蘆根清熱作用機制研究

劉亞虓 張潘潘 顏偌楠 戚巍瓊 鄧 翀 姜 祎 張化為

陜西中醫藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046

蘆根來源于禾本科植物蘆葦PhragmitescommunisTrin.新鮮或干燥的根莖[1]，性味甘、寒，歸肺、胃經，具有清熱生津、除煩、止嘔、利尿等作用，常被廣泛用于治療萎縮性胃炎、大葉性肺炎、便秘等疾病[2]，還有用其治療干燥綜合征的報道[3]。近年來，蘆根在預防炎癥、感冒等方面起到了良好的作用[4]。

發熱是指機體的體溫調定點在免疫系統和神經系統協調作用下上移而誘發的一種適應性反應，其作用機制是由致熱原的刺激使體溫中樞調定點上移[5]。發熱通常是通過一些炎癥因子含量的變化來判斷，而發熱又使機體內炎癥因子和前列腺素產生和釋放增多，引起全身炎癥從而導致體溫升高[6]。常用的致熱原有：脂多糖、2,4-二硝基酚、干酵母等[7]。本研究將通過干酵母致熱小鼠實驗并密切關注小鼠體溫變化，同時采用ELISA試劑盒測定發熱炎癥因子含量的變化來探討蘆根對小鼠發熱模型的解熱作用，以初步探討其解熱的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種雄性小鼠60只，體重18～22 g，成都達碩實驗動物有限公司，動物許可證編號：SCXK(川)2020-030。實驗前置于溫度為20 ℃左右的環境中，適應性喂養3 d。

1.2 藥材與試劑 蘆根，市場購買(批號：20200401)，經過陜西中醫藥大學藥學院顏永剛教授鑒定其為禾本科植物蘆葦PhragmitescommunisTrin.的干燥根莖，0.9%氯化鈉注射液(國藥準字號H20196626)、IL-1β試劑盒、TNF-α試劑盒、cAMP試劑盒、PGE2試劑盒(上海優選生物科技有限公司、批號：20200418)、高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)、對乙酰氨基酚片(成都恒瑞制藥有限公司)。

1.3 儀器 高速冷凍離心機(TG-16)、酶標儀(MULTISKAN GO)、電子體溫計(歐姆龍有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 樣品制備 稱取蘆根藥材約1 kg，以10倍量、8倍量的水煎煮提取兩次，提取時間2 h、1.5 h，合并兩次煎煮液，減壓回收溶劑，得到流浸膏，備用[8]。

1.4.2 發熱小鼠模型的制備 實驗前先適應3 d，從第4 d開始測量小鼠體溫，將電子體溫計測溫探頭插入小鼠肛門內2 cm記錄直腸體溫，每天按時測量1次，連續測量7 d。剔除體溫變化異常的小鼠，將檢測合格的60只小鼠隨機分為6組：空白組、模型組、陽性組、水樣(低、中、高劑量)組。每組10只[9-10]。

實驗采用灌胃給藥方式[11]，空白組和模型組給等體積的生理鹽水，陽性組給對乙酰氨基酚溶液，給藥組按蘆根水樣部位低、中、高劑量依次灌胃，連續7 d。造模前需要先禁食10 h，除空白組以外，其余組均在小鼠背部皮下注射20%酵母混懸液10 mL/kg，在注射酵母混懸液后1、2、3、4 h依次測量各組小鼠體溫[12]。

1.5 用ELISA試劑盒測量發熱小鼠下丘腦組織中發熱介質含量

1.5.1 血樣采集 在上述6組小鼠測溫后，立即眼眶靜脈取血，在4 ℃，3500 r/min的條件下離心20 min，取上清液，置-20℃冰箱保存、待測[13]。

1.5.2 取下丘腦組織 上述6組小鼠眼眶靜脈取血后立即處死，于冰上操作取下丘腦，將取下的下丘腦放入1.5 mL離心管中，放到冰上，待全部取完后，將每組下丘腦組織用生理鹽水1∶9比例制備成10%的組織勻漿液，4 ℃，2000 r/min,離心10 min，后用移液槍取上清液，置-20℃冰箱保存、待測[14]。

