高效液相色譜法測定雷西納德原料藥的含量

蘇有為，王新妍，晏斐，朱海，黃艷*(海南醫學院藥學院，海南 海口 571199)

0 引言

雷西納德(Lesinurad)是首個上市的尿酸轉運蛋白1抑制劑，臨床上主要與黃嘌呤氧化酶抑制劑聯用，用于治療與痛風相關的高尿酸血癥[1]。雷西納德對輕、中度腎功能不全的痛風患者有效，具有較好的耐受性，能加速痛風患者尿酸的消除。將其與黃嘌呤氧化酶抑制劑聯用，可降低血漿中尿酸水平，且安全性較高[2]。目前，雷西納德在國內還未上市，開發的市場前景良好。為了保證雷西納德的質量，現對自制的雷西納德原料藥含量測定方法進行研究，使用了高效液相色譜法(HPLC)測定雷西納德的含量。方法簡便、快速，準確度、精密度良好，適用于雷西納德的含量測定。

1 儀器與試藥

賽默飛Ultimate3000高效液相色譜儀，甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為雙蒸水，雷西納德(自制，批號為20201001、20201002、20201003)，雷西納德對照品(自制，批號為D2020003，含量為99.5%)。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制及測定法

取雷西納德供試品、雷西納德對照品適量，精密稱定，分別加流動相超聲溶解并稀釋制成每1 mL約含雷西納德30 μg的溶液，濾過，取續濾液作為供試品溶液、對照品溶液。分別精密量取上述兩種溶液各10 μL進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗

色 譜 柱 為Luna C18(2)100 A(150×4.6 mm,5 um)；以 甲 醇-2% 冰醋酸溶液(60:40)為流動相；檢測波長為290 nm；流速1.0 mL·min-1。精密量取2.1項下供試品溶液、對照品溶液及空白溶劑各10 μL進樣，記錄色譜圖，結果如圖1所示。理論板數按雷西納德峰計算為7 458，雷西納德峰拖尾因子為0.99，與相鄰的峰分離度為3.32，空白溶劑不干擾雷西納德的含量測定，色譜條件可以滿足系統適用性試驗要求。

圖1 對照品與供試品色譜圖

2.3 進樣精密度

取2.1項下的對照品溶液10 μL進樣，連續測定6次，各色譜峰面積的RSD為1.03%。表明進樣精密度良好。

2.4 專屬性試驗

精密稱取雷西納德供試品約25 mg，置于50 mL量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL(共6分)，分別置于50 mL量瓶中，按以下條件試驗：一份加流動相稀釋至刻度，搖勻；一份加30%的過氧化氫溶液0.5 mL，搖勻，室溫下放置2 h，加流動相稀釋至刻度，搖勻；一份加1 mol/L鹽酸溶液2 mL，搖勻，室溫下放置2 h，用1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻；一份加1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，搖勻，室溫下放置2 h，用1 mol/L鹽酸溶液2 mL中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻；一份加溶劑適量，置沸水浴加熱1 h，取出，放冷至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻；一份于太陽光下照射2 h，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別取上述6種溶液濾過，取續濾各10 μL進樣，記錄色譜圖，結果如圖2所示，各條件下產生的降解產物，均能與主峰完全分離，能夠滿足本品的含量測定的要求。

圖2 專屬性試驗色譜圖

2.5 溶液穩定性試驗

取批號為20201001的供試品溶液，分別放置0、2、4、6、8 h后進樣測定，主峰峰面積的RSD為0.46%，結果表明供試品溶液8 h內穩定。

2.6 線性關系考察

取雷西納德對照品適量，精密稱定，置50 ml量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋制成每1 mL中約含雷西納德500 μg的對照品儲備液，分別精密量1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別量取續濾液10 μL進樣，記錄色譜圖，以濃度C(μg/mL)對峰面積A繪制標準曲線，回歸方程為A=0.238 6 C-0.047 6，r=0.999 8，雷西納德在濃度為10.19～50.94 μg/mL范圍內，線性關系良好。

2.7 回收率試驗

精密稱取雷西納德對照品約20 mg、25 mg、30 mg各3份，用流動相超聲溶解配制成約相當于供試液濃度的80%、100%、120%的溶液，分別進樣測定，計算回收率。回收率為99.07%～100.63%，平均回收率為99.68%，RSD為0.62%(n = 9)。結果表明方法準確度良好。

2.8 重復性試驗

取同一批號供試品6份及對照品適量，精密稱定，照2.1項下的方法制備溶液。分別取10 μL進樣測定，含量分別為99.56%、99.06%、100.45%、99.68%、99.42%、99.09%，RSD為0.52%。結果表明方法重復性良好。

2.9 耐用性試驗

分別調整流動相比例為甲醇-2%冰醋酸溶液(65:35)及(55:45)、流速0.8的情況下進行試驗，主峰的拖尾因子、主峰與雜質峰分離度均符合規定，能夠滿足本品的含量測定的要求，說明方法耐用性良好。

2.1 0 含量測定

取3批供試品及對照品適量，精密稱定，照2.1項下的方法制備溶液并進樣測定，以外標法按峰面積計算含量，3批供試品的含量分別為99.37%、99.51%、99.75%。

3 結語

3.1 測定波長的選擇

取濃度為30 μg/mL的雷西納德對照品溶液，照分光光度法[3]，于200～400 nm波長范圍內掃描，雷西納德在293.2 nm波長處有最大吸收，此處空白溶液無吸收，因此，結合參考文獻[4-5]，選擇測定波長為290 nm。

3.2 色譜條件選擇與優化

分別考察乙腈-水、甲醇-水與甲醇-冰醋酸溶液為流動相，結果顯示：以乙腈-水、甲醇-水為流動相時，色譜峰均有明顯的拖尾現象；以甲醇-2%冰醋酸溶液(60:40)為流動相時，主峰保留時間適中，拖尾因子與分離度均符合《中國藥典》的要求。

3.3 專屬性試驗

雷西納德在氧化、強堿及光照條件下雜質均無明顯變化，且未產生新的降解雜質；在高溫及強酸條件下，在相對保留時間1.36處未知雜質有所增加，其他雜質均無明顯變化，欲知此未知雜質是什么物質，還有待進一步研究。