長鏈非編碼RNA肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)水平與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤血管內(nèi)治療后復(fù)發(fā)的關(guān)系研究

王曉鋒，張立新，張曉樂

顱內(nèi)動(dòng)脈瘤嚴(yán)重威脅人們生命安全，血管內(nèi)栓塞治療已成為主要治療方式之一，但長期隨訪發(fā)現(xiàn)需再次治療患者數(shù)量居高不下［1-3］。有研究報(bào)道部分栓塞的動(dòng)脈瘤、大型或巨大型動(dòng)脈瘤患者在接受治療17個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)率高達(dá)30%［4］。探究預(yù)示復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物對于顱內(nèi)動(dòng)脈瘤篩查和治療均具有重要意義，但目前臨床缺乏有效的生物標(biāo)志物。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一種由200個(gè)及以上核苷酸組成的RNA，廣泛參與機(jī)體病理生理活動(dòng)［5］。目前有多種lncRNA被證實(shí)參與了顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)生發(fā)展過程，如lncRNA ENST00000607042、lncRNA TCONS_00000200和lncRNA肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（met ast asi s-associated lung adenocarcinoma transcript，MALAT）1等［6-8］。有研究顯示lncRNA MALAT1與微小RNA（miRNA）-143競爭性結(jié)合促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子表達(dá)，從而誘導(dǎo)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)生［8］。本研究探討lncRNA MALAT1表達(dá)與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤復(fù)發(fā)的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月至2018年9月在杭州市第九人民醫(yī)院就診的168例顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①DSA或CTA檢查診斷為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤；②動(dòng)脈瘤破裂或未破裂接受血管內(nèi)栓塞治療；③凝血功能正常；④簽署手術(shù)知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴煙霧病、夾層動(dòng)脈瘤等疾病；②既往有腦外傷、腦卒中史；③年齡＞70歲；④接受開顱夾閉術(shù)治療；⑤隨訪失聯(lián)。168例患者中男61例，女107例；年齡36～63（50.51±5.67）歲；有吸煙史33例，糖尿病史35例，高血壓史63例；動(dòng)脈瘤位于前交通動(dòng)脈56例，大腦中動(dòng)脈51例，后交通動(dòng)脈32例，后循環(huán)動(dòng)脈29例；小型動(dòng)脈瘤（瘤體長徑＜5 mm）45例，中型動(dòng)脈瘤（瘤體長徑5～10 mm）55例，大型動(dòng)脈瘤（瘤體長徑＞10 mm）68例；動(dòng)脈瘤寬頸（瘤體頸寬≥4 mm，或頸體比＞0.5）62例，窄頸（瘤體頸寬＜4 mm且頸體比≤0.5）106例；動(dòng)脈瘤破裂78例，未破裂90例；術(shù)后即刻DSA顯影的動(dòng)脈瘤栓塞程度（Raymond分級(jí)）Ⅰ級(jí)（完全栓塞）110例，Ⅱ級(jí)（瘤頸顯影）42例，Ⅲ級(jí)（瘤體顯影）16例。采用復(fù)診或電話方式隨訪，獲取血管內(nèi)栓塞治療2年內(nèi)復(fù)發(fā)情況。本研究將瘤體顯影較之前擴(kuò)大或術(shù)后再次出血定義為復(fù)發(fā)。根據(jù)血管內(nèi)栓塞治療2年內(nèi)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤是否復(fù)發(fā)，將患者分為復(fù)發(fā)組（n=31）和未復(fù)發(fā)組（n=137）。本研究已獲杭州市第九人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

