注射用頭孢曲松鈉含量測定探究與方法學驗證

劉麗燕，黎舒萍(陽江市檢測檢驗中心，廣東 陽江 529500)

0 引言

文章采用HPLC法測定注射用頭孢曲松鈉中頭孢曲松的含量, 準確可靠, 簡便。同時通過HPLC色譜圖, 可以判斷注射用頭孢曲松鈉的質(zhì)量控制水平, 為臨床用藥提供依據(jù)。

1 實驗溶液配制

對照品以及供試品的配置按照《中國藥典》2015年版二部配置[1]。

2 方法學驗證

2.1 線性關(guān)系試驗

分別精密吸取同一對照品溶液(見3.1對照品溶液的配置)配成10、20、50、100、200 μg/mL的系列溶液,分別精密量取0.5、1.0、2.5、5、10 mL置于10 mL容量瓶，加流動相稀釋至刻度，搖勻濾過，取10 μL注入液相色譜儀中，測定峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。其中R=0.999 9(n=5)。結(jié)論：實驗結(jié)果表明，頭孢曲松在10～200 μg/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，其中回歸方程如(1)所示及相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 9：

2.2 精密度試驗

取同一對照品溶液，(精密稱取頭孢曲松對照品4.034 mg置20 mL容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得)，重復進樣6次，每次10 μL，測定頭孢曲松峰面積，測定結(jié)果RSD小于2.0%。

結(jié)論：把6次所測定的樣品溶液峰面積計算出頭孢曲松的相對標準偏差(RSD)為0.05%，小于2.0%,則精密度一般，符合中國藥典規(guī)定。

2.3 重復性試驗

取用0.9%氯化鈉溶液溶解的供試品，照供試品溶液制備方法制備，取供試品注射用頭孢曲松溶解于0.9%氯化鈉，并定容至100 mL容量瓶，精密量取2 mL置100 mL容量瓶，加0.9%氯化鈉溶劑稀釋至刻度，搖勻濾過，制備 6份供試液，取10 μL注入液相色譜儀中，測定峰面積。結(jié)論：測得6組峰面積數(shù)據(jù)計算相對平均偏差(RSD)為0.11%，小于2.0%，則重復性良好。

2.4 加標回收率試驗

取注射用頭孢曲松鈉供試品，用0.9%氯化鈉溶劑配制的注射用頭孢曲松鈉，共六份分別配置成頭孢噻10 mg/mL，精密量取1 mL再分別精密加入對照品溶液(溶劑為流動相溶液)10 mg置于100 mL的容量瓶，用0.9%氯化鈉溶劑稀釋至刻度，然后按正文含量測定方法供試品溶液制備項下的方法操作測定，記錄色譜圖，考察本方法的加樣回收率。結(jié)論：測得6組數(shù)據(jù)計算平均回收率為109.3%, RSD=0.92%，109.3在98.0～120.0%范圍內(nèi)，RSD=0.92%≤2.0%；符合規(guī)定，本方法的加樣回收率較高，且回收率不超過2.0%。

3 探究在不同溫度下隨著時間的變化對含量的影響

3.1 常溫下隨著時間的變化對含量的影響。

取供試品注射用頭孢鈉分別溶于5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉溶劑，并定容至100 mL容量瓶，精密量取1 mL置于10 mL容量瓶，分別加各溶劑稀釋至刻度，作為供試品溶液，考察常溫條件下放置0、4、8、24 h含量的變化，其中配制好的注射用頭孢曲松鈉注射液在常溫條件下放置24 h的過程中沒有發(fā)生顏色和沉淀的變化。其中大于10%的有效成分被分解，則認為該藥品與輸液不宜配伍。

以0 h的溶液含量為100%，計算公式為：

結(jié)論：根據(jù)上述數(shù)據(jù)結(jié)果可得(如表1所示)，在常溫下隨著時間的變化，供試品使用5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉配制的放置0～8 h對有效成分的含量影響不大，但是放置24 h后的有效成分的含量均大于10%的被分解；所以該藥品與輸液配伍不適合放置超過24 h。

