lncRNAs 用于診斷2 型糖尿病的meta 分析

譚曉勇 趙吉昌 田明英 趙恩慧 朱 美 幸 勇 冉啟軍

1.四川省宣漢縣人民醫院藥學部，四川宣漢 636150；2.四川省宣漢縣人民醫院檢驗科，四川宣漢 636150；3.四川省宣漢縣人民醫院婦產科，四川宣漢 636150；4.四川省宣漢縣人民醫院心內科，四川宣漢 636150

隨著人類社會的高速發展，糖尿病、高血壓和肥胖等代謝性疾病的患病率顯著提升，已成為威脅人類生存和發展的重要社會問題。糖尿病是一種以高血糖為主要特征的慢性代謝紊亂綜合征，分為兩種類型，胰島素分泌絕對不足稱為1 型糖尿病；胰島素分泌相對不足稱為2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM），其中，T2DM 約占90%。2015 年全球約4.15 億人罹患T2DM，預計到2040 年將達到6.42 億人，相關診療費可達千億元[1-2]。T2DM 可能誘發糖尿病腎病[3]、糖尿病視網膜病變[4]及糖尿病足[5]等并發癥，增加患者的死亡風險。目前認為生活環境、飲食結構和方式、遺傳因素及免疫因素的相互作用影響了胰島β 細胞的分化、增殖、凋亡及胰島素分泌，進而誘導胰島素分泌不足，引發糖尿病的發生[6]。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一類長度超過200 個核苷酸的具有特定生物學功能的轉錄物，是基因表達的重要調控因子[7]。研究表明，lncRNAs 廣泛參與細胞增殖、遷移和凋亡，在心血管系統疾病[8]、腫瘤[9]、泌尿系統疾病[10]等多種生命體疾病的發生發展過程中扮演著重要角色。然而，關于lncRNAs 在調節血糖穩態及其在T2DM 中的異常表達和功能仍少見。因此，本研究通過meta 分析評估lncRNAs 在T2DM 患者中的診斷價值，為T2DM 的臨床診療方式和藥物研發提供新的理論依據。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索

系統檢索Pubmed、Embase、Cochrane Library、中國知網、萬方數據庫、維普網，檢索時間為各數據庫建庫至2021 年2 月。英文檢索詞：（“IncRNAs”or“long noncoding RNA”）and（“diabetes”or“diabetes mellitus”or “Type 2 diabetes mellitus”or “T2DM”）；中文檢索詞：（“lncRNAs”或“長非編碼RNA”）和（“糖尿病”或“2 型糖尿病”或“T2DM”）。同時，為避免遺漏符合條件的研究，檢索了所有相關文章的參考文獻，部分研究沒有數據，聯系了該研究的作者以保證篩查全面。

1.2 文獻納入與排除標準

文獻納入標準：①病例對照研究或隊列研究。②研究對象為臨床確診的T2DM 病例組和健康對照組，年齡18～60 歲。③文獻中提到lncRNAs 在T2DM 患者中的表達。④研究指標為lncRNAs 種類、病例數、人種和樣本來源。⑤能直接或間接獲得lncRNAs 診斷糖尿病的靈敏度、特異性、受試者操作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線及曲線下面 積（area under curle，AUC）。排除標準：①重復發表；②獲取全文失敗及綜述性文獻。

1.3 資料提取與質量評價

2 位研究者按照檢索策略獨立檢索、篩選符合入選標準的文獻，并仔細閱讀全文，提取數據。然后對納入分析的文獻進行質量評價，并相互核對，如遇分歧，通過討論或由通訊作者協助判定。本研究采用QUADAS-2 工具評價納入研究的文獻的質量。主要包括病例選擇、待評價實驗、金標準、病例流程和進展情況、偏倚風險（病例選擇、待評價實驗、金標準、病例流程和進展情況）和適用性（病例選擇、待評價實驗、金標準）等方面，每項指標評價為“是”記1 分，評價為“否”或“不清楚”記0 分，若得分≥4 分時認為該文獻為高質量文獻。

1.4 統計學方法

利用Meta-disc 1.4 對收集的數據進行meta 分析和異質性分析。異質性檢驗采用Q 定性檢驗和I2定量檢驗，若P ＞0.05 或I2≤50%，表明納入的研究間異質性較小，采用固定效應模型進行分析；P ≤0.05或I2＞50%，表明納入的研究間異質性較大，采用隨機效應模型進行分析。通過靈敏度與特異度之間的Spearman 相關系數檢驗研究之間是否存在閾值效應，若相關性分析P ＞0.05，說明不存在閾值效應引起的異質性，可以合并計算其靈敏度、特異度，并繪制綜合ROC（summary ROC，SROC）曲線計算AUC。利用Stata 16 軟件制作Deeks’ 漏斗圖評估是否存在發表偏倚。

2 結果

2.1 文獻檢索結果

共獲得文獻637 篇，最后選擇符合納入標準的病例對照研究12 篇[11-22]進行meta 分析。見圖1。

圖1 文獻篩選流程

2.2 納入文獻的基本特征及質量評估

本研究共納入12 篇[11-22]文獻，包括1776 例2 型糖尿病患者和1508 名健康人。納入分析文獻的基本特征見表1。QUADAS-2 評價顯示納入研究的文獻[11-22]得分均≥4 分，見圖2。

