抗致病性大腸桿菌敏感藥物的試驗篩選

黃林鳳

福建省龍巖市農業學校，福建龍巖364000

大腸桿菌病是獸醫臨床上常見的傳染病，該病的發生沒有明顯的季節性和地域性，不同種類的養殖場一年四季均有發病。隨著養殖集約化程度越來越高，該病的發生越來越嚴重，加之蛋雞產蛋期抗生素的禁用和飼料無抗政策的出臺，臨床上大腸桿菌的發病率呈現上升趨勢。臨床上盲目使用抗生素和盲目加大使用劑量，導致大腸桿菌耐藥性越來越強，臨床治療難度越來越大。臨床依托藥敏試驗可以準確選擇高敏感的藥物對大腸桿菌病進行有效治療，大大提高了臨床治愈率。

1 流行癥狀

2020年10月至2020年12月，筆者在臨床診療中共計剖檢大腸桿菌病例12例，共同的典型癥狀均為零星死亡，病死雞爪干癟，脫水明顯，肛門處羽毛臟亂。剖檢癥狀包心包肝，腹膜炎，氣囊炎。均為典型的敗血型大腸桿菌。

2 治療效果

對上述病例筆者均進行無菌采集病死雞肝臟、心臟等病料。通過實驗室藥敏試驗，選擇敏感藥物進行投喂治療。通過3～5 d 的藥物治療，均已經全部治愈。

3 大腸桿菌藥敏試驗的操作方法

3.1 培養基的選擇

臨床上大腸桿菌的藥敏試驗一般選擇普通瓊脂培養基和麥康凱培養基，大多數化學試劑商店均可以買到。買到成品培養基原料，首先要對培養皿進行清洗、消毒、干燥。然后按照說明書進行操作，稱取適量的原料，按要求加熱，融化后倒入培養皿中，冷卻后備用。麥康凱培養基是大腸桿菌的鑒別培養基，大腸桿菌在該培養基上生長為紅色菌落，其他菌在此培養基上無此現象。

3.2 藥敏片的準備

準備或購買實驗室專用的定性濾紙，濾紙的量不能太少，盡量準備一次夠用半年，將準備好的定性濾紙用專用的打孔工具，打成圓形小紙片，直徑為6 mm。打完孔后仔細挑選，篩選出形狀不規則的紙片丟棄，保留形狀規則的圓形紙片。將挑選好的圓形濾紙片裝入事先準備好的清潔干燥的小玻璃空瓶中，瓶口用牛皮紙包扎封好。將裝有紙片的玻璃瓶放入高壓鍋中，121.3 kPa 高壓20 min 消毒，高壓消毒后取出放入37 ℃溫箱或烘箱中烘干，使其完全干燥，備用。

選取需要試驗篩選的商品藥，品種越多越好，品種越多臨床可選性越大。選好需要使用的藥品后，按照說明書的治療量配置藥液，也可略高于說明使用量進行配置。藥液中的藥物要充分混勻，不能有沉淀。此稀釋液即為用于做藥敏試驗的藥液。

用無菌鑷子將之前消毒烘干后的小圓紙片分別放入每個無菌的小玻璃瓶中，每個小玻璃瓶中加入一種藥液，藥液要將小圓紙片全部浸入其中。將小玻璃瓶用橡膠塞封好，轉動玻璃瓶，使小紙片在瓶內充分翻轉，完全浸透藥液。翻動時注意動作幅度，使紙片不能被搗爛。在每個小玻璃瓶上用防水粘貼標明藥物成分、商品名稱及配置時間。取出浸透藥液的小圓紙片，然后放入37 ℃恒溫箱內烘干24 h，干燥后裝瓶密封備用，如條件允許可以真空干燥，效果更佳。保存時防止受潮，應置干燥陰涼處存放，有效期最長6個月。

3.3 細菌的培養

無菌采集病死雞肝臟，將組織剪放在酒精燈火焰上消毒后，剪取小部分病料，將切面輕輕涂于培養基上，均勻涂滿后置于培養箱，37 ℃培養24 h。

培養24 h 后，培養基上長滿不規則小菌落，在無菌操作臺中，將接種環放在酒精燈火焰上進行消毒，挑取培養基上的菌落，挑取量不能太多也不能太少，手持接種環以劃線的方式涂在普通瓊脂培養基上。

在無菌操作臺中，將鑷子放在酒精燈火焰上進行消毒片刻，鑷子冷卻后夾取藥敏片，輕輕貼在培養基上，放上后用鑷子輕輕壓實，使藥敏片與培養基貼合緊密。藥敏片的位置要適中，每個培養基中放7個左右，擺放呈梅花形。在培養皿背面標號，每個藥敏片都要相應編號，對應標號記錄藥品名稱。將放完藥敏片的培養基置于37 ℃恒溫培養箱中培養24 h后，取出觀察，記錄相應數據。

3.4 結果觀察

24 h 后，取出培養基，將培養皿倒置后，觀察藥敏片周圍的抑菌環大小，抑菌圈越大，說明藥物對該大腸桿菌的抑菌效果越好，抑菌圈越小，說明藥物抑菌效果越差。如果藥敏片周圍沒有抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。

3.5 結果判定

藥敏試驗的結果判定，一般應按抑菌圈的大小來作為判定藥物抑菌效果高低的標準。抑菌圈直徑20 mm 以上為極敏，15～20 mm 為高敏，10～14 mm為中敏，10 mm以下為低敏，沒有抑菌環為耐藥。

4 討 論

近年來，藥敏試驗在臨床上被廣泛應用，很好地指導了臨床用藥，減少了細菌的耐藥情況，為養殖業減少不必要的經濟損失，為食品安全保駕護航。藥敏試驗給臨床帶來便利的同時，也存在一些問題：一是藥敏試驗需要一定的條件，如恒溫培養箱、無菌操作臺等，所以一些小型診療機構和小型養殖場無法開展。二是藥敏試驗屬于體外抑菌試驗，所以試驗結果受藥物的吸收率、給藥途徑等因素影響，臨床治療效果不能達到100%。三是試驗中藥液的配制濃度不同，所以和臨床實際效果存在誤差。臨床中還有可能出現藥敏結果無高敏的情況，一般可以選擇2 種中敏或低敏感藥物聯合配伍使用，也會達到理想的治療效果，聯合用藥一般應充分考慮是否有配伍禁忌。