泡囊草氯仿提取物中3個二苯乙烷類化合物的分離鑒定

胡畢斯哈拉圖，包玉秋，白蘇雅，王青虎

（1.包頭市蒙醫中醫醫院，內蒙古 包頭 014000；2.內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028000；3.內蒙古民族大學 蒙醫藥學院，內蒙古 通遼 028043）

泡囊草（Physochlaina phsaloides（L.）G. Don）來源于茄科植物泡囊草的干燥根，主要分布于我國內蒙古、新疆、吉林、黑龍江等地區，生長于草地、山坡、山溝［1］.泡囊草蒙醫用藥始載于《無誤蒙藥鑒》，后在《認藥白晶鑒》中也有記載，現已載入《中華人民共和國衛生部藥品標準》（蒙藥分冊），該藥具有清“協日烏素”、消腫、殺蟲、鎮痛、解痙等功效，用于“黏”性胃炎、蟲疾、腦刺痛、頭痛等的治療.目前，泡囊草化學成分及其分析研究報道［2-4］較少，主要化學成分有山莨菪堿、莨菪堿、東莨菪堿和紅古豆堿等4個生物堿及新蘆丁和槲皮素三糖苷等2個黃酮類化合物.課題組為了進一步研究泡囊草的化學成分，對采集于內蒙古呼倫貝爾的泡囊草展開了化學成分分離分析研究，結果從泡囊草不同溶劑提取物中發現2個生物堿、3個環烯醚萜苷和7個香豆素及其苷類化合物［5-7］.筆者為了完成泡囊草氯仿提取物的后續工作，采用硅膠柱色譜和反相制備HPLC法對其進行了分離，得到3個二苯乙烷類化合物，分別為1-（3-羥基苯基）-2-（5-羥基-3-甲氧基苯基）乙烷（1）、1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二甲氧基苯基）乙烷（2）和1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二羥基苯基）乙烷（3）.

1 儀器和材料

反相制備高效液相色譜儀（LC-20AP）：日本島津公司；液質聯用儀（Waters Xevo G2-S QT）：美國沃特斯公司；紫外光譜儀（UV-2201）：日本島津公司；紅外光譜儀（TN-200）：日本島津公司；核磁共振波譜儀（Bruker AVAIVCEⅢ-500）：布魯克公司（德國）；氘代氯仿：Cambridge Isotope Laboratories Inc；柱色譜硅膠：青島海洋化工廠；其他試劑均為分析純.泡囊草收集于內蒙古呼倫貝爾，經蒙藥學專家布和巴特爾鑒定為茄科植物泡囊草的干燥根.

2 方法與結果

2.1 提取與分離取泡囊草的干燥根1.0 kg，先用石油醚（3.0 L）回流提取2次，每次4 h，合并提取液.然后，藥渣用氯仿（10 L）回流提取2次，每次4 h，合并提取液并減壓回收溶劑，得到氯仿提取物55.0 g.稱取氯仿提取物50.0 g，用少許加硅膠拌樣，自然晾干后上安裝好的硅膠色譜柱，以氯仿-丙酮為洗脫液，不同濃度洗脫.把氯仿-丙酮（20∶1）的洗脫液合并，減壓回收溶劑，得到洗脫物850 mg.洗脫物用色譜甲醇溶解，溶液經0.45 μm 微孔濾膜過濾，濾液后續HPLC（島津，日本）分離備用.HPLC 的條件：Shim-pack Prep ODS柱（25 mm i.d.×350 mm），流動相為MeOH-H2O（65∶5，v/v），流速為5 mL·min-1，檢測波長為254 nm，進樣量為500 μL.在上述色譜條件下，分離得到化合物1（24 mg）、2（15 mg）、3（13 mg）.經化合物1-3的一維和二維核磁共振數據和質譜數據分析，確定了其結構式，見圖1.

圖1 化合物1-3的結構式Fig. 1 Structural formula of compounds 1-3

2.2 結構鑒定

2.2.1 化合物1 無色針狀結晶，易溶于氯仿、乙醚、甲醇等有機溶劑.UV（CH3OH）λmax（nm）（logε）：259（3.12）；IR（KBr）νmax（cm-1）：3 309、1 581、1 480、1 302、1 177 cm-1.化合物1 質譜圖中給出m/z 243.102 5［M-H］-（計算值為243.102 1），其分子量為244，分子式為C15H16O3.化合物1的1H NMR譜（表1）中顯示出7 個芳香質子信號，分別在δH6.63（1H，d，J=8.0 Hz）、7.05（1H，t，J=8.0 Hz）、6.57（1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz）、6.62（1H，brs）、6.23（1H，d，J=1.5 Hz）、6.14（1H，t，J=2.0 Hz）、6.22（1H，brs）.在HSQC譜中觀察到δH6.63 與δc 119.4（C-6'）相關，7.05 與129.6（C-5'）相關，6.57 與113.2（C-4'）相關，6.62 與115.7（C-2'）相關，6.23 與105.3（C-2''）相關，6.14與99.2（C-4''）相關，6.22與108.3（C-6''）相關.此外，1H NMR譜中還給出了1個甲氧基質子信號和2個亞甲基質子信號，分別是δH3.66（3H，s）和2.72（2H，m）、2.70（2H，m）.在HSQC譜中觀察到δH3.66 與55.2（-OCH3）相關，2.72與37.6（C-1）相關，2.70與37.3（C-3）相關.

