色譜純,天津市大茂化學(xué)試劑廠);乙醇(色譜純,重慶川東化工[集團(tuán)]有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 復(fù)方口服液的鑒別

取何首烏復(fù)方口服液20 m L,濃縮至1 m L,加乙醇4 m L,作為供試品溶液。另取二苯乙烯苷對(duì)照品,加乙醇制成每1m L含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液[9]。按照薄層色譜法(2015年《中國(guó)藥典》附錄V IB)試驗(yàn)[8],分別取上述3種溶液各10μL,點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯∶丙酮∶水∶甲苯(6.5∶5.5∶1.2∶0.7)混合溶液的上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi),取出,晾干,以紫外燈365nm檢識(shí),供試品色譜中,與對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同色斑,陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 鑒別結(jié)果

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(25∶75);流速:1 m L/min;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng):320 nm;進(jìn)樣量:20μL。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密吸取復(fù)方口服液5 m L,置10m L容量瓶中,加甲醇定容,搖勻,超聲處理20 min,放置至室溫,微孔濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液,備用。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)品4.5mg精密稱(chēng)定,置于10m L容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,即得濃度為0.45 mg/m L的對(duì)照品溶液。

2.2.4 陰性對(duì)照品的制備 按何首烏復(fù)方口服液處方及制備工藝制備不含制何首烏的陰性樣品,按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.5 專(zhuān)屬性考察 精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液各20μL,按色譜條件:色譜柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(25∶75);流速:1.0 m L/min;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng):320 nm;進(jìn)樣量:20μL,進(jìn)行進(jìn)樣[12]。二苯乙烯苷對(duì)照品與供試品相同保留時(shí)間出現(xiàn)色譜峰,而陰性對(duì)照品與二苯乙烯苷對(duì)照品相同保留時(shí)間無(wú)色譜峰出現(xiàn),證明口服液中的其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。見(jiàn)圖2、圖3、圖4。

圖2 二苯乙烯苷對(duì)照品色譜

圖3 供試品色譜

圖4 陰性對(duì)照色譜

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)量二苯乙烯苷對(duì)照品溶液0.5m L、1.0m L、1.5m L、2.0m L、2.5m L,定容于10m L量瓶中,精密稱(chēng)量各濃度對(duì)照品溶液20μL,按色譜條件測(cè)定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo),對(duì)照品溶液濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得回歸方程:y=47074x-195 386(r=0.999 3),表明二苯乙烯苷濃度在22.5~112.5μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。見(jiàn)圖5。

圖5 何首烏二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為0.45 mg/m L的對(duì)照品溶液20μL,按色譜條件注入液相色譜儀,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積。RSD=1.82%<2%,表明該方法精密度良好。見(jiàn)表1。

表1 精密度試驗(yàn)

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批濃度為0.45 mg/mL的對(duì)照品溶液,分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h按色譜條件進(jìn)樣20μL,測(cè)定峰面積。RSD=1.62%,<2%,說(shuō)明樣品溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。見(jiàn)表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一批何首烏復(fù)方口服液,按供試品溶液制備法平行制備6份供試品溶液,按色譜條件進(jìn)樣20μL,測(cè)定峰面積。RSD=0.49%<2%,二苯乙烯苷平均含量為55.46μg/m L,說(shuō)明該方法重復(fù)性好。見(jiàn)表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密移取已知含量的樣品6份,分別精密加入二苯乙烯苷對(duì)照品適量,按照供試品溶液制備方法制成供試品溶液,按色譜條件進(jìn)樣20μL,測(cè)定峰面積,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)

2.2.11 樣品含量測(cè)定 精密移取5批何首烏復(fù)方口服液,分別按供試品溶液制備方法制成供試品溶液,分別進(jìn)樣20μL,測(cè)定峰面積,計(jì)算樣品含量。測(cè)得二苯乙烯苷平均含量為110.28μg/mL。見(jiàn)表5。

表5 樣品含量測(cè)定

3 討論

二苯乙烯苷類(lèi)化合物是何首烏主要成分,對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)均有一定的藥理作用。在作用于神經(jīng)系統(tǒng)方面,二苯乙烯苷可以增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞活力,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用,對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病有一定療效,而二苯乙烯苷還可以通過(guò)調(diào)整血脂中TC、TG、HDL-C和LDL-C的含量達(dá)到抑制血管粥樣硬化進(jìn)展的目的;對(duì)于肝臟,二苯乙烯苷可減少酒精對(duì)于肝臟的氧化損害,同時(shí)二苯乙烯苷對(duì)于糖尿病及腫瘤均有輔助治療作用[1],由此可見(jiàn),二苯乙烯苷對(duì)于何首烏既是主要成分,又是重要的藥效成分,具有舉足輕重的藥理學(xué)意義。

何首烏復(fù)方口服液因其成分由多種中藥組成,成分復(fù)雜,易產(chǎn)生干擾,經(jīng)多方考量,將何首烏的二苯乙烯苷作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的考察對(duì)象[13-14]。采用薄層色譜法對(duì)復(fù)方口服液中的何首烏有效成分進(jìn)行定性鑒別,色譜中供試品與二苯乙烯苷對(duì)照品在相應(yīng)色譜位置上出現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn),分離良好,陰性對(duì)照液無(wú)干擾[15]。

由于試驗(yàn)中藥物制劑為復(fù)方制劑,所以制劑中的其他藥物成分可能會(huì)對(duì)高效液相的結(jié)果產(chǎn)生影響,所以試驗(yàn)對(duì)高效液相對(duì)柱溫、色譜柱、流動(dòng)相配比及流速進(jìn)行了考察,得到最佳色譜條件為:色譜柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(25∶75);流速:1 m L/min;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng):320 nm;進(jìn)樣量:20μL。

采用高效液相色譜法定量檢測(cè)復(fù)方口服液中二苯乙烯苷的含量,結(jié)果顯示該方法穩(wěn)定性好(RSD=1.62%)、重現(xiàn)性好(RSD=0.49%)、精密度高(RSD=1.82%),能準(zhǔn)確進(jìn)行定量、定性檢測(cè),可作為何首烏復(fù)方口服液的質(zhì)量控制方法[16]。