三陰性乳腺癌早期患者雄激素受體、Ki67、p53、表皮生長因子受體表達水平及其與臨床病理特征關系研究

徐英杰，李 巍

(錦州醫科大學，遼寧 錦州 121001)

隨著乳腺癌治療研究和癌癥篩查的快速發展，越來越多的患者在患病早期便能得到及時的診斷和治療，從而有效提升治愈的可能并改善預后[1-2]。其中，各類癌癥因子、腫瘤標志物的檢測和分析對癌癥篩查工作的進行提供了巨大的幫助，傳統檢測指標如雌激素受體(Estrogen receptor，ER)、孕激素受體(Progesterone receptor，PR)及人類表皮生長因子受體-2(Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)對于常規Luminal A和Luminal B型乳腺癌均具有較好的診斷價值[3-4]。但對于上述指標表達均為陰性的三陰性乳腺癌(Triple-negative breast cancer，TNBC)，常見的檢測指標難以判斷此種高度異質性腫瘤的發生。同時，根據已有文獻和報道[5-7]，TNBC的侵襲性更強，遠端轉移可能性更高，特異治療手段的缺乏也使得患者預后更差，且患者的腫瘤標志物水平較非三陰性乳腺癌(Non-triple-negative breast cancer，NTNBC)呈現不同的表現特征。本研究對比TNBC和NTNBC早期患者雄激素受體(Androgen receptor，AR)、Ki67、p53和表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor，EGFR)等指標，以揭示TNBC患者在患病早期各指標的變化情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院于2018年1月至2020年12月間收治的經臨床病理診斷確診的TNBC早期患者80例作為TNBC組，其中年齡36～74歲，平均(52.38±4.10)歲；腫瘤<2 cm者55例，腫瘤≥2 cm者25例。病例納入標準：①患者經穿刺病理活檢確診為乳腺癌；②患者病理標本檢測均顯示ER、PR及HER-2表達陰性；③根據世界衛生組織第5版乳腺腫瘤分類[8]和美國癌癥聯合委員會第8版乳腺癌分期系統[9]確認臨床分期為0-Ⅱ期的早期乳腺癌；④患者入院前未接受任何形式的手術治療、放療或化療。排除標準：①合并存在其他嚴重器質性病變或臟器功能不足；②合并存在其他惡性腫瘤；③精神狀態較差，無法有效配合研究的開展。另外，選取同期于院內進行治療的臨床分期為0-Ⅱ期的NTNBC患者80例作為NTNBC組，排除合并其他嚴重疾病及精神疾病，其中年齡34 ～77歲，平均(53.16±4.37)歲；腫瘤<2 cm者53例，腫瘤≥2 cm者27例。兩組患者年齡、腫瘤大小比較差異無統計學意義(均P>0.05)。本研究具體方案和內容經院內醫學倫理委員會審核通過，患者本人及其家屬對研究內容知曉且簽署知情同意書。

1.2 研究方法 采集患者腫瘤組織部位標本，應用10%甲醛溶液進行石蠟包埋處理后連續切片。對切片標本進行脫蠟水化處理和微波修復抗原處理，分別加入鼠抗人AR、Ki67、p53及EGFR單克隆一抗(批號依次為LOT210601、LOT210528、LOT210601、LOT210601，上海鈺博生物科技有限公司)。次日取出標本加入磷酸鹽緩沖液進行清洗后再次加入對應標記的二抗(批號依次為LOT210601、LOT210528、LOT210601、LOT210601，上海鈺博生物科技有限公司)室溫孵育30 min，最后利用二氨基聯苯胺進行顯色沖洗，蘇木精復染后進行封片判讀。判讀時將已經確認為陽性的腫瘤組織切片作為陽性對照，將磷酸鹽緩沖液沖洗后的切片作為陰性對照。由病理科兩位具有判讀經驗的醫師按照實驗說明進行雙盲判讀：AR視野內腫瘤細胞核著色比例<10%判為陰性(-)，≥10%判為陽性(+)；Ki67視野內腫瘤細胞核著色比例<14%判為陰性(-)，≥14%判為陽性(+)；p53視野內腫瘤細胞核著色比例<10%判為陰性(-)，≥10%判為陽性(+)；EGFR視野范圍內出現任何數量的腫瘤細胞胞質或胞膜著色即判為陽性(+)，否則判為陰性(-)。

1.3 觀察指標 比較兩組患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況，分析TNBC組內患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況與患者臨床病理特征(年齡、腫瘤直徑、組織學分級、淋巴結轉移、腫瘤組織脈管內浸潤)的關系。