化合物1 的13C NMR 譜（表1）中給出了2 個亞甲基碳信號、1 個甲氧基碳信號和2 個苯基碳信號.在HMBC 譜中觀察到δH3.66（3H，s）與C-3''（δC160.8）相關，2.72（2H，m，H-1）與C-2'（δC115.7）相關，C-6'（δC119.4）與C-1''（δC144.2）相關，2.70（2H，m，H-2）與C-2''（δC105.3）相關，C-6''（δC108.3）與C-1'（δC143.7）相關，說明1個甲氧基連接于C-3''位，而2個苯基分別連接于C-1和C-2.

表1 化合物1的1H和13C-NMR數據（分別為500和125 MHz，CDCI3）Tab. 11H and13C-NMR data（500 and 125 MHz，respectively CDCl3）of compound 1

此外，在HMBC譜中觀察到δH6.62（1H，brs，H-2'）與C-4'（δC113.2）、C-6'（δC119.4）和C-1（δC37.6）相關，7.05（1H，t，J= 8.0 Hz，H-5'）與C-3'（δC157.7）和C-1'（δC143.4）相關，6.14（1H，t，J=2.0 Hz，H-4''）與C-2''（δC105.3）、C-3''（δC160.8）、C-5''（δC158.8）和C-6''（δC108.3）相關，6.23（1H，d，J=1.5 Hz，H-2''）w與C-2（δC37.4）、C-6''（δC108.6）和C-4''（δC99.2）相關，這些進一步證實了化合物1的結構式.經以上其NMR數據分析，確定該化合物為1-（3-hydroxyphenyl）-2-（5-hydroxy-3-methoxyphenyl）ethane.

2.2.2 化合物2 無色針狀結晶，易溶于氯仿、乙醚、甲醇等有機溶劑.UV（CH3OH）λmax（nm）（logε）：260（3.12）；IR（KBr）νmax（cm-1）：3 310、1 583、1 485、1 311、1 177 cm-1.化合物2 質譜圖中給出m/z 257.102 5［M-H］-（計算值為257.102 1），其分子量為258，分子式為C16H18O3.化合物2的NMR數據（表2）與化合物1的相似，除了C-5''羥基信號消失，取而代之的是1 個甲氧基信號.在HMBC 譜中δH3.66（3H，s）與C-3''相關，而3.68（3H，s）與C-5''相關，說明2個甲氧基分別連接于C-3''和C-5''.因此，化合物2的結構式確定為1-（3-hydroxyphenyl）-2-（3，5-dimethoxyphenyl）ethane.

表2 化合物2的1H和13C-NMR數據（分別為500和125 MHz，CDCI3）Tab. 21H and13C-NMR data（500 and 125 MHz，respectively CDCl3）of compound 2

2.2.3 化合物3 無色針狀結晶，易溶于氯仿、乙醚、甲醇等有機溶劑.UV（CH3OH）λmax（nm）（logε）：252（3.12）；IR（KBr）νmax（cm-1）：3 306、1 583、1 481、1 301、1 171 cm-1.化合物3 質譜圖中給出m/z 229.087 0［M-H］-（計算值為229.086 5），其分子量為230，分子式為C14H14O3.化合物3的NMR數據（表3）與化合物1的相似，除了C-3''甲氧基信號消失，取而代之的是1 個羥基信號.因此，化合物3 的結構式確定為1-（3- hydroxyphenyl）-2-（3，5-dihydroxyphenyl）ethane.

表3 化合物3的1H和13C-NMR數據（分別為500和125 MHz，CDCI3）Tab. 31H and13C-NMR data（500 and 125 MHz，respectively CDCl3）of compound 3

3 討論

課題組在泡囊草化學成分前期研究［5，7］中，依次用石油醚、氯仿和乙酸乙酯回流提取，得到其提取物，采用硅膠柱色譜法對其氯仿提取物進行分離得到7-甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、6，7，8-三甲氧基香豆素、8-羥基-6，7-二甲氧基香豆素和6，7-二羥基-8-甲氧基香豆素等5個化合物.筆者利用同樣提取方法得到其氯仿提取物，運用硅膠柱色譜和HPLC法對氯仿提取物進一步分離，得到上述5個化合物外，還得到了3個二苯乙烷類化合物，分別為1-（3-羥基苯基）-2-（5-羥基-3-甲氧基苯基）乙烷（1）、1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二甲氧基苯基）乙烷（2）和1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二羥基苯基）乙烷（3）. 3個化合物均在泡囊草中首次分離得到.此結果說明，藥材化學成分分離過程中各種色譜的合理結合運用使分離結果為更佳.