檸檬提取物泡騰制劑的研究

王宏遠，劉 丹，王 強，范興君，王晶華，于鳳波,3

(1.牡丹江醫學院，黑龍江 牡丹江 157011；2.牡丹江醫學院附屬紅旗醫院，黑龍江 牡丹江 157011；3.廣東醫科大學附屬高州市人民醫院，廣東 高州 525200)

檸檬[Citrus limon(L.)Burm.f]屬蕓香科柑橘屬常綠小喬木，其果實提取物的藥理作用廣泛，有抗壞血病[1]、抗癌[2]、抗氧化[3]、抗高尿酸血癥[4]、降血脂[5]、殺蟲抑菌[6-7]等多種藥理活性。文獻報道[8-9]，檸檬提取物可以特異性作用于變形鏈球菌，影響變形鏈球菌的基因表達，同時也可以對其他致齲菌有著抑制作用，從而達到齲齒前期的防治功能。因此，可以設想，若將檸檬提取物用于漱口，則會對口腔內的致齲菌有明顯的抑制作用，從而有效地防治早期齲齒的發生[10]。基于以上想法，本文開發了一種檸檬提取物泡騰制劑用于齲齒的防治，通過泡騰制劑的泡騰作用可使檸檬提取物迅速溶解于水中用于漱口，從而達到抑制細菌增殖的作用。

1 材料與方法

1.1 材料無水檸檬酸(77-92-9，上海吉至生化科技有限公司)；乳糖(L1517，上海品成醫藥科技有限公司)；無水碳酸鈉(497-19-8，湖北信康醫藥化工有限公司)；碳酸氫鈉(144-55-8，豆城化學產品商貿(天津)有限公司)；酒石酸(526-83-0，湖北信康醫藥化工有限公司)；己二酸(124-04-9，佛山信航生物科技有限公司)；聚乙烯吡咯烷酮(9003-39-8，上海厚誠精細化工有限公司)；甜菊素(2I43L-CP，東京化成工業株式會社)；聚乙二醇6000(25322-68-3，湖北信康醫藥化工有限公司)；檸檬提取物(68648-39-5，湖北巨勝科技有限公司)；氯化鈉(7647-14-5，豆城化學產品商貿(天津)有限公司)。

片劑硬度儀(YD-20KZ，天大天發科技有限公司)；片劑脆碎度儀(CS-2，天津市國銘醫藥設備有限公司)；紫外可見分光光度計(17-1650-01-0372，北京普析通用儀器有限公司)；精密電子天平(T1000，常熟市雙杰測試儀器廠)；電熱真空干燥箱(ZK-82B，上海實驗儀器廠)；壓片機(GZPL-620，北京國藥龍立有限公司)。

1.2 檸檬提取物分析方法的確立

1.2.1 波長確定 精密稱取1 mg的檸檬提取物置于100 mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，在波長為200～800 nm之間進行掃描。

1.2.2 標準曲線的繪制 精密稱取500 mg的檸檬提取物于100 mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，震蕩靜置后備用。用100 mL容量瓶將檸檬提取物分別稀釋為濃度為1 μg/mL、3 μg/mL、5 μg/mL、7 μg/mL、9 μg/mL、11 μg/mL，分別測量吸光度A值，繪制標準曲線。

1.2.3 回收率測定 取處方量的輔料與80%、100%、120%的主藥混合放入100 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解稀釋定容，稀釋1000倍后測量其紫外吸光度值，計算回收率。

1.2.4 精密度試驗 配制相應溶液在1 d內和1周內分別測定5次，計算日內精密度和日間精密度。

1.2.5 穩定性試驗 將藥物溶液保存在密閉的容量瓶中，分別測定24 h與36 h樣品含量。

1.3 處方設計

1.3.1 單因素篩選 在查閱資料及單因素考察實驗結果基礎上，確定泡騰片的填充劑使用乳糖在片劑成型與口感等方面最佳。經過篩選，初步選擇出輔料種類有酸劑種類：檸檬酸、酒石酸、己二酸；潤濕劑種類：5% PVP水溶液、5% PVP乙醇溶液、80%乙醇，并在如下范圍內對酸堿比及泡騰劑含量進行篩選：泡騰劑含量(占片重百分比)：40%、45%、50%；泡騰劑酸堿比例：2∶3、2∶5、7∶10。

