飼料中玉米赤霉烯酮檢測方法概況

高琳 王磊

（天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心 300193）

目前關(guān)于飼料中玉米赤霉烯酮（Zearalenone）的檢測方法很多，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，不僅可以定性判斷飼料中是否存在玉米赤霉烯酮，還可以對其進(jìn)行精準(zhǔn)定量，為飼料安全提供技術(shù)保障。

1 薄層層析法

薄層層析法（Thin Layer Chromatography，TLC）是較早用于檢測玉米赤霉烯酮的試驗方法，也是飼料中玉米赤霉烯酮檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法之一。TLC 的工作原理為待檢樣品通過提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在紫外光下（波長為365nm）會出現(xiàn)黃綠色或藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯現(xiàn)的最低檢出量即可測定待檢樣品玉米赤霉烯酮含量。TLC 操作簡便、成本低、可定性定量判斷，但由于樣品前期處理復(fù)雜，樣品純化難度高，結(jié)果分析耗時，受操作者個人主觀判斷的影響較大，結(jié)果的準(zhǔn)確度及靈敏度不高，因此，TLC 已不能很好地滿足現(xiàn)代檢測要求，應(yīng)用受到一定限制。謝賢慶等利用TLC方法對飼料霉變引發(fā)豬流產(chǎn)和死亡的飼料進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TLC 檢測玉米赤霉烯酮含量為2000ug/kg[1]。羅雪云等對玉米和小麥中玉米赤霉烯酮進(jìn)行加測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，薄層板上的最低檢出量為0.04ug，小麥和玉米200ppb 的回收率分別為85%～100%和7%～100%[2]。

2 氣相色譜法

氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）是一種對易揮發(fā)而不發(fā)生分解的化合物進(jìn)行分離與分析的色譜技術(shù)，可以同時檢測多種不同的鐮刀菌毒素，GC 檢測飼料中玉米赤霉烯酮的優(yōu)勢在于應(yīng)用范圍廣、檢測回收率高、檢測靈敏度強(qiáng)，可定量定性分析玉米赤霉烯酮，但檢測儀器成本較高，限制了GC 技術(shù)的推廣。溫肇霞等研究發(fā)現(xiàn)，GC 檢測3 種不同鐮刀菌毒素，各毒素回收率均在85%以上[3]。李楠等利用毛細(xì)管色譜柱在規(guī)定的氣譜條件下對飼料和谷物中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、二醋酸蹜草鐮刀菌烯醇（DAS）、T-2 毒素和玉米赤霉烯酮毒素4 種不同的鐮刀菌毒素進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)GC 檢測能完全分離這4 種不同的鐮刀菌毒素衍生物，且穩(wěn)定性能搞，其中玉米赤霉烯酮的檢測限達(dá)到1.5×10-8g[4]。

3 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是國內(nèi)外廣泛應(yīng)用且結(jié)果可靠性極高的一種真菌毒素加測方法。HPLC 檢測原理為基于適當(dāng)?shù)牧鲃酉鄺l件，選擇適宜的色譜柱，分離待檢樣品毒素，再利用紫外檢測器、熒光檢測器或電化學(xué)檢測器等不同檢測儀器將被分析組在柱流出液中濃度的變化轉(zhuǎn)化為光學(xué)或電學(xué)信號，最后計算出色譜峰的面積，即可獲得待檢樣品毒素含量。HPLC 是一種可批量處理，結(jié)果可定性、定量分析，檢測信號強(qiáng)、準(zhǔn)確度、靈敏度高，是檢測范圍廣泛的檢測技術(shù)。實際操作時要根據(jù)不同真菌毒素的性質(zhì)對試驗條件進(jìn)行優(yōu)化。

4 超高效液相色譜法

超高效液相色譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）基于HPLC 技術(shù)原理和理論，利用超小粒徑填料色譜柱及超高壓輸液泵，在超高速度運(yùn)轉(zhuǎn)下仍然具有高分離性和靈敏度的檢測優(yōu)勢，適合于微量樣本或樣本中微量玉米赤霉烯酮的檢測，可準(zhǔn)確定量飼料中玉米赤霉烯酮含量。蘇碧玲等利用UPLC 檢測玉米油中玉米赤霉烯酮含量，樣品用84%乙腈水溶液提取，經(jīng)BDS HYPERSIL C18 色譜柱分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，UPLC 檢測方法具有樣品處理簡單、靈敏度高、耗時短等優(yōu)點。

