聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法、細菌培養(yǎng)法及革蘭氏染色法在陰道細菌檢驗中的應(yīng)用價值

楊 璐

（小金縣人民醫(yī)院檢驗科，四川 阿壩州 624200）

陰道炎是婦科疾病中常見的、多發(fā)的一種炎癥感染性疾病，由于發(fā)病時患者不加重視，進而導(dǎo)致陰道細菌的侵襲，引發(fā)盆腔感染、腹部感染，病情嚴(yán)重時會使其失去生育能力。加德納菌屬于革蘭氏陰性細小桿菌，有研究表明，對陰道炎患者白帶中的加德納菌進行檢測，可明確陰道炎病情與感染狀況，為患者臨床用藥提供一定依據(jù)[1]。細菌培養(yǎng)法對陰道細菌感染情況進行檢查，可直觀診斷陰道疾病，但檢驗時間較長，且檢出率較低。革蘭氏染色法操作程序較為簡單，但若染色過程中脫色過度，還會引起較大的誤差；聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法是一種新型檢測技術(shù)，不僅在脫氧核糖核酸雜交方面特異性高，而且還具有精準(zhǔn)度高、檢出率高及操作簡單等優(yōu)勢[2]。本研究旨在探討聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法、細菌培養(yǎng)法及革蘭氏染色在陰道細菌檢驗中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019年11月至2020年6月小金縣人民醫(yī)院收治的92例陰道炎患者的臨床資料，于無菌條件下取患者陰道后穹隆處陰道分泌物，分別行聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法、細菌培養(yǎng)檢驗法及革蘭氏染色法檢驗法。患者年齡25～52歲，平均（35.23±3.24）歲；病程0.4～2.0年，平均（1.22±0.11）年。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《臨床診療指南：婦產(chǎn)科學(xué)分冊》[3]中關(guān)于陰道炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)者；病歷資料完善者；陰道分泌物為灰白色，且具有魚腥味者；性交后陰道分泌物增多者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他嚴(yán)重軀體疾病者；合并嚴(yán)重血液性疾病者；合并嚴(yán)重傳染性疾病者；不滿足檢驗相關(guān)操作者等。本研究經(jīng)小金縣人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.2 方法 采用棉簽蘸取陰道后穹隆處少量陰道分泌物進行檢測。①細菌培養(yǎng)檢驗法：采用無菌接種環(huán)，將陰道分泌物樣本接種到陰道瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，并將其置放于二氧化碳培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2 d，溫度設(shè)定為35.5 ℃，選擇適宜菌落進行檢驗。培養(yǎng)基中形成的典型菌落是目的菌落即為陽性（1 200 r/min , 5 min）[4]。②聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法：取出分泌物后，對其進行離心處理（1 200 r/min , 5 min），取上清液，加組織裂解液，然后將其放入水浴鍋中（溫度60 ℃，時間15 min），再次對其進行離心處理，取其上清液，利用上清液制作脫氧核糖苷酸模板，之后將其放入聚合酶鏈反應(yīng)檢測儀中，設(shè)置循環(huán)參數(shù)如下：58 ℃下1 min， 72 ℃ 下 1 min， 94 ℃ 下 1 min， 95 ℃ 下 5 min，共32個循環(huán)，最后72 ℃下延伸5 min。其陽性標(biāo)準(zhǔn)為：條帶寬度邊緣整齊，且不超過1 cm，背景中未發(fā)現(xiàn)引物二聚體[5]。③革蘭氏染色法檢驗：將陰道分泌物標(biāo)本涂抹于載玻片上，要求涂抹以均勻為宜，涂抹步驟完成后，取蓋玻片加以固定，固定完成后對切片進行革蘭氏染色處理，借助醫(yī)用顯微鏡作進一步的觀察、分析工作。其陽性標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，紫色為革蘭氏陽性，紅色為革蘭氏陰性[6]。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法、細菌培養(yǎng)法及革蘭氏染色的陽性檢出率。②比較細菌培養(yǎng)法與革蘭氏染色法對加特納菌、棒狀桿菌、腸球菌的檢出情況。③比較聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法與革蘭氏染色法對加特納菌的檢出情況。④比較3種檢驗方法的檢驗時間與患者滿意度，記錄3種檢測方法的檢測時間，同時對患者開展問卷調(diào)查，分析患者對3種檢驗方法的滿意度，分值范圍0～100分，分數(shù)越高，表明患者滿意度越高。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 26.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料用(±s)表示，行t檢驗；計數(shù)資料用[ 例(%)]表示，兩組間比較行χ2檢驗，多組間行采用χ2趨勢檢驗。以P< 0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陽性檢出率 與細菌培養(yǎng)法比，革蘭氏染色法陽性檢出率降低，且低于聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P< 0.05）；而細菌培養(yǎng)法與聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05），見表1。