1.3.2 正交實驗設計 在單因素考察基礎上，以酸劑種類、泡騰劑含量、泡騰劑酸堿比與潤濕劑種類為因素，以發泡量、崩解時限、脆碎度為考察指標，設計L(34)正交實驗表，用于檸檬提取物的處方篩選。

經過初步篩選確定泡騰劑輔料如下，確定所用堿劑為碳酸氫鈉：碳酸鈉(9∶1)；填充劑：乳糖；潤滑劑：PEG6000：NaCl(2∶3)，適量的微分硅膠，占處方1%；矯味劑：甜菊糖(6 g)。總混400 g壓制成100片，每片的主藥含量0.5 g。并按照如下工藝流程制備泡騰片：(1)配置潤濕劑；(2)按處方稱取原輔料；(3)制粒：檸檬提取物泡騰片的制備采用酸堿分開制粒。取處方量1/2的主藥，處方量酸劑，與處方量1/2的乳糖混合研磨過60目篩，用潤濕劑制軟材。軟材要達到手握成團捏之即散。軟材過18目篩制粒，再過16目篩去細粉，放入烘干箱55 ℃烘干30 min左右至完全干燥。取1/2處方量主藥，1/2處方量乳糖，處方量的堿劑重復酸制粒步驟，得到堿制粒；(4)混總：得到的酸制粒與堿制粒1∶1混合，加入處方量的潤滑劑與處方量的矯味劑混合均勻；(5)壓片：將混總后的制粒放于壓片機壓片，控制片重4 g左右。

表1 因素水平

表2 正交表

1.3.3 處方確定 按照藥典標準[11]對正交實驗設計的9個處方的泡騰制劑的外觀與澄清度、片重差異、脆碎度、發泡量、崩解時限等進行檢測，確定最佳處方。

1.4 質量檢測按照正交實驗所確定檸檬提取物處方及制備工藝分別制備3批次檸檬提取物泡騰制劑，并對其片劑外觀與溶液澄清度、含量、片重差異、硬度、脆碎度、發泡量等質量進行檢測。

2 結果

2.1 分析方法的建立結果顯示，檸檬提取物在295.00 nm處有最大吸收波長。檸檬提取物在1～11 μg/mL內線性關系良好，標準曲線為A=0.056C-0.006，r2=0.999。

2.1.1 回收率測定 結果 結果顯示，RSD均小于2%，表明該方法準確性良好,見表3。

表3 回收率測定結果

2.1.2 精密度測定結果 結果顯示，實驗精密度較好，日內與日間RSD%均小于2%，見表4。

表4 精密度測定結果

2.1.3 穩定性測定結果 結果顯示，36 h內室溫放置溶液穩定，見表5。

表5 穩定性測定結果

2.2 處方篩選實驗結果

2.2.1 不同處方外觀與溶液澄清度測定結果 結果顯示，各處方片劑外觀完整光澤，色澤均勻，溶液中無明顯渾濁沉淀，見表6。

表6 不同處方外觀與溶液澄清度測定結果

2.2.2 不同處方片重差異測定結果 藥典規定平均片重0.3 g以上的片劑，各片重與平均片重相差不得超過±5%，結果顯示L4、L5、L6、L7組片重差異有大于5%，不合格，見表7。

表7 不同處方片重差異測定結果

2.2.3 不同處方脆碎度測定結果 結果顯示，各處方脆碎度均小于1%，滿足藥典規定，見表8。

表8 不同處方脆碎度測定結果

2.2.4 不同處方發泡量測定結果 結果顯示，除L4、L7外，各處方均有較好發泡量，見表9。

表9 不同處方發泡量測定結果(單位：mL)

表9續表

2.2.5 不同處方崩解時限測定結果 結果顯示，各處方都能在5 min內完全崩解，滿足藥典規定，見表10。

表10 不同處方崩解時限測定結果(單位：S)