1.5.3 相關發熱介質含量測定 按照試劑盒操作規范，嚴格操作，測定數據[15]。

2 結果

2.1 各組小鼠體溫變化 如表1、圖1所示，在造模之前各組小鼠的體溫接近，除空白組外其余各組用20%酵母混懸液造模。除模型組體溫持續上升外，其余各組小鼠體溫在3 h達峰值，之后具有下降趨勢。

表1 各組干酵母所致發熱小鼠的體溫差值

圖1 各小鼠體溫變化折線圖

2.2 酵母混懸液致熱各組小鼠血清發熱介質含量的比較 造模后，4 h取血清及下丘腦測定各發熱介質含量，發現在IL-1β、TNF-α、cAMP、PGE2四個指標中模型組發熱介質含量明顯升高且與空白組有顯著性差異，表明造模成功；而陽性組發熱介質含量明顯下降，與模型組有顯著性差異，給藥組發熱介質含量相對模型組均有不同程度的降低，但不同炎癥因子與劑量之間無明顯相關性，說明蘆根對干酵母致熱小鼠具有明顯的解熱作用。

表2 發熱介質含量

3 討論

蘆根始載于《名醫別錄》，味甘性寒，具有清熱生津等作用，可用于熱病煩渴等癥的治療。臨床上外感發熱患者在處方配伍中可適當加入蘆根，清熱生津而不傷人體正氣，有益于疾病愈后身體機能的恢復。

實驗以皮下注射酵母混懸液致熱小鼠為研究對象，對蘆根的解熱作用和清熱機制進行探討。通過對炎癥小鼠的體溫變化和體內各炎癥因子水平的測定。分析發現，酵母混懸液致熱后，小鼠體溫在3 h左右達到峰值，之后體溫開始有下降趨勢，與文獻[16]中記載的嚙齒類動物體溫在6～8 h之間達到峰值不同。在實驗中通過連續給藥的方式使小鼠體溫下降，說明蘆根水提液具有解熱作用。為了測得小鼠體內炎癥因子的變化，在給藥4 h后測定血清中IL-1β、TNF-α、cAMP及小鼠下丘腦中PGE2的含量。研究發現當IL-1β分泌量過多時，會作用于下丘腦使機體發熱[17]；TNF-α通過直接刺激下丘腦體溫調節中樞或刺激巨噬細胞釋放白細胞介素-1(IL-1)而引起機體發熱[18]；cAMP可調節機體生理功能及物質代謝，當cAMP激活時，會導致心肌收縮，提供能量供給，使機體體溫上升[19]。當以上三種炎癥因子水平降低時，機體可產生解熱作用。PGE2也是非常強的致熱物質之一，能引起體溫上升，而清熱藥的作用位點是下丘腦的熱量控制中心，通過抑制環氧合酶的活性而減少前列腺素的合成，從而達到降低體溫的作用[20]。

低、中、高劑量組的蘆根水提取液對不同的炎癥因子含量變化規律不盡一致，這可能與中藥本身因劑量不同的雙向調節有關，與文獻[21]研究結果一致。本實驗結果表明，高劑量組的蘆根水提液使IL-1β、TNF-α及PGE2的含量明顯降低；中劑量組的蘆根水提液使cAMP的含量明顯降低，但整體而言，各個指標與模型組相比均有顯著性差異且呈下降趨勢，這與IL-1β、TNF-α、cAMP及PGE2上文所述的作用機制一致。

綜上所述，中藥蘆根確有解熱作用，其清熱作用機制與抑制機體內的IL-1β、TNF-α、cAMP的表達有關，并且通過抑制下丘腦體溫中樞內的環氧合酶，進而降低PGE2的釋放，也是蘆根產生清熱作用的機制之一。