表1 3種檢驗方法陽性檢出率比較

2.2 革蘭氏染色法與細菌培養(yǎng)法檢出情況 與細菌培養(yǎng)法相比，革蘭氏染色法加特納菌、棒狀桿菌、腸球菌陽性檢出率均降低，且低于聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法，陰性檢出率升高，且高于聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；而細菌培養(yǎng)法與聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05），見表2。

表2 革蘭氏染色法與細菌培養(yǎng)法細菌檢出情況比較[ 例(%)]

2.3 聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法與革蘭氏染色法對加特納菌的檢出情況 聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法對加特納菌的陽性檢出率為42.39%（39/92），顯著高于革蘭氏染色法的28.26%（26/92），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法與革蘭氏染色法對加特納菌的檢測情況比較

2.4 檢驗時間與患者滿意度 聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法、細菌培養(yǎng)法檢驗時間顯著長于革蘭氏染色法；聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法檢驗時間顯著短于細菌培養(yǎng)法；患者對聚合酶鏈反應(yīng)法的滿意度評分顯著高于細菌培養(yǎng)法和革蘭氏染色法，且患者對細菌培養(yǎng)法的滿意度評分顯著高于革蘭氏染色法，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P< 0.05），見表4。

表4 3種檢驗方法檢驗時間與患者滿意度評分比較( ?±s)

表4 3種檢驗方法檢驗時間與患者滿意度評分比較( ?±s)

注：與細菌培養(yǎng)法比，*P < 0.05；與聚合酶鏈反應(yīng)法比， #P < 0.05。

檢驗方法 例數(shù) 檢驗時間(h) 滿意度評分(分)細菌培養(yǎng)法 92 4.58±0.94 83.57±2.49聚合酶鏈反應(yīng)法 92 1.64±0.31* 92.36±3.78*革蘭氏染色法 92 0.38±0.09*# 75.63±3.52*#F值 1297.910 587.892 P值 <0.05 <0.05

3 討論

目前，臨床主要采用抗菌藥物治療細菌性陰道炎，但是需要在確定用藥方案前對患者陰道炎類型進行明確，制定相應(yīng)的治療措施。既往臨床將細菌培養(yǎng)法作為陰道炎診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于此種檢驗方法操作流程繁瑣復(fù)雜，對檢驗實驗室內(nèi)部溫度條件和濕度條件的要求高，其檢驗成本也相對較高，在基層醫(yī)院很難進行推廣，且一旦出現(xiàn)偏差，會導(dǎo)致檢驗結(jié)果受到嚴(yán)重影響，造成檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性降低。

革蘭氏染色法雖然操作簡便，臨床應(yīng)用范圍也比較廣泛，但是檢驗過程中容易受到不良因素的影響，如染色時間、觀察誤導(dǎo)等，造成此種檢驗方法細菌陽性檢出率低下。聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法屬于新型細菌檢驗方法，其是一種在體外特異性擴增靶DNA序列的技術(shù)，通過DNA聚合酶引導(dǎo)下鏈延伸反應(yīng)、模板及引物DNA的模板雙聯(lián)DNA的變形三個環(huán)節(jié)循環(huán)。同時利用光譜技術(shù)和DNA雜交優(yōu)勢，有效提高細菌檢驗敏感性、準(zhǔn)確性及檢出率，且聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法操作簡單，檢測過程中等待時間較短，不易受到外界不良因素的影響，也不會輕易損害檢驗標(biāo)本中的原有菌群[7]。本研究結(jié)果顯示，與細菌培養(yǎng)法比，革蘭氏染色法陽性檢出率及加特納菌、棒狀桿菌、腸球菌陽性檢出率均顯著降低，且均顯著低于聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法陽性檢出率，而細菌培養(yǎng)法與聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法陽性檢出率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，提示聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法在陰道細菌檢驗中的陽性檢出率更高，檢驗結(jié)果更準(zhǔn)確，而3種檢測方法中革蘭氏染色法的檢測結(jié)果相對較差。

有文獻報道，細菌培養(yǎng)法陰道細菌檢出率與聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法無明顯差異，但是此種方法檢驗時間比較長，患者滿意度不高[8]；而聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法的操作步驟簡單，可快速得出結(jié)果，耗時較短，且檢出費用較低，患者接受度高，同時對醫(yī)護人員滿意度較高[9]。本研究結(jié)果顯示，革蘭氏染色法檢驗時間最短，但是患者滿意度最低，聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法檢驗時間顯著短于細菌培養(yǎng)法，患者對聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法的滿意度評分顯著高于細菌培養(yǎng)法和革蘭氏染色法，提示運用聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法于陰道細菌檢驗中，可縮短檢驗時間，且患者對該檢測方式的滿意度較高。而革蘭氏染色法雖然檢驗時間短，但是因其陽性檢出率比較低，影響到患者對其的滿意度。

綜上，聚合酶鏈反應(yīng)檢驗法在陰道細菌檢驗中的應(yīng)用，相比細菌培養(yǎng)法與革蘭氏染色法更能縮短檢驗時間，提高檢出率和患者滿意度。但是由于本研究納入病例數(shù)量有限，因此建議后期擴大樣本量進行深入研究。