兒童LLR株輪狀病毒口服減毒活疫苗接種效果及影響因素的研究分析

張 潮，姜 毅，宋顯相，林海碧，管敏昌

(1.溫州市人民醫(yī)院/溫州市婦女兒童醫(yī)院兒童呼吸科，浙江 溫州 325000；2.鹿城區(qū)雙嶼街道黃龍社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，浙江 溫州 325000；3.臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))恩澤醫(yī)院兒內(nèi)科，浙江 臺(tái)州 318050)

輪狀病毒(rotavirus，RV)是嬰幼兒腹瀉常見(jiàn)病原體，輕者出現(xiàn)亞臨床感染，重者可引起嚴(yán)重脫水[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，RV每年導(dǎo)致全世界11 100～13 500萬(wàn)人感染[2]。現(xiàn)階段RV沒(méi)有有效的特異性治療，疫苗是減少嬰幼兒RV感染和死亡的有效手段[3]。但RV不同血清型之間缺乏有效的交叉保護(hù)作用，如何客觀評(píng)估RV疫苗保護(hù)效果的相關(guān)研究較少[4]。因此，本研究隨機(jī)招募100例接受RV減毒株(LLR株，國(guó)藥準(zhǔn)字S20010002)口服者為疫苗組和拒絕接種疫苗100例為對(duì)照組，比較兩組RV感染情況，并檢測(cè)外周血輪狀病毒IgA抗體(rotavirus specific immunoglobulin A，RV-IgA)和輪狀病毒IgG抗體(rotavirus specific immunoglobulin G，RV-IgG)，同時(shí)對(duì)LLR株輪狀病毒疫苗接種效果影響因素進(jìn)行研究。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年7月至2019年7月浙江省溫州市鹿城區(qū)雙嶼街道黃龍社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心疫苗接種點(diǎn)已建立健康記錄的2個(gè)月至3歲的健康嬰幼兒為研究對(duì)象，從中隨機(jī)招募100例接受RV減毒株(LLR株)口服者為疫苗組和100例拒絕接種疫苗者為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡2月～3歲，既往6月內(nèi)未曾患RV病毒性腸炎；②既往未曾患皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征、腎病綜合征等免疫性疾病；未發(fā)現(xiàn)遺傳性疾病、過(guò)敏史、慢性傳染病；48小時(shí)內(nèi)無(wú)發(fā)熱和腹瀉，距離最后一次疫苗接種≥30天；③否認(rèn)2周內(nèi)使用過(guò)免疫調(diào)節(jié)劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)疫苗所有成分過(guò)敏者，嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病者，有腸套疊病史者；②某些吞噬細(xì)胞缺陷疾病者，用免疫球蛋白治療的主要抗體缺陷疾病者；③使用免疫抑制藥物者。兩組性別、年齡、體重等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性，見(jiàn)表1。所有研究對(duì)象的監(jiān)護(hù)人均知情同意自愿參與研究。

表1 兩組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between the two

1.2研究方法

納入的兩組研究對(duì)象分別建立微信群，采用門(mén)診隨訪、電話(huà)聯(lián)系、微信群調(diào)查的方法隨訪12個(gè)月，調(diào)查兩組間發(fā)生RV感染情況，研究其保護(hù)效果及影響因素。

調(diào)查表是在查閱相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上[5]，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)、專(zhuān)家論證而完成。調(diào)查內(nèi)容包括兒童代碼、性別、出生日期、是否接種疫苗、首劑接種時(shí)間、RV疫苗接種日期、疫苗接種次數(shù)、喂養(yǎng)情況、腸道環(huán)境、糞便RV抗原、外周血RV-IgA和RV-IgG等。根據(jù)2016年《中國(guó)兒童急性感染性腹瀉臨床實(shí)踐指南》記錄RV腸炎發(fā)生情況[6]。

1.3糞便RV抗原檢測(cè)

采用膠體金免疫層析技術(shù)，將糞便標(biāo)本加入樣孔與RV單克隆抗體結(jié)合，形成膠體金抗體-抗原復(fù)合物，在檢測(cè)區(qū)呈現(xiàn)粉紅色沉淀線即為陽(yáng)性。由溫州市人民醫(yī)院(溫州市婦女兒童醫(yī)院)檢驗(yàn)科副主任技師以上職稱(chēng)者負(fù)責(zé)操作，嚴(yán)格按照試劑盒操作方法檢測(cè)，在10～20 min內(nèi)肉眼觀察結(jié)果。試劑(批號(hào)20170917)購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司。

1.4外周血RV-IgA和RV-IgG檢測(cè)

分別于免疫接種前和免疫接種后第30天左右的清晨空腹抽取靜脈血2mL，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測(cè)RV-IgA和RV-IgG。檢測(cè)儀器為鄭州安圖PHON酶標(biāo)儀，試劑(批號(hào)20170823和批號(hào)20170619)購(gòu)自深圳安群生物科技有限公司。由臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))恩澤醫(yī)院檢驗(yàn)科副主任技師以上職稱(chēng)者負(fù)責(zé)操作，所有操作需按照試劑盒的相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行及結(jié)果判定。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1兩組糞便RV抗原和外周血RV-IgA和RV-IgG水平比較

