家兔尿生成實驗若干體會

羅布占堆 潘永越

西藏大學醫學院實驗中心，西藏拉薩市 850000

機能學實驗是一門重要的醫學基礎實驗課，主要內容包括生理學、藥理學、病理學三門課程的內容。當前機能學實驗面臨的問題是效果不理想，實驗成功率不高。總結失敗的原因，主要有：實驗流程中，觀察項目多、時間較長、操作步驟較復雜、家兔少尿甚至無尿等情況。為了更好地提高實驗的成功率，筆者在以往大量的實驗中歸納出一定的經驗，以供參考。

1 實驗前和實驗中的準備

動物實驗的效果受到多方面因素的影響，如動物因素、環境因素等，以下將從這兩個方面來探討在實驗過程中如何更好提高實驗的成功率。

1.1 實驗動物的合理選擇 從具有正規飼養資格的廠家采購健康成年(體重為2.5～3kg)，品種為新西蘭大耳的白兔。在正式實驗前，保證動物的身體健康情況，如給予動物高水分的食物，讓動物可以自由飲水[1]。

1.2 實驗溫濕度的控制 首先，在正式開設實驗前，先確定實驗的季節和時間。建議在兩個時間段選擇，每年的4月份和10月份中室溫恒溫在20℃左右的時間。開始實驗前，保持實驗室整潔干凈和通風性，濕度控制在45%～70%。其次，試驗中，先用恒溫浴槽保溫滴注的生理鹽水，并時刻注意觀察動物體溫，減小實驗中動物創口，防止因家兔的抵抗力減弱而造成家兔尿液生成的減少。最后，手術結束后，在創口處用溫熱的濕紗布覆蓋，從而達到減少體液蒸發的作用[2]。

2 藥物注射問題

多種藥物的多次靜脈注射也是影響家兔尿生成的重要因素之一。從過往教學經驗看，雖然參加實驗的學生在實驗前已進行過家兔耳緣靜注射的操作，但操作熟練度還需要改善。由于熟練度不高，大多數學生在完成一兩種藥品的多次注射后，動物的兩只靜脈已被破壞或者兩耳水腫，無法進行后續的實驗。為了改善這一情況，可以采取如下措施：

2.1 改變輸液給藥方式，合理改造輸液裝置 在過往實驗中，傳統的耳緣靜脈麻醉可能是操作失敗的一個原因。在實驗中，由于需要用多種藥物多次地對實驗中的家兔從耳緣靜脈給藥，家兔的耳朵很容易在實驗中水腫或者靜脈受到破壞，實驗很容易就此失敗。為此，在參照其他院校采用靜脈輸液給藥方法基礎上，筆者在多次的實驗中，找到一種可以解決輸液和給藥沖突的輸液方式——耳緣靜脈輸液給藥。這種方式的輸液主要采用生理鹽水進行，大部分院校解決輸液和給藥沖突的方法主要有兩種：(1)在連接輸液針的地方連接一個三通管；(2)直接通過拔插輸液針，首先將輸液針和注射器相連，其次在給藥的間隙將輸液針和輸液裝置相連。但這兩種方式的弊端在于，空氣很容易進入其中，引發氣體栓塞。針對這種情況，在大量實驗基礎上，筆者對輸液裝置進行了改進：用一小段橡皮軟膠管在輸液管和輸液針頭之間連接，以便用注射器直接扎膠管，防止實驗過程中氣體進入[3]。有研究者提出，該過程中也許有從膠管的針眼往外漏液的情況，但由于靜脈壓力不是很高，故將這一個設想排除。整體而言，這種方式可以極大提高實驗的成功率。

2.2 麻醉時選擇一次性輸液器針頭 在一次性輸液器針頭的選擇上，筆者取用輸液器前面的細交管及針頭，將原來實驗采用的6～6.5號針頭換成較細的5～6號輸液器的針頭，這樣做的原因在于，初學者用較細的針頭穿刺略粗的靜脈血管，成功率相對較高(學生穿刺的成功率高達98%)。

2.3 保留靜脈輸液器針頭 為了達到較好的實驗效果，減少失敗的次數和節約時間，在給家兔做實驗時，仿照人輸液時固定針頭的方法，在第一次注射麻醉藥品后，固定好兔耳緣靜脈處的針頭。同時，為了防止空氣進入，用脫脂棉及白膠布堵好輸液器前端與針管連接的接口每次換藥時，將抽好的藥管直接插入針頭，這個過程一直持續到所需注射的藥品注射完畢。

