柞蠶微孢子蟲胚種傳染率的分析

徐欣　朱緒偉　劉中文　周其明　張耀亭　張永君

柞蠶微粒子病是柞蠶生產(chǎn)上的重要病害，由柞蠶種生產(chǎn)中的唯一檢疫對(duì)象柞蠶微孢子蟲誘發(fā)，并能夠經(jīng)卵垂直傳播影響種繭生產(chǎn)，威脅種質(zhì)資源的保育及生產(chǎn)的安全。寄生柞蠶的微孢子蟲到目前為止共發(fā)現(xiàn) 5 種，包括柞蠶微粒子蟲（Nosema pernyi Wen et Ding）、修氏內(nèi)網(wǎng)蟲（Endoreticlatus schubergi）、 鏈孢變形孢蟲（Vairimorpha chainsporum Wen et Ding）、訥卡變形孢蟲（Vairimorpha necatrix）和柞蠶微孢子蟲新種（Nosema sp.），其中，柞蠶微孢子蟲是優(yōu)勢(shì)種。柞蠶微孢子蟲的傳播方式有水平傳播與垂直傳播，其中，垂直傳播即胚種傳染，是主要傳染途徑，也是造成檢測(cè)及防治難度較大的原因。因此，本試驗(yàn)初步研究柞蠶微孢子蟲的垂直傳播過程，調(diào)查河南省主要柞蠶品種的胚種傳染率，為探究柞蠶微孢子蟲侵染相關(guān)的機(jī)制奠定基礎(chǔ)，也為尋找控制水平傳播和阻斷垂直傳播的綜合治理方法提供幫助。

一、材料與方法

（一）供試柞蠶品種

試驗(yàn)中選取河南省柞蠶育種研究室鏡檢后攜帶微孢子蟲的母蛾，母蛾已經(jīng)完成交配，在產(chǎn)卵袋中單獨(dú)產(chǎn)卵、保存，供試的母蛾品種為豫大1號(hào)、鎮(zhèn)玉、181、182、101及三三共6個(gè)品種，帶毒母蛾均隨機(jī)挑選。

（二）試驗(yàn)方法

母蛾產(chǎn)卵后，在氣溫25 ℃、濕度80%條件下進(jìn)行催青處理，2%的甲醛溶液進(jìn)行卵面消毒，待出蟻前1天將單個(gè)蠶卵放置到直徑5 cm、高度4 cm的圓柱形塑料帶蓋小盒（自行設(shè)計(jì)，食品級(jí)塑料，塑料盒四周和蓋上有數(shù)個(gè)透氣小圓孔）中，每個(gè)柞蠶品種隨機(jī)選取10頭母蛾，每頭母蛾隨機(jī)選取50粒蠶卵，進(jìn)行單蠶飼養(yǎng)。

在飼養(yǎng)過程中，從孵化出蟻到3齡48 h，每隔1～2 d更換小盒內(nèi)的柞樹葉并除沙，保證小盒內(nèi)的飼養(yǎng)環(huán)境，記錄每頭柞蠶的生長(zhǎng)狀況及得病、死亡情況。并于3齡48 h將所有柞蠶幼蟲進(jìn)行鏡檢，調(diào)查微孢子蟲的攜帶情況并記錄。

（三）數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.0數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果中的胚種傳染率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

二、結(jié)果與分析

（一）豫大1號(hào)品種帶毒母蛾胚種傳染率調(diào)查

表1中展示了柞蠶品種豫大1號(hào)品種10頭帶毒母蛾隨機(jī)選取50個(gè)卵進(jìn)行單蠶飼養(yǎng)的簡(jiǎn)單生長(zhǎng)狀況，幼蟲從收蟻到2齡眠的過程中大多能夠適應(yīng)較密閉的盒內(nèi)飼養(yǎng)環(huán)境。由于柞蠶的放養(yǎng)天性，齡數(shù)越大越需要更多的生長(zhǎng)與活動(dòng)空間，而室內(nèi)飼養(yǎng)條件不能夠滿足其需要，到3齡起蠶后長(zhǎng)勢(shì)逐漸減弱，運(yùn)動(dòng)性和進(jìn)食量大大降低，死亡數(shù)量增加過快。為不使細(xì)菌病等其他病害影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故選擇在3齡48 h將所有幼蟲進(jìn)行腹部血液鏡檢，將鏡檢帶毒頭數(shù)與當(dāng)前活頭數(shù)之比值作為1頭帶毒母蛾的胚種傳染率，結(jié)果如圖1所示。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)，胚種傳染率試驗(yàn)中隨機(jī)調(diào)查了柞蠶品種豫大1號(hào)10頭帶毒母蛾的胚種傳染率，最低為11.76%，最高為85.71%;胚種傳染率低于30%的為2頭，30%～70%的為6頭，高于70%的為2頭。柞蠶微孢子蟲的胚種傳染率較高，同時(shí)個(gè)體差異較大，帶毒率高的胚種傳染率也高，孢子的數(shù)量是決定胚種傳染率的重要因素。

各品種中調(diào)查的10個(gè)帶毒母蛾差異情況基本相似，因此沒有一一列出各品種的調(diào)查數(shù)據(jù)。

（二）6個(gè)柞蠶品種的胚種傳染率對(duì)比

本試驗(yàn)共調(diào)查了豫大1號(hào)、鎮(zhèn)玉、181、182、101及三三共6個(gè)河南省柞蠶繁育主要品種，表2至表6展示了除豫大1號(hào)品種外剩余5個(gè)品種的單蠶飼養(yǎng)的生長(zhǎng)狀況，整體的生長(zhǎng)情況和豫大1號(hào)品種相似。從圖2各品種的平均胚種傳染率統(tǒng)計(jì)結(jié)果中可以看出，幾個(gè)品種的傳染率均在50%～75%。雖然由于個(gè)體差異大導(dǎo)致數(shù)據(jù)平均偏差較大，但從平均值上看，仍然能說明豫大1號(hào)品種的柞蠶微孢子蟲胚種傳染率較低，其抗微粒子病能力較強(qiáng);其次是鎮(zhèn)玉品種，其他幾個(gè)品種的抗性較弱，傳染率在70%以上。

三、討論

試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)柞蠶微孢子蟲的胚種傳染率個(gè)體差異較大，與母蛾帶毒情況有關(guān)呈正相關(guān)，結(jié)合孢子的侵染機(jī)制，說明孢子數(shù)量是決定胚種傳染率的重要因素，為今后探究柞蠶微孢子蟲胚種傳播具體方式提供幫助。試驗(yàn)調(diào)查的6個(gè)柞蠶品種中發(fā)現(xiàn)豫大1號(hào)品種的抗微粒子病能力較其他5個(gè)供試品種強(qiáng)，在今后柞蠶生產(chǎn)與推廣上，尤其在微粒子病高發(fā)地區(qū)，應(yīng)結(jié)合柞蠶生產(chǎn)基地的具體條件與當(dāng)年天氣狀況，建議優(yōu)先推廣豫大1號(hào)品種。

資助項(xiàng)目：河南省重點(diǎn)研發(fā)與推廣專項(xiàng)（科技攻關(guān)）項(xiàng)目（編號(hào) 192102110149）。