5 生物學(xué)檢測法

生物學(xué)檢測法是檢測飼料中玉米赤霉烯酮毒素存在與否及毒性強(qiáng)弱的一種基本方法，具有操作簡便、儀器成本低、耗時短等特點，可以應(yīng)用于大量飼料樣品玉米赤霉烯酮毒素的初步篩選。如對禾谷鐮孢菌中玉米赤霉烯酮生物合成途徑中的必需基因PKS4 設(shè)計特異性引物，通過檢測PKS4 基因間接檢測禾谷鐮孢菌玉米赤霉烯酮毒素存在與否，同時結(jié)合ELISA 檢測方法對玉米赤霉烯酮毒素進(jìn)行定性和定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCR 方法可以穩(wěn)定擴(kuò)增出1076bp，該片段和PKS4 基因（NCBI 登錄號DQ019316）相同區(qū)段序列相似性達(dá)99.63%，建立了一種快速篩選小麥籽粒中玉米赤霉烯酮污染的檢測方法。

6 免疫學(xué)檢測方法

免疫學(xué)檢測方法的檢測原理主要基于抗原抗體反應(yīng)，包括化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析（Electro-Chemiluminescence Immunoassay，ECL）、免疫層析方法（Lateral Flow Immunoassay，LFIA）、酶聯(lián)免疫吸附分析（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、膠體金免疫層析方法（Colloidal Gold Immunoassay，CGIA）、免疫熒光（Immunofluorescence，IF）和免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）等。吳才章等基于CLIA 技術(shù)建立了一種真菌毒素低濃度檢測方法，該系統(tǒng)檢出限為0.1ug/kg，樣品加標(biāo)回收率超過90%，標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)為0.9965，系統(tǒng)檢測玉米赤霉烯酮的線性范圍為0～60ug/kg。ELISA 檢測技術(shù)是一種成本低、耗時短、操作簡單，可定量定性分析玉米赤霉烯酮含量的快速檢測手段，廣泛應(yīng)用于飼料中生物毒素、致病菌和農(nóng)業(yè)殘留等成分的檢測。王文琣等利用間接競爭性ELISA 檢測技術(shù)對飼料及其原理中玉米赤霉烯酮含量進(jìn)行檢查，通過試驗優(yōu)化研制出一種玉米赤霉烯酮ELISA 試劑盒，和德國拜發(fā)檢測試劑盒比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩個不同的試劑盒對樣本陰陽性判定基本一致，自行開發(fā)的ELISA 試劑盒玉米赤霉烯酮檢測限為100ug/kg，回收率為78.5～115.0%。金玉等基于免疫層析技術(shù)研制出一種用于檢測糧食和飼料中玉米赤霉烯酮金納米花免疫層析卡，該方法獲得的檢測靈敏度是傳統(tǒng)玉米赤霉烯酮納米金免疫層析檢測卡的6 倍，與ELISA 檢測方法相比，結(jié)果的總符合率為90.5%，可快速篩查玉米赤霉烯酮污染程度低的飼料和糧食樣本。

7 結(jié)語

綜上所述，玉米赤霉烯酮的傳統(tǒng)檢測方法主要有TLC、GC和HPLC 等技術(shù)，隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，試驗室常用UPLCMS/MS 來提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，但這種聯(lián)合技術(shù)成本高、操作復(fù)雜，無法適應(yīng)大規(guī)模的樣本篩查工作。膠體金免疫層析、ELISA 能滿足大批量樣品篩查，且耗時短、檢測結(jié)果特異性較高，但結(jié)果的重復(fù)性和靈敏度需要進(jìn)一步提高。生物學(xué)檢測技術(shù)如熒光定量方法實現(xiàn)了微量玉米赤霉烯酮的檢測，省時、成本低，便于日?？焖俸Y查。因此，在今后玉米赤霉烯酮檢測中可以加大對生物學(xué)檢測技術(shù)的推廣和應(yīng)用，讓玉米赤霉烯酮檢測更加精準(zhǔn)、便捷。