CLCNKA(rs1805152)基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者左心室肥厚及早期腎功能損害的相關性▲

韋朝俊 王 向 王 堯 劉大男

(貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，貴州醫(yī)科大學醫(yī)學科學研究所，貴陽市 550004，電子郵箱：1528481469@qq.com)

原發(fā)性高血壓是多個微效基因和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，研究表明，CLCNKA基因多態(tài)性可增加機體水鈉潴留，參與原發(fā)性高血壓的發(fā)生與發(fā)展，是原發(fā)性高血壓重要的易感基因之一[1-3]，但目前關于CLCNKA基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓靶器官損害的相關性的研究仍較少。左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)和腎功能損害是原發(fā)性高血壓發(fā)生、發(fā)展的獨立危險因素，與原發(fā)性高血壓患者的預后密切相關[4]，明確基因與原發(fā)性高血壓靶器官損害的相關性有助于理解兩者間的相互作用機制。本研究探討CLCNKA基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者LVH及早期腎功能損害的相關性，為原發(fā)性高血壓患者靶器官損害的防治提供臨床思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月至2020年2月在貴州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科門診及住院部診治的178例原發(fā)性高血壓患者作為研究對象，其中男性92例，女性86例，年齡23～81(60.0±13.0)歲。納入標準：(1)原發(fā)性高血壓的診斷符合《中國高血壓防治指南(2018年修訂版)》[5]中的相關診斷標準[收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg]，受試者測量血壓前1 d及測量當天禁止飲用咖啡、濃茶、酒精及其他影響心臟自主神經(jīng)功能的藥物，避免劇烈活動及情緒波動；(2)臨床資料齊全。排除標準：(1)繼發(fā)性高血壓患者；(2)合并其他影響心臟自主神經(jīng)、脈壓及血管順應性疾病的患者；(3)腦卒中、腫瘤、肝腎衰竭及風濕免疫系統(tǒng)等疾病患者。本研究經(jīng)中南大學湘雅三醫(yī)院(這是一個全國多中心的臨床研究，采用的是項目批準的倫理委員會信息)倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料的收集：收集所有患者的性別、年齡、吸煙史(每天吸煙1支以上，連續(xù)或累計6個月)等一般資料，并進行體格檢查，測定身高、體重、收縮壓和舒張壓，計算體質(zhì)指數(shù)；囑患者收集24 h尿液，采用放射免疫法檢測24 h尿微量白蛋白；采用酶比色法檢測患者的TG、TC、HDL-C、LDL-C、24 h尿鈉。

1.2.2 左心室質(zhì)量指數(shù)的檢測：由同一技術人員采用彩色多普勒超聲診斷儀測量患者的左心室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)、室間隔厚度(interventricular septum thickness,IVST)、左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall,LVPW)以及舒張期后壁厚度(posterior wall thickness,PWT)按照Devereux校正公式[6]計算左心室質(zhì)量(left ventricular mass,LVM)=0.8×10.4×[(IVST+PWT+LVEDD)3-LVEDD3]+0.6，體表面積(body surface area,BSA)=0.0061×身高+0.0128×體重-0.1529。左心室質(zhì)量指數(shù)(left ventricular mass index,LVMI)(g/m2)=LVM/BSA。LVH診斷標準：男性LVMI>115 g/m2，女性LVMI>95 g/m2。

1.2.3 DNA提?。菏褂糜杀本┮嫘蜥t(yī)療科技有限公司提供的一次性基因采樣盒(批號：1905G05)采集患者口腔頰黏膜脫落細胞，采用柱式質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒提取樣本DNA，置于-80℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 PCR擴增：使用DNAMAN 8.0設計引物，由北京益序醫(yī)療科技有限公司合成，上游引物：5′-ATGGAGGGCTGTGGGGGC-3′，下游引物：5′-GACGGCAAGAGCCTCTCC-3′。PCR試劑盒購自北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司(批號：Lot#S06FC021)，反應體系為30 μL，由8 μL 16032 Panel Mix、10 μL 3XT酶、5 μL濃度為12 ng/μL的樣本DNA和7 μL的無酶水組成；反應程序：95℃ 3 min;95℃ 30 s；60℃ 4 min,17個循環(huán)；72℃ 4 min；10℃保存。

1.2.5 基因型鑒定：PCR產(chǎn)物經(jīng)AMPure XP Beads純化，在Illumina X10高通量測序平臺進行基因型診斷。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 26.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以(x±s)表示，兩組間比較用t檢驗，多組間比較用單因素協(xié)方差分析；計數(shù)資料以例數(shù)表示，比較采用χ2檢驗；采用Logistic回歸模型分析檢驗指標間的相關性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 患者的一般資料 根據(jù)LVMI將患者分為非LVH組143例與LVH組35例，兩組患者的吸煙史、TG、TC、LDL-C、24 h尿鈉、收縮壓、舒張壓水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)；而相較于非LVH組患者，LVH組患者的女性比例更高、年齡更大、體質(zhì)指數(shù)更低、HDL-C水平更高、CLCNKA基因rs1805152位點AA基因型的比例更高(均P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料的比較

