類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清白細(xì)胞介素-32、白細(xì)胞介素-17和白細(xì)胞介素-10表達(dá)水平及臨床意義

安 新，馮 超，高利常

(開灤總醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 唐山 063000)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性復(fù)雜難治的自身免疫性疾病，以外周對(duì)稱性多關(guān)節(jié)慢性炎癥為主要特征，患者關(guān)節(jié)腫脹疼痛、功能障礙，晚期出現(xiàn)不同程度的畸形，甚至導(dǎo)致嚴(yán)重殘疾[1-3]。我國(guó)RA發(fā)病率為0.32%～0.36%，且其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。近年來研究[4]表明，促炎、抗炎細(xì)胞因子水平的異常變動(dòng)及免疫調(diào)節(jié)功能紊亂是可能是引起RA的重要原因。白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-32是一種炎癥細(xì)胞因子，存在6種剪接變異體，主要功能是誘導(dǎo)IL-6、IL-1β、腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)-α、促分裂原活化蛋白激酶和趨化因子等炎性介質(zhì)的異常表達(dá)，在自身免疫方面起重要作用，可誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，參與多種疾病過程[5-6]。IL-17是一種促炎細(xì)胞因子，主要功能就是誘發(fā)炎性反應(yīng)因子和趨化因子的產(chǎn)生，促炎特性是其宿主保護(hù)能力的關(guān)鍵，但不受限制的IL-17信號(hào)與免疫病理學(xué)、自身免疫性疾病和癌癥進(jìn)展相關(guān)[7-8]。IL-10是RA中一種重要的因子，由Th2細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞等多種細(xì)胞合成并分泌，具有免疫刺激和免疫抑制雙重作用，在宿主防御過程中起重要的調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答作用，主要作用于白細(xì)胞[9]。超敏C反應(yīng)蛋白(Hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，臨床作為炎性標(biāo)志物的檢測(cè)指標(biāo)，機(jī)體發(fā)生損傷及炎癥反應(yīng)時(shí)含量明顯升高，能迅速激活補(bǔ)體反應(yīng)，促進(jìn)吞噬作用[10]。本研究旨在探討RA患者血清中IL-32、IL-17、IL-10因子的表達(dá)情況，及三者與RA的臨床指標(biāo)hs-CRP、類風(fēng)濕因子(Rheumatoid factor，RF)、紅細(xì)胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate，ESR)、抗環(huán)瓜氨酸肽(Cyclic citrullinated peptide antibody，CCP)抗體的相關(guān)性，為免疫學(xué)上闡明RA發(fā)病機(jī)制及RA診治提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2020年4月至2021年4月期間臨床確診為RA的患者115例為RA組，其中男性25例，女性90例；年齡20～82歲，平均(56.52±20.38)歲。選取同期健康體檢者78例為對(duì)照組，其中男性18例，女性60例；年齡32～77歲，平均(55.2±19.79)歲。兩組患者年齡和性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。RA確診依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)診斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)估指數(shù)(DAS28)評(píng)分又分為兩個(gè)亞組：得分≥2.6分的病例為RA活動(dòng)期組，共90例；得分<2.6分的病例為RA緩解期組，共25例。排除標(biāo)準(zhǔn)：①所有研究對(duì)象4周內(nèi)無(wú)相關(guān)藥物治療史；②高血壓、糖尿病、血液病、腫瘤、心腦血管疾病者；③近1年受外傷或手術(shù)者；④伴有器官功能障礙者；⑤重度感染及其他免疫性疾病者。所有觀察對(duì)象均自愿參加本研究，并簽署知情同意書。本研究已通過開灤總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集：采集所有研究對(duì)象空腹靜脈血2管。第一管采集5 ml，2500 g離心10 min，收集血清并分裝，-70 ℃保存待測(cè)。另一管采集1.6 ml全血，加3.8%檸檬酸鈉0.4 ml抗凝，用于ESR測(cè)定。