表1 供試品在下常溫隨時間的變化

3.2 在0～8 ℃下隨著時間的變化對含量的影響

取供試品注射用頭孢曲松鈉分別溶于5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉溶劑，并定容至100 mL容量瓶，精密量取1 mL置于10 mL容量瓶，分別加各溶劑稀釋至刻度，作為供試品溶液，考察3 ℃條件下放置0、4、8、24 h含量的變化，其中配制好的注射用頭孢噻肟鈉舒巴坦鈉注射液在3 ℃條件下放置24 h的過程中沒有發(fā)生顏色和沉淀的變化。其中大于10%的有效成分被分解，則認為該藥品與輸液不宜配伍。

結(jié)論：根據(jù)上述數(shù)據(jù)結(jié)果可得(如表2所示)，供試液在0～8 ℃下放置隨著時間的變化對含量的影響較小，其中5%葡萄糖氯化鈉比0.9%氯化鈉的穩(wěn)定性高；所以注射用頭孢曲松鈉適合配伍后在低溫(0～8 ℃)下放置24 h內(nèi)對有效成分分解影響不大。

表2 供試品在0～8 ℃隨時間的變化

4 在不同溫度下隨時間的變化對pH的影響

4.1 常溫下隨時間的變化對pH的影響

取供試品注射用頭孢曲松鈉分別溶于5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉溶劑，并定容至100 mL容量瓶，作為供試品溶液，考察常溫條件下放置0、4、8、24 h后pH的變化。

結(jié)論：根據(jù)上述數(shù)據(jù)結(jié)果可得(如表3所示)，在常溫下隨著時間的變化對pH有影響，供試品使用5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉配制的pH值均逐漸升高。

表3 常溫下隨時間的變化對pH的影響

4.2 0～8 ℃下隨時間的變化對pH的影響

取供試品注射用頭孢曲松鈉分別溶于5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉溶劑，并定容至100 mL容量瓶，作為供試品溶液，考察0～8 ℃條件下放置0、4、8、24 h pH的變化。

結(jié)論：根據(jù)上述檢驗結(jié)果可知(如表4所示)，在0～8 ℃下放置隨著時間的變化對pH的影響較小，使用5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉溶劑配制的pH值都相對穩(wěn)定，變化不大。

表4 0～8℃下隨時間的變化對pH的影響

5 不同強度下振搖的變化對不溶性微粒的影響

取供試品注射用頭孢曲松鈉分別溶于5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉溶劑，用帶針頭注射器抽取適量各溶劑溶于供試品注射用頭孢曲松鈉，再注射進溶劑里，作為供試品溶液，在高強度和低強度的兩個條件下分別振搖10 min，待測試，測試體積5 mL，考察在不同強度下振搖對不溶性微粒的變化。

結(jié)論：根據(jù)上述檢驗結(jié)果可知(如表5所示)，5%葡萄糖氯化鈉、0.9%氯化鈉兩者在高強度下振搖的不溶性微粒都比低強度下振搖的≥10 μm的微粒量少，而兩者≥25 μm的不溶性微粒都相對穩(wěn)定甚至沒有變化。

表5 不同強度下振搖的變化對不溶性微粒的影響

6 結(jié)語

數(shù)據(jù)顯示, HPLC法能準確測定頭孢曲松的含量，線性范圍為10～200 μg/mL，R=0.999 9；平均回收率為109.3%，RSD(%)=0.92%；重復性RSD(%)=0.11%；精密度RSD(%)=0.05；系統(tǒng)適應性頭孢曲松鈉與頭孢曲松反式異構(gòu)體峰值分離度大于6.0。所以對注射用頭孢曲松鈉的測定表明本方法靈敏可靠，可以用于注射頭孢曲松鈉的含量測定。