1.2 lncRNA MALAT1表達(dá)水平檢測

采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法［9］檢測lncRNA MALAT1表達(dá)水平。抽取顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞術(shù)前和術(shù)后24 h內(nèi)空腹外周靜脈血10 mL，離心后取上清液，置于－80℃冰箱中保存，待驗(yàn)。TRIzol試劑（日本TaKaRa公司）提取血漿中總RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司）將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，PCR儀（山東博科科學(xué)儀器公司）擴(kuò)增cDNA，擴(kuò)增條件為93℃5 min，93℃15 s，62℃30 s，70℃30 s，35個(gè)循環(huán)。引物由上海吉瑪制藥技術(shù)公司設(shè)計(jì)，lncRNA MALAT1序列F：5′-GCAG GGAGAATTGCGTCATT-3′，R：5′-TTCTTCGCAG AATTGCGTCATT-3′；內(nèi)參3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）序列F：5′-TCCCATCACCATCTTCCA-3′，R：5′-CATCACGCCACAGTTTTCC-3′。選擇10例與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者年齡、性別匹配的健康體檢者血漿lncRNA MALAT1平均值作為校正對照。用2-△△Ct計(jì)算lncRNA MALAT1表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較用配對樣本t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以［M（QR）］表示，兩組間比較用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例（n）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)。受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）評(píng)價(jià)各指標(biāo)診斷效能，并計(jì)算最佳截?cái)帱c(diǎn)。logistic回歸分析顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素。限制性立方樣條擬合logistic回歸分析血管內(nèi)栓塞治療后lncRNA MALAT1表達(dá)水平與復(fù)發(fā)的劑量-效應(yīng)關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組年齡、性別、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、動(dòng)脈瘤位置和動(dòng)脈瘤大小差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），復(fù)發(fā)組動(dòng)脈瘤寬頸占比、動(dòng)脈瘤破裂占比、Raymond分級(jí)Ⅱ/Ⅲ級(jí)占比均高于未復(fù)發(fā)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對受試者進(jìn)行1∶1傾向性評(píng)分匹配（最鄰近原則）后，兩組年齡、性別、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、動(dòng)脈瘤位置、動(dòng)脈瘤大小、動(dòng)脈瘤頸、動(dòng)脈瘤破裂和Raymond分級(jí)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。復(fù)發(fā)組術(shù)前和術(shù)后lncRNA MALAT1表達(dá)水平均高于未復(fù)發(fā)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；1∶1傾向性評(píng)分匹配后，復(fù)發(fā)組術(shù)后lncRNA MALAT1表達(dá)水平高于未復(fù)發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。術(shù)前l(fā)ncRNA MALAT1評(píng)價(jià)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的ROC曲線下面積（AUC）、最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度、特異度分別為0.693（95%CI：0.607～0.780）、2.69、83.87%、59.12%，術(shù)后lncRNA MALAT1評(píng)價(jià)復(fù)發(fā)的AUC、最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度、特異度分別為0.898（95%CI：0.845～0.950）、2.06、74.19%、89.78%，▲lncRNA MALAT1評(píng)價(jià)復(fù)發(fā)的AUC、最佳截?cái)帱c(diǎn)、靈敏度、特異度分別為0.520（95%CI：0.418～0.622）、1.11、87.10%、28.47%，術(shù)后lncRNA MALAT1評(píng)價(jià)復(fù)發(fā)的AUC高于術(shù)前l(fā)ncRNA MALAT1和▲lncRNA MALAT1，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=3.973、7.854，P＜0.001），見圖1。

圖1 lncRNA MALAT1評(píng)價(jià)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤治療后復(fù)發(fā)的ROC曲線

表1 兩組患者臨床資料

表2 兩組患者lncRNA MALAT1表達(dá)水平比較

將顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后是否復(fù)發(fā)作為因變量，動(dòng)脈瘤大小、動(dòng)脈瘤頸、動(dòng)脈瘤破裂、Raymond分級(jí)和術(shù)后lncRNA MALAT1作為自變量，納入logistic回歸分析，結(jié)果顯示動(dòng)脈瘤頸、Raymond分級(jí)、術(shù)后lncRNA MALAT1均為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表3。限制性立方樣條擬合logistic回歸法分析顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后lncRNA MALAT1表達(dá)水平與其復(fù)發(fā)的劑量-效應(yīng)關(guān)系，節(jié)點(diǎn)個(gè)數(shù)為4時(shí)Akaike信息準(zhǔn)則（AIC）值是102.137（呈最小），分析結(jié)果顯示術(shù)后lncRNA MALAT1與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)有關(guān)（χ2=15.95，P=0.001），呈線性關(guān)系（非線性檢驗(yàn)χ2=1.54，P=0.463）；將術(shù)后lncRNA MALAT1評(píng)價(jià)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的最佳截?cái)帱c(diǎn)作為參考點(diǎn)，術(shù)后lncRNA MALAT1＜2.16時(shí)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)低，＞2.16時(shí)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高，見圖2。

圖2 術(shù)后lncRNA MALAT1與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的劑量-效應(yīng)關(guān)系圖

表3 顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者治療后復(fù)發(fā)logistic回歸分析