1.2.2 樣本檢測(cè)：血清IL-32、IL-17和IL-10用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)，試劑盒(批號(hào)依次為E11122602、E12013008和E120130576)購(gòu)自上海百沃生物科技有限公司。抗CCP抗體試劑盒(批號(hào)：EC121001)購(gòu)于上海科新生物技術(shù)股份有限公司，嚴(yán)格按說明書操作。采用BIO-RAD 680型酶標(biāo)儀(美國(guó)伯樂)，測(cè)定450、630 nm波長(zhǎng)處光密度(OD)值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣本濃度。RF和hs-CRP檢測(cè)均采用免疫比濁法，由全自動(dòng)生化分析儀(日立7600-020)檢測(cè)。ESR使用動(dòng)態(tài)血沉壓積測(cè)試儀測(cè)定(北京賽科希德科技發(fā)展有限公司SD-1000)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清IL-32、IL-17、IL-10水平比較 見表1。RA組血清IL-32、IL-17、IL-10水平顯著高于對(duì)照組(均P<0.05)。

表1 兩組血清IL-32、IL-17、IL-10水平比較

2.2 RA患者不同時(shí)期及對(duì)照組血清IL-32、IL-17、IL-10水平比較 見表2。RA活動(dòng)期組IL-32、IL-17、IL-10水平高于RA緩解期組及對(duì)照組(均P<0.05)。RA緩解期組與對(duì)照組IL-32、IL-17、IL-10水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

表2 RA患者不同時(shí)期及對(duì)照組血清IL-32、IL-17、

2.3 兩組患者抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP水平比較 見表3。RA組患者抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP水平高于對(duì)照組(均P<0.05)。

2.4 RA患者血清IL-32、IL-17和IL-10水平與抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP相關(guān)性分析 見表4。Spearman相關(guān)性分析顯示，RA患者血清IL-32水平與抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP呈正相關(guān)(均P<0.01)；RA患者血清IL-17水平與RF、hs-CRP呈正相關(guān)(均P<0.05)；RA患者血清IL-10水平與ESR、hs-CRP呈正相關(guān)(均P<0.05)。

表3 兩組患者抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP水平比較

表4 RA患者血清IL-32、IL-17和IL-10水平與抗CCP抗體、RF、ESR、hs-CRP相關(guān)性

3 討 論

研究[4]發(fā)現(xiàn)，RA發(fā)病與機(jī)體內(nèi)促炎、抗炎細(xì)胞因子的異常表達(dá)以及免疫調(diào)節(jié)異常相關(guān)，維持促炎細(xì)胞因子與抗炎細(xì)胞因子之間的平衡被認(rèn)為是RA致病機(jī)制的核心。

IL-32存在廣泛，如NK細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，可誘發(fā)所在細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，參與炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞分化等過程，對(duì)機(jī)體正常免疫應(yīng)答發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[11]。近年來研究發(fā)現(xiàn)IL-32與RA發(fā)生密切相關(guān)。Joosten等[12]發(fā)現(xiàn)，RA患者滑膜組織中IL-32含量較高。桂明等[13]報(bào)道，RA患者外周血IL-32含量較高，并且升高水平與RA病情嚴(yán)重程度及骨質(zhì)破壞程度密切相關(guān)，提示IL-32參與了RA病理過程。本研究發(fā)現(xiàn)，RA患者血清IL-32水平顯著高于對(duì)照組，活動(dòng)期顯著高于緩解期，說明IL-32可能參與了RA的發(fā)生，并與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)。同時(shí)，RA患者IL-32與抗CCP抗體、RF、hs-CRP、ESR水平呈正相關(guān)，并且隨著RA病情加重而表達(dá)增強(qiáng)，緩解期有所下降。由此可見，IL-32在RA疾病進(jìn)程中具有抗炎功能，隨著病情減輕到消失，逐漸恢復(fù)正常水平。

