快速評估過氧化氫酶的方法研究

尤 雅 張秀紅 黃 甜 李雪梅 孟 勇

綿陽禾本生物工程有限公司，四川綿陽621000

目前市售商品過氧化氫酶種類繁多，質量良莠不齊。多數評判過氧化氫酶的方法是采用酶學性質比較，但此方法操作繁瑣，耗費時間。本文旨在建立一套快速評估過氧化氫酶的方法，為使用者選擇過氧化氫酶提供基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取4 個不同廠家的液體過氧化氫酶，分別編號A、B、C、D；德國默克（MERCK）過氧化氫快速檢測試紙條，操作方法見說明書。

1.2 試驗試劑與儀器

1）主要試劑。30%過氧化氫、無水磷酸二氫鈉、十二水合磷酸氫二鈉、硫代硫酸鈉、硫酸等，以上試劑均為分析純。

2）儀器設備。78HW-1 數顯恒溫磁力攪拌器，杭州儀表電機有限公司；SHA-CA 水浴恒溫振蕩器，常州冠軍儀器制造有限公司；堿式滴定管；pH 計，成都世紀方舟科技有限公司。

1.3 試驗方法

對過氧化氫酶A、B、C、D 進行酶活檢測、電泳圖譜及過氧化氫試紙條試驗。

1）酶活檢測。采用硫代硫酸鈉滴定法，對A、B、C、D 進行酶活檢測。

2）NATIVE-PAGE 電泳圖譜。參照文獻[1]方法，測定A、B、C、D 的蛋白質分子質量。

3）過氧化氫試紙條試驗。用純水將樣品A、B、C、D 酶活統一稀釋成10 萬倍；配制0.1%的過氧化氫溶液，分別調至pH 2.5、pH 3.5、pH 11.5；取同一pH 值的過氧化氫溶液100 mL，分別加入統一酶活的過氧化氫酶，酶添加量0.02%；每分鐘用過氧化氫試紙條檢測溶液中過氧化氫的殘留。

2 結果與分析

2.1 酶活檢測

4 種過氧化氫酶的檢測酶活與廠家標識酶活差異較大，A、C 檢測酶活低于標識酶活，B、D 檢測酶活高于標識酶活。

2.2 NATIVE-PAGE 電泳圖譜

4 種過氧化氫酶電泳圖譜的差異，A 主條帶蛋白分子質量在95 ku 附近；B 主條帶蛋白分子質量在130 ku 附近；C 和D 電泳圖譜相似，主條帶蛋白分子質量分別在72，95 和130 ku 附近。

2.3 過氧化氫試紙條試驗

此試驗中顏色越深表示過氧化氫殘留越多，過氧化氫酶降解過氧化氫效果越差。

1）pH 2.5 條件下，4 種過氧化氫酶的試紙條結果。在pH 2.5 條件下，B 在反應4 min 時試紙條變為無色，對比標準比色卡過氧化氫含量為0 mg/L，表明溶液中過氧化氫已被降解完；A、C、D 在反應4 min 時試紙條顏色仍為深藍，超出標準比色卡顏色范圍，且與0 min 顏色無差異，表明溶液中過氧化氫幾乎沒被降解。

2）pH 3.5 條件下，4 種過氧化氫酶的試紙條結果。在pH 3.5 條件下，A、B、D 在反應8 min 時試紙條變為無色，表明溶液中過氧化氫已被降解完；C 在反應8 min 時試紙條顏色較淺，對比標準比色卡過氧化氫含量在0.5 mg/L 左右，表明溶液中還有微量的過氧化氫沒被降解。

3）pH 11.5 條件下，4 種過氧化氫酶的試紙條結果。在pH 11.5 條件下，A、C、D 在反應5 min 時試紙條變為無色，表明溶液中過氧化氫已被降解完；B 在反應5 min 時試紙條顏色較淺，對比標準比色卡過氧化氫含量在0.5～2.0 mg/L，表明溶液中還有微量的過氧化氫沒被降解。

3 討 論

從試紙條試驗可以看出，在pH 2.5 條件下，B降解過氧化氫效果最好，A、C、D 幾乎沒有降解效果，表明B 耐酸性好，A、C、D 不耐酸，在pH 2.5 時均已失去活性。在pH 3.5 條件下，A、B、D 降解過氧化氫效果相當，略優于C。在pH 11.5 條件下，A、C、D 降解過氧化氫效果相當，略優于B，表明4 種過氧化氫酶均有良好的耐堿性。

4 種酶的不同，其蛋白分子質量不一樣，C 和D的條帶相似，但與A、B 各不相同，可能是因為其生產過程不一樣，如菌種、生產工藝不同，導致4 種過氧化氫酶存在差異。

4 結 論

本試驗只判斷了4 種過氧化氫酶的耐酸堿性，如需判斷耐溫性，可對過氧化氫酶進行耐溫處理后再進行試紙條對比試驗。此方法能夠快速判斷過氧化氫酶在不同條件下降解過氧化氫的效果，從而判斷其性質，這為使用者選擇高效優質的過氧化氫酶提供一定的理論基礎。