表1 納入meta 分析文獻的基本特征

圖2 QUADAS-2 評價納入文獻質量

2.3 meta 分析的結果

2.3.1 異質性分析 meta 分析結果顯示，靈敏度I2=88.7%，P ＞0.05；特異性I2=75.9%，P ＞0.05，提示各研究之間存在顯著的異質性，采用隨機效應模型；相關性分析結果為rs=0.068，P=0.771，提示納入研究的文獻之間不存在閾值效應引起的異質性。

2.3.2 合并靈敏度和特異度的分析 采用隨機效應模型合并計算靈敏度和特異度，結果顯示合并靈敏度為0.75（95%CI：0.73～0.77，P ＜0.001），合并特異度為0.70（95%CI：0.67～0.72，P ＜0.001）。見圖3～4。

圖3 長鏈非編碼RNA 診斷2 型糖尿病的合并靈敏度森林圖

圖4 長鏈非編碼RNA 診斷2 型糖尿病的合并特異性森林圖

2.3.3 SROC 擬合曲線分析 SROC 擬合曲線結果顯示AUC 為0.79，Q*=0.73，見圖5。

圖5 綜合受試者操作特征曲線圖

2.3.4 亞組分析 分別按樣本來源、病例數、lncRNAs變化趨勢及人種進行亞組分析，結果顯示選擇不同變化趨勢lncRNAs 是診斷2 型糖尿病的異質性來源（P ＜0.05）。見表2。

表2 亞組分析

2.3.5 敏感性分析和發表偏倚 逐一剔除文獻后，重新進行meta 分析，結果表明，合并診斷比值比為7.93～9.75，納入研究的文獻穩定性較好，見表3。發表偏倚分析結果顯示斜率系數P=0.68，研究之間不存在明顯的發表偏倚，見圖6。

圖6 Deeks’漏斗圖

表3 敏感性分析

3 討論

越來越多的研究表明，T2DM 在全球的發生率逐年增高，T2DM 及其誘發的糖尿病腎病、糖尿病視網膜病變及糖尿病足等并發癥給患者帶來沉重的經濟負擔和身體創傷，已發展成為嚴重威脅人類生命健康和生活質量的慢性代謝性疾病之一[3-5]。同時，有研究發現，T2DM 亦是胰腺癌、肝癌及婦科癌癥等腫瘤疾病的主要危險因素之一[23]。T2DM 患病率高、早期診斷率低，并發癥發生率高、術后預后差，而T2DM 的早期診斷和治療一直是世界性難點和熱點，因此迫切需要新型的早期有效診斷和預后的標志物。如能探明T2DM 發生、發展的分子機制，將會有助于確定潛在的早期診斷和預后生物標志物及治療靶點。近年來，lncRNAs 在T2DM 中的異常表達及其具體生物學功能引起了研究者們的高度關注。

眾所周知，lncRNAs 是一類長度在200 個核苷酸以上具有特定生物學功能的轉錄物，是基因表達的重要調控因子[7]。研究表明，lncRNAs 可通過轉錄和轉錄后調控多個層面調控生命體基因的表達，參與調節細胞的增殖、遷移和調亡，在腫瘤、心腦血管系統疾病、泌尿系統疾病和代謝系統疾病等眾多疾病的發生發展過程中扮演著十分重要的角色[8-10]。Morán 等[23]研究揭示，在人類胰島β 細胞中有1128 個與胰島分化密切相關lncRNAs 特異性表達；Nica 等[24]研究發現，148 個lncRNAs 在胰島β 細胞中過表達；Bramswig 等[25]利用高通量轉錄組學技術分析發現：有12 個lncRNAs 在胰島β 細胞特異性表達，5 個lncRNAs 在胰島α 細胞中特異性表達，提示lncRNAs 能通過維持胰島細胞的功能、調控胰島素分泌的信號傳導，參與調節糖尿病的發生發展。Jie 等[26]研究表明，lncRNAs KCNQ1OT1 在糖尿病腎病患者中的表達顯著升高；進一步研究發現，lncRNAs KCNQ1OT1 能 通 過KCNQ1OT1/miR-18b-5p/SORBS2 軸和核因子κB 途徑調控糖尿病腎病細胞的增殖、凋亡和纖維化。Ding 等[27]研究揭示，lncRNAs H19 作為第一個被報道與妊娠期糖尿病密切相關的lncRNA，主要通過調節胰島細胞的功能，進而調控胰島素分泌。Ke 等[28]研究表明，高糖誘導的人視網膜內皮細胞中SNHG7 的表達顯著降低，同時，SNHG7 能通過調節miR-543 介導的SIRT1/VEGF 信號通路抑制糖尿病視網膜病變血管生成。綜上，lncRNAs 在T2DM 及其并發癥的研究已比較詳盡，而T2DM與IncRNAs 表達相關的meta 分析尚不多。而本研究提示異常的lncRNAs 表達與其在T2DM 患者中的診斷價值。本研究結果提示lncRNAs 用于診斷T2DM 具有較高的準確性和實用性。

盡管本研究制訂了嚴格的納入和排除標準，然而結果仍存在一定的不足：①目前臨床研究有限；②納入研究的文獻多數是病例對照研究；尚需更多、更大樣本量的研究；③盡管Deeks’漏斗圖分析提示本研究無發表偏倚，但檢索語言限定為漢語和英語，可能存在語言偏倚。④尚需開展功能性研究，闡明lncRNAs 在T2DM 發生發展過程中的信號通路及分子調控機制。

綜上所述，利用循環lncRNAs 診斷T2DM 具有重要的潛在價值。期待未來更多的大樣本研究，為lncRNAs 對T2DM 早期診斷、治療和預后提供更多的理論數據支持。