血清microRNA-873在2型糖尿病視網膜病變患者中的作用機制*

賈蒙嵐 廖沁 歐陽凌云 張娣 袁安 陽光

(成都市第二人民醫院1.眼科；2.內分泌科，四川 成都 610017)

糖尿病視網膜病變(Diabetic retinopathy，DR)是2型糖尿病患者常見的慢性并發癥之一，目前發病機制未明[1-2]?，F階段研究已證實，由白介素-17(Interleukin-17，IL-17)介導的慢性炎癥反應在DR的血管病變及視網膜損傷過程中占有重要作用[3-4]。有研究報道，microRNA-873與IL-17的關系密切，且參與免疫炎癥反應的過程。國內有學者研究發現，IL-17誘導的microRNA-873可通過靶向A20泛素編輯酶參與自身免疫性腦脊髓炎的發病機制[5-6]。但是，目前關于microRNA-873與2型糖尿病視網膜病變之間關系的研究尚少。本研究通過觀察2型糖尿病視網膜病變患者血清microRNA-873的表達量，進一步分析其與2型糖尿病視網膜病變之間的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月～2019年12月我院收治并確診為2型糖尿病的患者150例作為研究對象，根據是否存在視網膜病變將所有的入組對象分為2型糖尿病合并視網膜病變組(DR組)78例和2型糖尿病不合并視網膜病變組(NDR組)72例。納入標準：①診斷標準參照《我國糖尿病臨床診療指南》中關于2型糖尿病及糖尿病視網膜病變的診斷標準。②正在接受降糖治療。排除標準：①合并嚴重心、肝、肺及腦血管疾病患者。②患有1型糖尿病或其他特殊類型的糖尿病患者。③存在全身免疫系統疾病或急、慢性感染者。④患有其他原因導致的視網膜病變或存在內眼手術史。本研究患者均知情同意，并經醫院倫理委員會批準。

1.2 microRNA-873表達量檢測 所有研究對象均于清晨空腹抽取肘靜脈血3mL，抗凝后離心(2000r/min，15min)，選擇miRNeasy Mini Kits提取總RNA，嚴格按照說明書進行?？俁NA提取后進行PCR反應，PCR反應體系：預反應(95℃，2min)-解鏈(95℃，5s)-退火(56℃，5s)-延伸(72℃，35s)，共35個循環，運用2-ΔΔCT相對定量計算目標基因含量。

1.3 視網膜病變相關炎癥指標及微血管內皮功能指標檢測 所有入組患者均于入院后抽取清晨空腹肘靜脈5 mL，離心后留取上清液-80℃保存。酶聯免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清中TNF-α、IL-6和IL-17水平；內皮細胞(ECs)、內皮祖細胞(EPCs)計數百分比采用流式細胞儀檢測(美國畢地公司)。

2 結果

2.1 兩組患者一般資料比較 DR組患者中合并糖尿病腎病者22例，合并糖尿病周圍神經病變者15例，其他者6例，NDR組患者中合并糖尿病腎病者17例，合并糖尿病周圍神經病變者10例，其他者5例；DR組患者平均糖化血紅蛋白值明顯高于NDR組(P<0.05)，其他一般資料方面無統計學差異(P>0.05)，見表1。DR組患者中視網膜病變非增殖期患者52例，增殖期患者26例。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 兩組患者microRNA-873表達量比較 相對于NDR組患者，DR組患者體內microRNA-873表達量顯著升高，差異有統計學意義(P<0.001)，見表2。

表2 兩組患者microRNA-873表達量比較

2.3 兩組患者心肌損傷及相關炎癥指標結果比較 與NDR組患者相比，DR組患者的血清TNF-α、IL-6及IL-17表達量均明顯較高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者心肌損傷及相關炎癥指標結果比較

2.4 兩組患者微血管內皮功能指標比較 DR組患者的Ecs水平明顯高于NDR組，而EPCs水平明顯低于NDR組，差異均具有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 兩組患者微血管內皮功能指標比較

2.5 microRNA-873表達量與視網膜病變各指標間的相關性 通過Pearson相關性分析結果顯示，患者組血清microRNA-873表達量與TNF-α、IL-6、IL-17表達量及Ecs百分比間均存在明顯正相關，與EPCs百分比間均存在明顯負相關，差異均具有統計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 microRNA-873表達量與視網膜病變各指標間的相關性

3 討論

近年來，2型糖尿病發病率逐年增加，糖尿病視網膜病變亦成為嚴重降低患者生活質量的慢性并發癥[7-8]。研究表明，糖尿病視網膜病變的主要病理特征是視網膜微血管損傷[9]。同時，據流行病學調查發現，因微循環障礙導致死亡的2型糖尿病患者約有一半以上。因此，對于糖尿病微血管病變發病機制的研究逐漸引起了醫學界的廣大關注[10-11]。

現階段研究發現，微小RNA可參與多種疾病的各個生化過程中。有研究報道，microRNAs 表達量改變在視網膜血管病變中占有重要作用，如microRNA-410可抑制視網膜新生血管形成等[12-14]。本研究發現，在合并有視網膜病變的糖尿病患者存在microRNA-873表達量的顯著升高，且差異具有統計學意義(P<0.05)。既往研究表明，microRNA-873不僅具有抑制細胞增殖、引起細胞凋亡的作用，還可參與炎癥免疫反應[15-16]。

炎癥反應在視網膜病變中的作用不容忽視，本研究還發現，與NDR組患者相比，DR組患者的血清TNF-α、IL-6及IL-17表達量均明顯較高(P<0.05)，與既往研究的結果相一致[17]。微血管內皮功能方面比較，DR組患者的Ecs水平明顯高于NDR組，而EPCs水平明顯低于NDR組(P<0.05)。進一步通過Pearson相關性分析結果顯示，患者組血清microRNA-873表達量與TNF-α、IL-6、IL-17表達量及Ecs百分比間均存在明顯正相關(P<0.05)，與EPCs百分比間均存在明顯負相關(P<0.05)。上述結果提示，microRNA-873表達量改變與炎癥反應介質和微血管內皮功能改變顯著相關，考慮其可能原因有：①炎癥免疫反應，有研究表明，microRNA-873表達量改變可直接影響血清IL-6、TNF-α等炎性介質的表達，而后者表達水平改變可造成視網膜炎性損傷、促進新生血管生成和導致神經變性等[18-20]。②引起細胞凋亡，腫瘤學研究中發現，microRNA-873表達量改變可影響細胞增殖、凋亡進程。動物學實驗發現，microRNA-873表達量改變可參與NF-κB信號通路，后者p65亞基乙?；罂杉せ頜MP-9表達從而加快視網膜血管內皮細胞凋亡[21-23]。

4 結論

2型糖尿病視網膜病變患者血清中存在microRNA-873表達量改變，且與血清炎癥介質表達量改變和血管內皮功能改變密切相關，但是，關于microRNA-873的具體作用機制有待于進一步考證。