原發性肝癌的分子診斷標記物研究進展

文 /黃志卓

我國肝癌（HCC）患病率占全球一半左右，全球新發HCC病例約為40萬，我國占20萬左右，且每年11萬人中死亡率占50%左右，占全球HCC死亡率45%左右[1-2]。該疾病主要是機體肝內膽管細胞及肝細胞受到多種因素影響而產生癌變，若未對其實施針對性治療，可嚴重危及患者生命安全[3]。相關研究顯示[4]，HCC在惡性腫瘤可極易誘發患者死亡，且多見于男性患者，年齡主要集中在40歲左右，同時具有預見性差、發病快等癥狀，因此針對性對該疾患者實施早治療、早診斷具有重要意義。由于病因眾多，發病機制復雜，只有在早期檢測診斷中及時發現問題，采取相關治療措施，才能保證患者存活率和生活質量。臨床檢測中對于原發性肝癌的診斷通常以影像學檢查、肝穿刺、血清甲胎蛋白（AFP）檢測為主。取活體組織進行肝臟疾病的診斷，但肝臟穿刺比較痛苦，常常出現患者不愿配合、感染、出血等諸多問題[5-6]。目前采用血清進行肝功能檢查逐漸成為臨床上常用的診斷方式，具有無創性、重復性好、準確性高、患者配合程度高、能反映不同肝病患者的肝功損害程度等優點[7]。雖然基本可以有效檢測患者的腫瘤情況，但是檢測結果詳細情況和準確率仍有待提高。

1 HCC血清診斷分子

1.1 甲胎蛋白（AFP）

AFP在結構上與人類的血清蛋白十分相似，是由胎兒發育早期肝臟與卵黃囊組成的一種血清蛋白，在肝細胞受損后，肝功能下降，其數值也會出現增高，肝癌細胞產生的AFP具有促進腫瘤生長的作用，并抑制免疫系統作用，因此AFP水平可反映腫瘤生長情況是臨床診斷肝癌重要參考指標[8-9]。目前AFP是國際上公認的用于篩查肝癌的最好的腫瘤標記物，若患者的AFP水平長時間持續高于400～500 ug/L時，采用肝臟超聲與AFP的聯合檢測可以有效地早期診斷早期肝癌[10]。

1.2 血清谷氨酰轉肽酶（GGT）

血清GGT與AFP均有癌胚特性，GGT是一種質膜糖蛋白，血清中的GGT主要來自肝臟，主要存在于人體肝腎腸道等組織中，當肝內阻塞時，能誘導肝細胞分泌大量的GGT[11-12]。當肝臟實體腫瘤組織生長時，細胞腫脹、壓迫肝細胞，肝細胞受到擠壓的刺激，使得正常肝細胞受激產生大量GGT，合成和分泌GGT增加，同時肝癌細胞本身也能產生大量GGT，釋放到外周血液中，故血清GGT水平明顯增加，有時甚至高達600IU/L以上[13]。

1.3 透明質酸

透明質酸是一種氨基葡萄糖聚糖，它由一系列重復的二糖組成，β-dN-乙酰葡糖胺和β-d-葡萄糖醛酸通過β-1,4和β-1,3糖苷結合連接，肝臟是合成透明質酸的重要器官。在肝臟中，透明質酸被竇狀內皮細胞降解，血清透明質酸水平可能受肝細胞損傷和炎癥反應誘導的星狀細胞轉化為肌成纖維細胞的影響，因此透明質酸在肝內的半衰期非常短（2-5分鐘），當發生肝癌時，肝細胞清除及降解透明質酸的能力下降，血清透明質酸濃度升高，因此透明質酸濃度升高可能和肝細胞受損相關。

2 HCC候選組織診斷分子

2.1 熱休克蛋白70(Heat Shock Protein 70，HSP70)

HSP70在正常細胞中表達較低，但在應激后表達明顯增加。寡核苷酸芯片被用于檢測人類肝細胞癌及其鄰近組織，結果顯示，95個基因可區分早期肝癌及其周圍組織，92個基因可區分早期肝癌和晚期肝癌，實時RT-PCR和免疫組化證實HSP70表達上調，因此，HSP70可能是鑒別肝臟良惡性疾病一個潛在的組織分子標志物[14]。

2.2 谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase，GS)

GS催化腫瘤細胞主要能量來源于谷氨酰胺的合成，GS在癌前病變、早期肝癌和晚期肝癌中的陽性率分別為1/23、4/31、19/149。GS、HSP70的敏感性和特異性分別為72%和100%。因此，聯合檢測GS、HSP70是肝癌早期診斷的理想指標[15]。

3 其他相關分子

3.1 DNA甲基化

DNA甲基化是腫瘤中最常見的分子改變之一，采用甲基化敏感性隨機擴增PCR技術對92個HCC基因的甲基化譜進行研究后發現，有32個基因的甲基化頻率有變化，其中與早期肝癌相關的基因有14個，如CSPG2、OXCT、cyclin和RASSF1A等；與晚期肝癌相關的基因有9個，如DBCCR1、PENK、IRF7等[16]。這些基因的甲基化變化有待進一步驗證，其中一些可能是診斷肝癌的潛在分子。

3.2 微RNA(microRNA，miRNA)

MiRNA作為單鏈非編碼的小分子RNA，能夠與靶基因mRNA發生結合，從而引發降解或者翻譯抑制效果，進一步對靶蛋白表達水平進行影響，同時在信號通路中具有意義。MiRNA異常的表達水平與多種腫瘤的發生密切相關，研究發現MiRNA與腫瘤的發生、轉移微環境形成、浸潤甚至治療耐受等有密切關系[17]。近年來，眾多研究表明MiRNA與腫瘤發生關系密切，主要是通過下調抗腫瘤免疫反應而發揮作用，由于相關的靶基因對腫瘤的作用不同，不同MiRNA在腫瘤中表達情況也存在差異，因而可以根據這種表達差異來判斷MiRNA對腫瘤的調控作用[18]。

4 小結

新的分子標記物在研究人員的不懈努力下不斷被發現，分子標記物作為在肝細胞肝癌中起調控作用的非編碼小分子，在肝癌的診斷、治療和預后中都有一定的價值[19-20]，可以為腫瘤的早期診斷、靶向治療、預后評估等提供新思路和新方法，已成為研究熱點[21-22]。但每種腫瘤標記物在具體的臨床應用當中均會受到不同條件的限制，因此，需要對多種腫瘤標記物進行臨床檢測，聯合檢測可在一定程度上提高診斷準確率，進而指導臨床的針對性治療，改善預后[23-25]。