臨床微生物實驗室B族鏈球菌檢測進展

滕潔麗

【摘要】傳統的GBS的檢測方法包括臨床樣本直接涂片染色鏡檢和細菌培養，一些新的檢測方法包括乳膠凝聚實驗、免疫層析法、基因組學法（熒光原位雜交法、斑點印跡法、實時熒光定量PCR法）、蛋白質組學法，這些檢測方法的使用顯著提高了疾病的早期診斷水平，但仍有必要進一步了解與總結。本文就GBS實驗檢測方法及進展進行綜述。

【關鍵詞】B族鏈球菌;細菌培養;PCR

B族鏈球菌（Streptococcus agalactiae，GBS）正常寄居在人的陰道與直腸，其感染對母嬰危害非常大，能誘發孕產婦絨毛膜膜炎、子宮內膜炎等，嚴重可致早產和死胎，因此早發現早預防十分必要。隨著臨床實驗室檢測技術的快速發展，為臨床早發現早預防提供便利。本文主要內容包括：GBS標本直接檢測法、細菌培養法及分子生物學檢測法。

1 標本直接染色鏡檢

GBS屬于兼性厭氧的β溶血性革蘭氏陽性鏈球菌，單個、成雙、鏈狀排列、長短不一，有經驗的檢驗人員可通過直接鏡檢可初步判斷。直接染色鏡檢操作簡便，結果直觀，比較快速，但總體敏感度從34%-100%不等，特異性普遍低為61%-72%，陽性預測值為13%-33%。在用涂片染色鏡檢法檢測GBS時，需要采用多次取材并做多張涂片，以提高檢測的陽性率。此法簡便適用于基層，可作為帶菌者的篩選方法。

2 細菌培養法

細菌培養法是GBS檢測的金標準。采樣一般為陰道拭子（采用無菌拭子，于陰道口約1/3處旋轉取樣，不需要使用陰道擴張器）和直腸拭子（在肛門口深2cm左右輕輕旋轉采樣）。

2.1普通培養法

將標本直接種在血平板上，接種后置于5% CO2、35℃孵育箱，孵育2d觀察菌落生長情況，如有菌落生長則作鑒定。提高檢測率可先將標本經肉湯培養基培養12小時后再轉血平板培養。

2.2液體顯色培養

將標本置于液體顯色培養基中，利用GBS具有產生橙色類蘿卜素天然色素的獨特性，使培養基顯色。特異性和敏感度較高，結果可以通過肉眼判讀。缺點：一些弱陽性結果會呈點狀散于培養基中或出現在沉淀物與上清液交界面，不可震蕩培養基。

2.3顯色平板培養

顯色平板培養是傳統培養法的改良，在平板上添加某類抑制劑和指示劑，使GBS菌落顯色為特定的顏色。如安圖的GBS顯色平板，GBS菌落為粉紅色，非目標菌多數為藍色或綠色，易于辨認。

細菌培養法優點可以做藥敏，缺點因其操作過程復雜、耗時長（需要24～48 h），并且由于陰道及肛門周圍雜菌較多，檢測結果會有一定的假陽性和假陰性，但準確性高。

3 ? CAMP試驗

CAMP試驗為觸酶陰性和協同溶血試驗，挑取可疑菌落進行CAMP實驗，在血瓊脂平板上用產生β-溶血素的金黃色葡萄球菌培養物劃一條直線，然后將鏈球菌培養物劃一條線，與金黃色葡萄球菌培養物的劃線相互垂直，二者相距3～5mm，各鏈球菌分離菌劃線間距10～20mm。置37℃溫箱內培養24h后觀察結果。在兩劃線交界處是否出現箭頭樣的溶血區，出現為陽性，反之陰性。這是一種特異性診斷試驗，但試驗時間長，操作步驟繁瑣，容易受到部分β-溶血鏈球菌（如假豕鏈球菌等）及血平板各批綿羊血不同的干擾，還有其他很多因素影響。

4 ? 聚合酶鏈反應

聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction， PCR）快速診斷GBS的原理是通過設計特異性引物和探針，對GBS中保守序列進行擴增，用熒光的強度檢測產物的數量。靶基因快速準確的擴增百萬倍，達到迅速、敏感檢測 GBS的目的。熒光定量PCR法是通過實時熒光PCR儀檢測熒光強度以判斷孕婦是否具有GBS感染，有快速、準確、敏感度高等特點，在臨床上更為實用，是目前臨床上應用較普遍的GBS檢測方式，已在許多醫院中投入使用，但是其儀器昂貴、技術要求較高的特點限制了該技術在基層醫院的廣泛應用。

5 ?結束語

GBS檢測方法很多，直接涂片染色操作簡便直觀實惠。培養法準確率高，還可以做藥敏，但耗時長。PCR簡單、快速具有高靈敏度和特異度，但對實驗室條件要求高。每個方法都有優缺點，我們可以根據自己的實際情況選擇合適的檢測方法。隨著科學的不斷進步，檢測技術的不斷發展未來有能通過先進技術解決現在方法的局限性。

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