疫苗組糞便RV抗原陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.24，P<0.01)；疫苗組外周血RV-IgA水平、RV-IgG水平顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為16.14、15.68，P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2 兩組糞便RV抗原和外周血RV-IgA和RV-IgG水平比較Table 2 Comparison of stool RV antigen and RV-IgA and RV-IgG levels of peripheralblood between the two

2.2 RV疫苗接種效果單因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，首劑接種時(shí)間越早，疫苗接種效果越好(χ2=30.76，P<0.01)；疫苗接種次數(shù)越多，疫苗接種效果越好(χ2=7.71，P<0.05)；母乳喂養(yǎng)者，疫苗接種效果越好(χ2=33.63，P<0.01)；而性別和腸道疾病無(wú)顯著差異(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 RV接種效果的單因素分析[n(%)]Table 3 Univariate analysis of the inoculation effect of RV[n(%)]

2.3多因素Logistic回歸分析

選取單因素分析中影響RV接種效果的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量，將相關(guān)變量代入多因素Logistic回歸方程中。結(jié)果顯示，相比母乳喂養(yǎng)，牛乳喂養(yǎng)是影響RV接種效果的危險(xiǎn)因素(OR=0.097，P<0.05)；相比首劑接種時(shí)間在0～6月齡，首劑接種在7～12月齡是影響RV接種效果的危險(xiǎn)因素(OR=0.074，P<0.05)；相比接種一次，接種3次是保護(hù)因素(OR=4.725，P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 影響RV疫苗接種效果的多因素Logistic回歸分析Table 4 Multivariate Logistic regression analysis of influencing the RV vaccination inoculation effect

3討論

3.1 RV減毒株(LLR株)疫苗接種可降低糞便RV抗原檢出率，增加外周血RV-IgA、RV-IgG水平

國(guó)內(nèi)數(shù)據(jù)顯示，5歲以下嬰幼兒腹瀉病例中RV的檢出率為12%～36%[7]，目前RV感染仍為嬰幼兒腹瀉的主要原因。有學(xué)者進(jìn)行多因素Logistic回歸分析顯示，兒童RV疫苗接種率受到兒童戶(hù)籍、家庭收入、家長(zhǎng)認(rèn)知水平和接種醫(yī)生建議等多種因素影響[8]。由于RV不同血清型之間缺乏有效的交叉保護(hù)作用，且新流行毒株的不斷出現(xiàn)，為RV新疫苗的研發(fā)與應(yīng)用提出了挑戰(zhàn)。評(píng)估RV疫苗保護(hù)效果不僅會(huì)增強(qiáng)公眾對(duì)疫苗接種的信任，而且保證了疫苗接種的有效性[9]。以往調(diào)查研究顯示，我國(guó)的LLR株RV疫苗對(duì)RV腹瀉的保護(hù)效果為76%，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，免疫小鼠的全身和局部RV特異性IgG、IgA抗體水平均明顯升高[10-11]。本研究顯示，RV減毒株(LLR株)疫苗接種后，糞便RV抗原檢出率明顯降低，提示LLR株可顯著減少RV性腸炎發(fā)生率。而外周血RV-IgA和RV-IgG水平疫苗組顯著高于對(duì)照組，提示外周血RV-IgA和RV-IgG水平對(duì)RV減毒株(LLR株)接種效果有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。

3.2及早接種及母乳喂養(yǎng)可增強(qiáng)RV疫苗接種效果

有研究顯示，RV疫苗有效性與RV受體因素、腸道微生態(tài)因素、口服脊灰疫苗的干擾、母?jìng)骺贵w干擾及宿主胃腸疾病、營(yíng)養(yǎng)狀況等因素有關(guān)[12-13]。本研究單因素分析結(jié)果顯示，首劑接種時(shí)間越早、疫苗接種次數(shù)越多、選擇母乳喂養(yǎng)者，糞便RV抗原檢出率顯著降低，疫苗接種效果越好。由于樣本量較小等原因，性別和腸道疾病暫未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步行多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，首劑接種在7～12月、牛乳喂養(yǎng)是影響RV疫苗接種效果的危險(xiǎn)因素，接種劑次為3次是影響RV疫苗接種效果的保護(hù)因素。因此，要提高RV疫苗接種效果，應(yīng)及早接種，且提倡母乳喂養(yǎng)，從而不斷改善RV疫苗接種成功率。其中母乳喂養(yǎng)提高RV疫苗接種效果的原因可能為母乳的營(yíng)養(yǎng)豐富，營(yíng)養(yǎng)素的比例適當(dāng)，容易被嬰兒消化吸收，同時(shí)母乳中的免疫球蛋白可以增強(qiáng)嬰兒抵抗力[14]。

綜上所述，RV減毒株(LLR株)可減少RV性腸炎發(fā)生率，外周血RV-IgA和RV-IgG水平對(duì)RV減毒株接種效果有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。另外，要提高RV疫苗接種效果，應(yīng)及早接種，且盡可能母乳喂養(yǎng)。