有研究[14-15]表明，IL-17在損傷、生理應(yīng)急和感染反應(yīng)中，在維持健康方面具有重要的緩解和組織依賴性作用，且在RA炎癥形成中可能發(fā)揮了更為關(guān)鍵的作用。IL-17可能通過增強(qiáng)促炎及炎癥相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)擴(kuò)大病灶范圍，進(jìn)而導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎的典型癥狀[16]。李茜等[17]發(fā)現(xiàn)，RA患者血清IL-17水平與RA病情嚴(yán)重程度高度相關(guān)，推斷IL-17可以作為判斷病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)。王小超等[18]研究發(fā)現(xiàn)，不同程度的骨關(guān)節(jié)損害患者血清IL-17水平有差異，與骨關(guān)節(jié)損害程度呈正比，提示IL-17早期參與了RA的發(fā)生，并在骨關(guān)節(jié)炎癥和損害過程中持續(xù)發(fā)生作用。本研究也發(fā)現(xiàn)，RA活動(dòng)期組患者血清IL-17水平顯著高于RA緩解組和對(duì)照組，同時(shí)RA組患者血清IL-17水平與RF、hs-CRP呈正相關(guān)，說明IL-17在RA發(fā)病不同階段差異性表達(dá)，可以推斷其表達(dá)水平與骨關(guān)節(jié)損害程度相關(guān)。

IL-10既可發(fā)揮抗炎作用，也可發(fā)揮促炎作用[19]。黃建軍等[20]研究發(fā)現(xiàn)，RA患者病變關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)液中IL-10大量表達(dá)。朱江等[21]發(fā)現(xiàn)，IL-10低水平組RA動(dòng)物關(guān)節(jié)腫大程度顯著高于IL-10高水平組，表明此過程中發(fā)揮抗炎作用。另有研究發(fā)現(xiàn)RA患者血清和滑液中IL-10表達(dá)水平均較高，但也有報(bào)道稱RA活動(dòng)期患者IL-10水平降低[22]。本研究證實(shí)血清IL-10水平只有在RA活動(dòng)期組升高，在RA緩解期組并不高。而且，IL-10水平只與ESR、hs-CRP水平呈正相關(guān)，提示IL-10此時(shí)可能具有促炎作用。由此推測(cè)，緩解期的IL-10可能兼有抗炎和促炎雙重作用。IL-10相對(duì)缺乏時(shí)，就無(wú)法抑制炎癥反應(yīng)[23]。因此，通過免疫干預(yù)提高IL-10水平就能降低炎癥強(qiáng)度，對(duì)修復(fù)關(guān)節(jié)和保護(hù)軟骨有積極作用。

CRP在臨床上通常是區(qū)別細(xì)菌感染和病毒感染的一個(gè)重要指標(biāo)。但其在正常檢測(cè)范圍內(nèi)對(duì)低程度炎癥反應(yīng)預(yù)測(cè)不靈敏。hs-CRP免疫比濁等技術(shù)使檢測(cè)靈敏度得到了很大提高。hs-CRP水平在RA診斷上意義重大[24]。本研究發(fā)現(xiàn)，RA活動(dòng)期組患者h(yuǎn)s-CRP水平顯著高于RA緩解期組及對(duì)照組，其血清水平與病情高度相關(guān)，說明hs-CRP在RA患者的療效及病情預(yù)后評(píng)估中有重要意義。

綜上所述，RA患者血清IL-32、IL-17、IL-10等細(xì)胞因子水平顯著升高，提示它們?cè)谝欢ǔ潭壬蠀⑴cRA的病理過程；同時(shí)，活動(dòng)期RA患者IL-32、IL-17、hs-CRP水平高于緩解期，說明上述因子與疾病嚴(yán)重程度及活動(dòng)性高度相關(guān)，在RA炎癥及關(guān)節(jié)骨破壞過程中起重要作用，可作為判定RA病情的輔助指標(biāo)。