組別nLDL-C(x±s,mmol/L)24 h尿鈉(x±s,mmol/L)收縮壓(x±s,mmHg)舒張壓(x±s,mmHg)rs1805152位點基因型(n)GA/GG/AALVH組352.43±1.02128.43±59.43145.23±23.6881.11±22.548/2/25非LVH組1432.48±1.03136.24±67.34140.25±21.8883.50±13.5370/8/65 χ2/t值-0.125-0.6091.186-0.6017.589P值0.9010.543 0.2370.5510.006

2.2 CLCNKA基因rs1805152位點各個基因型間24 h尿微量白蛋白水平的比較 CLCNKA基因單核苷酸多態(tài)性rs1805152位點GA基因型78例，GG基因型10例，AA基因型90例，各個基因型間24 h尿微量白蛋白水平的差異具有統(tǒng)計學意義(H=6.482，P=0.039)，其中CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型的24 h尿微量白蛋白水平高于GA基因型與GG基因型(P<0.05)，見表2。

表2 不同CLCNKA基因rs1805152位點各個基因型原發(fā)性高血壓患者24 h尿微量白蛋白水平的比較[M(P25，P75)，mg]

2.3 Logistic回歸分析 以是否發(fā)生LVH為因變量(LVH=0，非LVH=1)，以性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、HDL-C水平和rs1805152基因型作為自變量(年齡、體質(zhì)指數(shù)以連續(xù)變量納入，其余變量的賦值見表3)，進行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示：年齡升高與rs1805152 AA基因型為原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的獨立危險因素(均P<0.05)。見表4。

表3 變量賦值表

表4 原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的Logistic回歸分析

3 討 論

LVH是原發(fā)性高血壓性心臟損害的主要表現(xiàn)，目前原發(fā)性高血壓導致LVH的具體機制尚未完全清楚，既往研究表明，遺傳、肥胖、高齡、高鈉膳食及女性是原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的主要危險因素[7-9]。CLCNKA(rs1805152位點)基因?qū)儆贑LC基因家族的成員，是重要的鹽敏感基因之一，其參與CLCNKA氯離子通道的形成及氯化鈉進出腎臟細胞的調(diào)節(jié)，與原發(fā)性高血壓的發(fā)生和發(fā)展關系密切[10]。CLCNKA基因突變引起的慢性血容量擴張使個體具有罹患鹽敏感性原發(fā)性高血壓的傾向，有研究顯示CLCNKA通道可被纈沙坦、奧拉沙坦阻斷，從而起到降低血壓的作用[11]。有研究表明，CLCNKA基因多態(tài)性不僅與原發(fā)性高血壓的發(fā)生有密切聯(lián)系，而且與心力衰竭的發(fā)生有明顯相關性[12]。但是關于CLCNKA基因多態(tài)性是否與LVH的發(fā)生相關的研究較少。本研究結(jié)果顯示，相較于非LVH組患者，LVH組患者的女性比例更高、年齡更大、體質(zhì)指數(shù)更低、HDL-C水平更高，且CLCNKA rs1805152位點AA基因型的比例更高(均P<0.05)，推測rs1805152位點基因多態(tài)性可能與原發(fā)性高血壓合并LVH有關。同時，本研究Logistic回歸分析結(jié)果顯示，CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型是原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的獨立危險因素(P<0.05)，說明攜帶CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型的原發(fā)性高血壓患者較攜帶GA、GG基因型的患者發(fā)生LVH的可能性更大，但是目前遺傳因素導致LVH的具體機制仍不清楚。此外，本研究結(jié)果還顯示，高齡為原發(fā)性高血壓患者發(fā)生LVH的獨立危險因素(P<0.05)，與既往研究結(jié)果相似[13-14]，但是未顯示肥胖、性別、體質(zhì)指數(shù)對LVH的發(fā)生有影響，這與上述既往研究結(jié)果不一致，可能與不同研究的研究人群不同及種族差異、樣本量等因素有關。

原發(fā)性高血壓導致的早期腎功能損害指的是臨床蛋白尿出現(xiàn)之前的微小腎功能損害，既往研究提示微量白蛋白尿是早期腎功能損害的敏感指標[15]。原發(fā)性高血壓鹽敏感者早期腎功能損害程度遠高于非鹽敏感者[16]。本研究結(jié)果顯示，CLCNKA基因單核苷酸多態(tài)性rs1805152位點各個基因型間24 h尿微量白蛋白水平的差異具有統(tǒng)計學意義，其中CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型患者的24 h尿微量白蛋白水平高于GA基因型和GG基因型(P<0.05)，提示攜帶CLCNKA基因rs1805152多態(tài)位點AA基因型的原發(fā)性高血壓患者發(fā)生早期腎功能損害的可能性更大。有研究表明，原發(fā)性高血壓患者中，LVH與尿微量白蛋白水平顯著相關，尿微量白蛋白水平可能是LVH的一個預測因子[17-19]。但是本研究未比較原發(fā)性高血壓合并與未合并LVH患者24 h尿微量白蛋白水平的差異，因此尿微量白蛋白水平對原發(fā)性高血壓患者LVH的影響還有待進一步研究。

綜上所述，CLANKA基因多態(tài)性可能與原發(fā)性高血壓合并LVH及早期腎功能損害有關，其中rs1805152位點AA基因型患者可能更容易發(fā)生LVH和早期腎功能損害。但本研究存在一定局限性，如樣本量較小、檢測指標較少等，研究結(jié)論還有待進一步證實。