2.2.6 處方及工藝確定 綜合上述質量檢測結果，以發泡量、崩解時限和脆碎度作為評價指標，對正交試驗設計處方進行評價。

表11 正交實驗結果

表12 主體間效應檢驗表格

根據正交實驗結果與主題效應檢驗表格進行比對，得到以下結果：發泡量的因素影響順序為B>A>D>C。崩解時限的因素影響順序為B>D>A>C。脆碎度的因素影響順序為D>A=B>C。

綜上，最終確定檸檬提取物泡騰制劑的處方及制備工藝為：酸劑：碳酸氫鈉，碳酸鈉(用量為7:10)100 g；堿劑為檸檬酸100 g；潤滑劑為PEG6000：NaCl(2∶3)4 g與適量微粉硅膠(約占1%)；潤濕劑為5% PVP乙醇溶液；填充劑為乳糖140 g；矯味劑為甜菊糖6 g。混總共400 g壓制100片。酸堿分開制粒，混總后直接壓片。

2.3 質量檢測結果

2.3.1 含量檢測結果 隨機選取三批次中的三個樣本經稀釋、定容后測紫外吸收，計算樣品含量，結果顯示，三批次產品含量均符合標準，見表13。

表13 含量檢測結果(n=3)

2.3.2 脆碎度 結果顯示，三批次產品脆碎度均符合標準，見表14。

表14 脆碎度檢測結果(n=20)

2.3.3 硬度 結果顯示，樣品的硬度在(55±5)N范圍內，見表15。

表15 硬度檢測結果(單位：N)

2.3.4 發泡量 結果顯示，三批次產品發泡量在(17±1)mL范圍內，見表16。

表16 發泡量檢測結果(單位：mL)

2.3.5 崩解時限 結果顯示，三批次產品崩解時限在85 S左右，均低于5 min，符合藥典規定，見表17。

表17 崩解時限檢測結果(單位：S)

2.3.6 片重差異 結果顯示，片重差異均低于5%，符合藥典規定，見表18。

表18 片重差異檢測結果(單位：g)

表18續表

3 討論

本文建立了檸檬提取物的分析方法用于其含量檢測，并最終確定了檸檬提取物泡騰劑處方為：酸劑：碳酸氫鈉，碳酸鈉(用量為7∶10)100 g；堿劑為檸檬酸100 g；潤滑劑為PEG6000：NaCl(2∶3)4 g與適量微粉硅膠(約占1%)；潤濕劑為5%PVP乙醇溶液；填充劑為乳糖140 g；矯味劑為甜菊糖6 g，混總壓制為100片，使檸檬提取物迅速溶解于水中用于漱口，用于齲齒的防治，同時通過泡騰制劑的泡騰作用可從而達到抑制細菌增殖的作用，此外，該溶液還可吞服，用于補充維生素。與市售漱口水相比，泡騰制劑具備如下優點：(1)固體片劑體型小，運輸成本底，攜帶方便；(2)食用安全，檸檬提取物為天然植物提取物，相對安全性較高；(3)可提高消費者接受程度，通過不同矯味劑的添加，可改善天然提取物味道苦澀的問題；而齲齒高發人群多為6～15歲的兒童[10]，制成不同口味的制劑，對于兒童有更高的順應性；(4)制作工藝簡單，成本低。但泡騰制劑存在著吸潮，粘沖等問題，吸潮問題可以使用內加法，用PEG6000在制粒時對酸堿進行包埋，可有效阻止吸潮的發生。在壓片時要控制溫度與濕度，溫度要控制在25 ℃以下，濕度在35%以下，可以有效地防止壓片粘沖，本次研究制片溫度為20 ℃，符合要求。氯化鈉是比較好的潤滑劑，并具備一定的矯味作用[11]。而選用泡騰劑是為了使藥物在規定時限內完全崩解完成，酸堿泡騰劑的含量一般要占片重的50%左右才能達到快速崩解，但泡騰劑過多會影響片劑的壓制與劑型外觀、口感，脆碎度低等多種問題，應針對具體情況進行篩選。總之本次研究獲得檸檬提取物泡騰劑配方及制備工藝符合藥典規定和相關標準，可用于臨床進一步觀察其預防齲齒的效果。