3 討論

目前l(fā)ncRNA MALAT1已被報(bào)道參與多種疾病如直腸癌［9］、下咽鱗狀細(xì)胞癌［10］、阿爾茨海默病［11］和顱內(nèi)動(dòng)脈瘤［8］等發(fā)生發(fā)展過程。Gao等［8］研究證實(shí)lncRNA MALAT1在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組織中高表達(dá)，且可通過競爭性結(jié)合miRNA-143上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子水平，從而誘導(dǎo)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)生。基于該研究，推測lncRNA MALAT1與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)有關(guān)，其表達(dá)水平或可預(yù)示顱內(nèi)動(dòng)脈瘤復(fù)發(fā)。本研究比較了復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組術(shù)前和術(shù)后lncRNA MALAT1表達(dá)水平，結(jié)果顯示復(fù)發(fā)組術(shù)前和術(shù)后lncRNA MALAT1表達(dá)水平均高于未復(fù)發(fā)組，1∶1傾向性評(píng)分匹配后復(fù)發(fā)組術(shù)后lncRNA MALAT1表達(dá)水平高于未復(fù)發(fā)組；結(jié)果提示lncRNA MALAT1與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)有關(guān)，或可成為預(yù)示顱內(nèi)動(dòng)脈瘤復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物。

Nakamura等［12］研究證實(shí)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤直徑＞10 mm是其復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。動(dòng)脈瘤瘤體大，難以實(shí)現(xiàn)致密栓塞，因此栓塞后復(fù)發(fā)率高。顱內(nèi)動(dòng)脈瘤頸寬＞4 mm常需要再次治療［13］。動(dòng)脈瘤寬頸所承受的血流沖擊力大，隨時(shí)間進(jìn)展可使瘤體內(nèi)彈簧圈被壓縮，致密栓塞率降低，最終導(dǎo)致復(fù)發(fā)。動(dòng)脈瘤完全栓塞患者復(fù)發(fā)率顯著低于次完全栓塞患者［14］。既往研究分析影響顱內(nèi)動(dòng)脈瘤血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的因素，多認(rèn)為與動(dòng)脈瘤頸、動(dòng)脈瘤大小和Raymond分級(jí)有關(guān)［15-17］。還有研究證實(shí)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤初始狀態(tài)與復(fù)發(fā)有關(guān)［18］，破裂動(dòng)脈瘤接受血管內(nèi)栓塞治療患者中首次栓塞后有高達(dá)17.4%需再次治療［19］。為避免環(huán)扎因素影響分析結(jié)果，本研究通過logistic回歸分析顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者栓塞治療后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素，結(jié)果顯示動(dòng)脈瘤頸、Raymond分級(jí)是栓塞治療后復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)因素，而動(dòng)脈瘤大小、動(dòng)脈瘤破裂均與復(fù)發(fā)無關(guān)，推測其原因與納入研究分析的樣本量小有關(guān)，后續(xù)還需開展多中心大樣本研究予以驗(yàn)證。

本研究中l(wèi)ogistic回歸分析結(jié)果還顯示，術(shù)后lncRNA MALAT1是顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者接受血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；限制性立方樣條擬合logistic回歸分析結(jié)果顯示，術(shù)后lncRNA MALAT1與栓塞治療后復(fù)發(fā)呈線性關(guān)系，隨其表達(dá)水平升高，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)亦隨之升高。推測導(dǎo)致上述結(jié)果的原因是lncRNA MALAT1表達(dá)水平升高，血管內(nèi)皮生長因子水平亦隨之升高，進(jìn)而誘發(fā)動(dòng)脈瘤體增大，瘤體內(nèi)彈簧圈不足以達(dá)到致密栓塞，致使動(dòng)脈瘤復(fù)發(fā)。

本研究尚存在一定不足，一是僅檢測術(shù)前和術(shù)后2個(gè)時(shí)點(diǎn)lncRNA MALAT1表達(dá)水平，尚不能確定術(shù)后lncRNA MALAT1是評(píng)價(jià)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)的最佳時(shí)點(diǎn)；二是納入研究分析的樣本量較小，使統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果與已報(bào)道文獻(xiàn)結(jié)果存在一定出入。后續(xù)將針對上述不足再次開展研究，以充實(shí)本研究結(jié)論。

綜上所述，顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后lncRNA MALAT1表達(dá)水平降低。術(shù)后低lncRNA MALAT1提示顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血管內(nèi)栓塞治療后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)低。