3 選擇合適的手術方式

選擇最適宜的手術操作有助于鍛煉學生在復雜耗時的實驗(如靜脈麻醉、動脈插管、膀胱插管等)的動手能力。

3.1 采用股動脈穿刺的方法測量血壓 頸總動脈插管是現在尿生成實驗中常用的一種測量血壓方法。動脈插管對于實驗來講非常重要，但操作過程相對較難，任何操作失誤都有可能會導致動物大出血或循環血量降低，并最終導致尿量生成的減少。因而，為了更好地提高實驗的成功率，可以考慮采用一種創傷小，操作快，對動物的生理功能影響小，可多次操作且實驗結果穩定性高的方法——股動脈穿刺。具體的步驟為：首先，在一側腹股溝區處剪毛備皮，隨后準確找到相應的股動脈位置，在準備穿刺前，將頭皮針接肝素帽端，將動脈留置針內的空氣排盡；其次，將動脈留置針針體(約 1/2的位置) 插進股動脈管內，當看見回血后立即拔出針芯。此時需繃緊皮膚，將剩余針體推入血管內，直至針體 3/4的位置，最后接上壓力換能器(充滿肝素)測量動脈血壓。

3.2 選擇膀胱插管進行尿液的收集 當前收集尿液的方法主要與三種：輸尿管插管、尿道插管和膀胱插管。其中，因為輸尿管插管的弊端(常導致創傷性無尿)，這種方法已經被絕大部分實驗室棄用。雖然后期有人提出第二種創傷小且效果較好的微創尿道插管，但這一方法很大程度上取決于實驗者的熟練程度，且實際試驗成功率不高。如果讓手法不熟練的學生練習，很容易因為反復嘗試性的試驗導致尿道水腫，并最終影響尿液的排放。此外，如果實驗者導尿管穿透尿道的插入方向不對，很難再次找準方向而進入膀胱。除了實驗者的熟練度和檢驗的影響外，動物的次雄性也會影響尿道插管成功率。如果采用尿道比較特殊的雌性家兔，則試驗更不容易成功。為了解決當前的難題，本實驗室在多次的實驗和教學中總結出第三種方法，即膀胱插管實驗，不受操作者熟練度的影響，成功率相對更高。另外，這種手術帶來的創傷在家兔的承受范圍之內，創傷性無尿的發生情況較少。

3.3 選擇尿道口結扎 在以往的實驗指導教材中提出，為了防止尿液從尿道口流出，在進行膀胱插管前，需要將膀胱頸部結扎。筆者認為，這一措施是不必要的。一般而言，只有當膀胱內尿量達一定充盈度時(400～500ml)，尿液才會從尿道流出。當壁上的牽張感受器收到興奮刺激時，動物的逼尿肌才會收縮，此時內括約肌開始松弛，并最終促使尿液經尿道排出。但采用膀胱插管時，家兔在膀胱排空后，膀胱插管會將產生的尿液即時引流出體外，也就不會出現教材上提到的膀胱儲尿充盈，因而也就不會出現尿液從尿道口流出的情況。這個在筆者的教學過程中也得到驗證，筆者發現，手術完進行記滴的過程中，很少會出現尿液從尿道口流出的情況。因此為了減少操作時間和學生在分離膀胱頸時損傷輸尿管和膀胱可能造成的實驗失誤，筆者建議在采用膀胱插管法時不結扎膀胱頸部。

4 實驗項目(尿生成的各個影響因素)順序的調整

在尿生成實驗中給藥的順序要在“促使尿生成增多與減少的藥物交替給予”這一基本原則下進行。建議實驗注射順序為：首先是生理鹽水，其次是去甲腎上腺素，再次是20%葡萄糖，從次是垂體后葉素，最后是速尿。將生理鹽水這一步驟放在開始的原因在于，筆者采用的是靜脈輸液的方式給藥，為了調快輸液的速度，筆者采用生理鹽水來觀察對尿生成的影響。當家兔的尿液增加后，要把輸液的速度控制在2滴 /9～10s，從而減少生理鹽水對尿生成的影響[4]。在實驗中，若因意外因素導致長時間無尿的情況，可以再次調快輸液速度直至出現尿液。隨后再進行后面的實驗步驟，此時下一個實驗項目注射的藥物必須是能夠使尿液減少的藥物。

總之，為了提高實驗成功率和達到較好的教學目的，筆者對實驗進行探索性的改進和創新，可以使得經驗較少和熟練度較低的學生更好上手，在實驗程序上進行簡化，避免手術過程中可能出現的各種因家兔無尿或者手術失敗而無法繼續實驗的現象(如大失血、損傷性閉尿以及體液丟失)，從而提高實驗的成功率。