膠體層析法與酶聯免疫吸附試驗在HIV抗體檢測中的應用價值分析

葉曉芳，林小菊，黃 妹，李木珍

(廣東醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，廣東 湛江 524000)

獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immune deficiency syndrome，AIDS)簡稱艾滋病，作為一種傳染性疾病，由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所致，故對HIV抗體進行明確診斷有助于控制病毒傳播并指導臨床治療[1-2]。目前膠體層析法、酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)作為HIV抗體診斷中常用方法，以膠體層析法使用最為普遍，操作簡單迅速，但亦存在診斷特異度較低等弊端，易受人為及環(huán)境因素影響[3]。近年來ELISA多被用于HIV篩查中，價格低廉且診斷準確率較高[4]。鑒于此，本研究將分析膠體層析法與ELISA在HIV抗體檢測中的應用價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2017年9月至2019年8月我院治療的84例疑為HIV感染患者臨床資料，其中女性、男性分別為49例、35例；年齡32～59歲，平均年齡(45.86±5.17)歲；文化程度：小學及以下、初中、高中、大專及以上分別為16例、23例、25例、20例。

1.2 入選標準(1)納入標準：①臨床資料較為完善者；②均與HIV攜帶者有性接觸者，或性伴侶較多、吸毒者；③肝、腎功能良好者；④未合并免疫系統疾病者。(2)排除標準： ①存在肺結核等其他傳染性疾病者；②合并血液系統疾病者；③患有精神疾病者；④伴有惡性腫瘤疾病者。

1.3 方法入選者均接受膠體層析法、ELISA檢查，儀器為化學發(fā)光儀(KPS-KM型，北京科美東雅生物技術有限公司提供)、酶標儀(RT-2100C型，廈門市康鴻生物科技有限公司提供)、洗板機(RT-2600C型，深圳市雷杜電子有限公司提供)及配套微量加樣器。采集入選者空腹肘靜脈血6 mL，離心分離取上層清液，離心半徑3 cm，3000 r/min，離心5 min，通過基因重組HIV1+2抗原包被微孔板、辣根過氧化物酶標記重組HIV1+2抗原，ELISA初檢HIV抗體，北京萬泰生物藥業(yè)有限公司提供檢測試劑盒。膠體層析法測定HIV抗體，針對樣本中含有HIV1+2抗體時，抗體結合硒膠體-抗原，于患者窗口處被重組抗原、背固相包被合成肽捕捉固定，可見一條紅線形成，美國雅培公司提供檢測試劑盒，均連續(xù)測定7次。所有檢測結果由兩名或以上專業(yè)醫(yī)生雙盲進行評估，給出最終結果。

1.4 評價指標(1)計算膠體層析法、ELISA在HIV抗體低、高值質控血清中檢出率。(2)以蛋白印跡診斷結果作為金標準，計算膠體層析法、ELISA在HIV抗體診斷中的敏感度、特異度、準確率。(3)統計陽性樣本帶型分布情況。

1.5 統計學方法采用SPSS 20.0軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，采用卡方檢驗，計量資料以“均數±標準差”表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 膠體層析法、ELISA在HIV抗體低、高值質控血清中檢出率對比ELISA在HIV抗體低、高值質控血清中檢出率(100.00%)高于膠體層析法(57.14%)，差異有統計學意義(χ2=5.303，P=0.021)，見表1。

表1 膠體層析法、ELISA在HIV抗體低、高值質控血清中檢出率對比[n(%)]

2.2 膠體層析法、ELISA診斷HIV抗體結果以蛋白印跡診斷結果作為金標準，ELISA診斷HIV抗體敏感度、特異度、一致率(93.33%、98.15%、96.43%)高于膠體層析法(73.33%、85.19%、80.95%)，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2、表3。

表2 ELISA在HIV抗體中的診斷結果(n)

表3 膠體層析法在HIV抗體中的診斷結果(n)

2.3 陽性樣本帶型分布ELISA診斷HIV抗體陽性28例，其中條帶gP120、gP160出現最高，均為100.00%，P55出現率最低，僅為32.14%，見表4。

表4 陽性樣本帶型分布

3 討論

AIDS屬于免疫缺陷性疾病，具有潛伏期長、危害范圍廣、傳播速度快、死亡率高等特點[5]。HIV作為突變率較高的病毒，HIV感染后將攻擊患者機體內免疫系統，導致患者免疫功能障礙，出現多器官、多系統、多病原體復合感染及腫瘤[6]。近年來受到人口流動性增大及性開放等因素影響，臨床上AIDS患者占比逐漸增大，AIDS多以性接觸傳播為主，短時間內無典型癥狀，易被患者自身忽略，進而將通過其他途徑傳染，故有效篩查HIV抗體，有利于早期積極預防、控制AIDS[7]。

蛋白印跡法為HIV抗體診斷金標準，診斷準確率較高，但由于檢測試劑成本較高，無法用于大范圍HIV抗體篩查[8]。既往HIV抗體檢測方法以膠體層析法為主，具有所需設備少、檢查費用低廉及反應快速等優(yōu)點，但相關研究發(fā)現，膠體層析法診斷中敏感性較低，易導致誤診、漏診的發(fā)生，降低HIV抗體診斷準確率[9]。ELISA檢測HIV抗體時，可將HIV抗原包被于固相載體，并將酶標記HIV抗原及待檢樣品加入，以底物顯色，通過酶標儀測定結果，利用酶催化底物反應放大效果，促使抗原抗體反應靈敏性增強，進而提升HIV抗體檢出率。ELISA檢測中不受樣本中溶血及脂血等影響，穩(wěn)定性較高，通過酶標儀獲得數據，減輕對檢測結果的影響，保障檢測結果準確性[10]。本研究結果顯示，ELISA在HIV抗體低、高值質控血清中檢出率高于膠體層析法；經蛋白印跡診斷診斷HIV抗體陽性、陰性分別為30例、54例；以蛋白印跡診斷結果作為金標準，ELISA診斷HIV抗體敏感度、特異度、準確率高于膠體層析法，同時ELISA診斷HIV抗體陽性患者中出現率最高的為條帶gP120、gP160，由此可見，與膠體層析法相比，ELISA檢測HIV抗體敏感度、特異度、準確率較高，可作為HIV抗體篩查有效方法，且條帶gP120、gP160出現率最高，表明人群中HIV傳染性較強。經臨床實踐發(fā)現，ELISA檢測HIV抗體準確率相對較高，但受到檢測中耗時長、操作繁瑣及人為、環(huán)境及類風濕因子等因素干擾影響，檢查中仍存在一定假陽性、假陰性，需在ELISA檢測中選取靈敏度高、特異性好的試劑，加強室內質控，降低漏檢風險，提升HIV抗體檢出率。

綜上所述，ELISA在HIV抗體檢測中準確率較高，利于提升低、高值質控血清中檢出率，顯示陽性樣本帶型分布，可作為HIV抗體篩查準確方法。