2 結 果

2.1 兩組患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況比較 見表1。TNBC組患者AR陽性表達率顯著低于NTNBC組，Ki67、p53及EGFR陽性表達率顯著高于NTNBC組(均P<0.05)。

表1 兩組患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況比較[例(%)]

2.2 TNBC患者臨床病理特征與AR、Ki67表達情況關系 見表2。AR陽性表達患者中無淋巴結轉移患者比例高于有淋巴結轉移患者(P<0.05)。Ki67陽性表達患者中組織學分級Ⅱ期患者比例高于Ⅰ期患者(P<0.05)。

2.3 TNBC患者臨床病理特征與p53、EGFR表達情況關系 見表3。p53和EGFR陽性表達患者中有脈管內浸潤患者比例高于無脈管內浸潤患者(均P<0.05)。EGFR陽性表達患者中腫瘤直徑≥2 cm的患者比例高于腫瘤直徑<2 cm的患者(P<0.05)。

表2 TNBC患者臨床病理特征與AR、Ki67表達情況關系[例(%)]

表3 TNBC患者臨床病理特征與p53、EGFR表達情況關系[例(%)]

3 討 論

TNBC是目前臨床實踐中比較棘手的一類乳腺癌分型[10]。報道[11-12]顯示，TNBC患者相較于其他分型的乳腺癌患者，腫瘤組織呈現更強的侵襲性，更易發生遠端轉移和脈管內浸潤，患者預后情況往往較差，且生存率也較低。同時，由于TNBC組織的ER、PR和HER-2表達均為陰性，針對Luminal分型腫瘤的內分泌治療方案無法應用于TNBC患者的治療，抗HER-2靶向藥物也在TNBC患者的治療中收效甚微，特異治療方案的缺乏和患者病情的迅速發展使得TNBC成為目前學界對于乳腺癌研究的關注重點[13]。

從TNBC的發生機制看，典型內分泌指標的低表達決定了其與常見的激素依賴型乳腺癌的發生存在顯著區別。按照激素依賴的治療路徑，ER、PR表達陽性的乳腺癌可以通過針對性的激素調節得以治療，但在TNBC中ER和PR的表達并不活躍，激素調節的治療路徑并不可行[14]。但乳腺癌患者體內的激素變化并不限于ER和PR，AR受體在乳腺細胞的增殖中同樣發揮著重要的調控作用。從相關研究[15-16]來看，AR對于ER和PR的應答均有一定的反饋促進作用，尤其在Luminal A型乳腺癌中AR表達與ER和PR呈現顯著正相關性，因此通過免疫組化測定患者AR表達情況對于分型判斷、預后評估和病情分析均具有重要價值。本研究中，AR陽性表達患者比例在TNBC患者中更低，且AR陰性表達的TNBC患者更易發生淋巴結轉移，可見AR在抑制癌細胞增殖、控制遠端轉移發生中存在一定作用。馬少君等[17]研究也認為，AR能夠激活乳腺癌相關靶細胞以及靶細胞下游介導的細胞增殖通路，從而抑制腫瘤組織的增殖并降低轉移發生的可能性。

Ki67是腫瘤組織增殖細胞的重要核抗原，在腫瘤組織細胞的增殖和凋亡中發揮著重要的調控作用，因此Ki67表達情況在抗腫瘤研究領域被廣泛用于評價腫瘤細胞增殖[18-19]。本研究中，TNBC患者Ki67陽性表達比例較NTNBC患者更高，且Ki67陽性表達患者的組織學分級更高，可見Ki67在TNBC患者細胞增殖中同樣發揮重要的作用，但Ki67較為普遍的評價意義對于特異化治療方案的制訂參考價值有限。

p53是人體細胞中重要抑癌基因的表達產物，但半衰期極短，難以使用現有檢驗學手段測定。但在某些致癌因素的影響下，p53會出現從抑癌基因轉化為顯性癌基因的情形，從而使p53不再存在抑癌的特性，轉而作用于癌細胞的增殖和轉移，這種突變型p53基因的表達產物在癌細胞組織中較為穩定，易被免疫組化法所測定[20]。本研究中，在TNBC患者中有較高比例呈現p53陽性，且p53陽性患者更易出現脈管內浸潤。而EGFR作為典型的表皮生長因子指標，在腫瘤細胞增殖中充當著重要角色，對于HER-2陰性表達患者，EGFR無疑是良好的參考指標[21]。本研究中，EGFR陽性表達的患者腫瘤直徑更長，且患者出現脈管內浸潤的比例更高，提示EGFR和p53陽性在TNBC患者治療中具有重要參考價值。

綜上所述，TNBC早期患者AR表達降低，Ki67、p53、EGFR表達增加，且各指標與TNBC早期患者臨床病理特征間均存在一定相關關系。