不同地區不同成熟度青梅有機酸的測定及相關性分析

趙旭珠 - 夏 陳 朱永清 - 陳 建 陳 渝

(1. 四川省農業科學院農產品加工研究所，四川 成都 610066；2. 四川丹梅生物科技有限公司，四川 達州 635000)

青梅(VaticamangachapoiBlanco)又稱酸梅子、果梅等，為薔薇科李屬，果實直徑2～3 cm，果皮顏色由綠色到黃色[1]。中國是青梅的原產地及世界上適合生產青梅地域最廣的國家，廣東、廣西、四川、浙江、江蘇、福建及臺灣等18個省(自治區)均適合生產[2]。青梅營養價值和藥用價值很高[3]，可以促進消化、改善腸道[4]、抗疲勞[5]、護肝[6]、預防心血管疾病[7]、抑菌、消炎[8]等。目前已有關于青梅中有機酸的相關研究報道，余洋洋等[1]對青梅中有機酸的種類進行了研究，發現青梅中有機酸含量最高的是檸檬酸和蘋果酸，分別為6.5%，3.4%；翟煥趁等[9]對福建青梅中有機酸含量進行了測定，發現青梅中有機酸含量最高的是檸檬酸和蘋果酸，分別為4.50%～4.83%，0.24%～0.67%。但未見文獻對達州青梅中有機酸含量進行研究和分析。

青梅作為中國的特色果品之一，隨著人們對其營養和價值的認識，青梅加工產品已成為科研開發和市場消費的熱點[10]。達州作為“中國的烏梅之鄉”，青梅的年均產量在10萬t以上，但因為達州的鮮果轉化成品條件不足，對青梅中有機酸等功效成分的基礎研究比較缺乏。試驗擬對10種有機酸進行全面分析，以期為達州青梅功效成分的深入研究、產品深加工提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

鮮青梅樣品(詳見表1)：四川丹梅生物科技有限公司。

表1 9個不同區域同一品種青梅信息表

1.1.2 試劑

草酸、酒石酸、蘋果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸、齊墩果酸、熊果酸對照品：北京索萊寶科技有限公司；

甲醇、乙腈：色譜純，美國MREDA公司；

磷酸、磷酸銨：分析純，成都市科龍化工試劑廠；

試驗用水均為超純水。

1.1.3 主要儀器設備

電熱恒溫鼓風干燥箱：DHG-9075A型，上海齊欣科學儀器有限公司；

高速萬能粉碎機：FW-100型，北京科偉永興儀器有限公司；

數控超聲波清洗器：KQ-250DB型，昆山市超聲儀器有限公司；

低速離心機：TD-4Z型，四川蜀科儀器有限公司；

高效液相色譜儀：1260型，美國Agilent公司；

優普系列超純水機：UPC-1-10T型，成都超純科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品前期處理 青梅樣品經分揀、清洗，60 ℃烘干打粉，過60目篩，-18 ℃貯藏備用。

1.2.2 樣品的制備

(1) 草酸、酒石酸、蘋果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸分析樣品：稱取青梅粉末0.5 g，加25 mL超純水溶解，于40 ℃超聲提取40 min，4 000 r/min離心5 min，收集上清液，用水定容至25 mL，以備用[11]。

(2) 齊墩果酸、熊果酸分析樣品：稱取青梅粉末1 g，加25 mL甲醇溶解，于40 ℃超聲提取40 min，4 000 r/min離心5 min，收集上清液，用水定容至25 mL，以備用[11]。

1.2.3 標準品溶液的制備

(1) 草酸等8種有機酸標準品：稱取一定量的草酸、酒石酸、蘋果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸，分別用超純水定容至10 mL使標準品母液的質量濃度為2.04，3.62，3.51，3.30，1.75，2.00，3.07，3.58 mg/mL，冷藏備用[12]。

(2) 齊墩果酸、熊果酸標準品：稱取一定量的齊墩果酸、熊果酸，分別用甲醇溶解并定容至10 mL，標準品母液質量濃度為0.98 mg/mL，用0.22 μm微孔濾膜過濾，備用[12]。

1.2.4 色譜條件

(1) 分析草酸、酒石酸、蘋果酸、抗壞血酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸的色譜條件：色譜柱為Eclipse XDB-C18(3.0 mm×250 mm，5 μm)；檢測波長214 nm；柱溫30 ℃；進樣量5 μL；流速0.5 mL/min；流動相：0.5%磷酸二氫銨—水溶液(A)，0.1%磷酸(B)；等度洗脫：0～12.9 min，10% B[13]。

(2) 分析齊墩果酸、熊果酸的色譜條件：色譜柱為Eclipse SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測波長210 nm；柱溫30 ℃；進樣量20 μL；流速1 mL/min；流動相：16 mmol/L磷酸鹽溶液(A)，70%乙腈(B)，等度洗脫：0～15 min，70% B[13]。

1.3 數據處理

所得數據均為3次重復試驗的平均值，使用Microsoft Excel 2016進行數據整理，并通過SPSS 20.0采用Turkey方法對數據進行分析。

2 結果與分析

2.1 有機酸標準品及青梅樣品的HPLC圖譜

從圖1可以看出，有機酸的出峰時間均在12 min之內，而且各類物質得到了較好的分離。該方法分離效果較好，適合有機酸含量的測定。

2.2 標準曲線

以各有機酸的響應值為縱坐標(Y)，對應的質量濃度為橫坐標(X)繪制標準曲線。如表2所示，10種有機酸的峰面積和質量濃度之間呈較好的線性關系，相關系數為0.999 0～0.999 9。

2.3 有機酸含量

如表3所示，不同地區不同成熟度青梅中，有機酸含量最高的是景市鎮全熟黃果中的檸檬酸，為19.546%；其次是百節趙家全熟黃果中的蘋果酸，為4.013%；草酸、L-乳酸、乙酸、酒石酸、丁二酸、齊墩果酸含量相對較少，抗壞血酸、熊果酸含量極少。翟煥趁等[9]用高效液相色譜法對福建青梅中有機酸含量進行了測定，發現青梅中有機酸含量最高的是檸檬酸，為4.83%，其次是蘋果酸，為0.67%。達州青梅和福建青梅相比，達州青梅中檸檬酸、蘋果酸的含量較高，可能是由產地和(或)成熟度不同導致。

圖1 有機酸標準品和青梅樣品HPLC圖譜Figure 1 HPLC spectra of organic acid standards and Prunus mume samples

2.4 相關性

如表4所示，齊墩果酸與熊果酸呈極顯著正相關；L-乳酸與乙酸、檸檬酸呈顯著正相關，與丁二酸呈極顯著正相關；乙酸與檸檬酸呈顯著正相關；檸檬酸與齊墩果酸、熊果酸呈顯著正相關。有研究發現，有機酸會隨著熟度的不同呈上升下降趨勢[14-15]，其代謝也與多種酶有關[16]。

3 結論

對四川達州不同地區不同成熟度的青梅中10種有機酸含量進行了測定，結果發現，10種有機酸中含量最高的是檸檬酸，為19.546%，其次是蘋果酸，為4.013%，比其他產區青梅[9]的分析結果高。四川達州有“中國的烏梅之鄉”之美稱，但因為達州對鮮果轉化成品條件不足，對青梅中有機酸等功效成分的研究比較缺乏，因此有必要對達州青梅的功效成分等進行深入研究，為產品深加工提供依據。

表2 10種有機酸的出峰時間、回歸方程、線性范圍

表3 青梅中10種有機酸的質量分數?

續表3

表4 相關性分析?