布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

歐陽(yáng)志良，黃添祥，溫 蕾

（廣東省東莞市厚街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523960）

布魯氏菌病（以下簡(jiǎn)稱“布病”）是由布魯氏菌引起的一種人畜共患傳染，病原是革蘭氏陰性細(xì)胞內(nèi)寄生菌，可在巨噬細(xì)胞中增殖，從而引起宿主動(dòng)物慢性感染。布病可感染多種動(dòng)物和人，臨床上主要引起母畜流產(chǎn)、公畜睪丸炎，人感染主要表現(xiàn)為長(zhǎng)期反復(fù)的波狀熱、乏力、多汗、肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等。近幾年，隨著畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展壯大，我國(guó)布病在人間和畜間的流行傳播呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著人們健康和畜牧業(yè)發(fā)展。因此，研究和豐富布病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法、大力提升基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室布病診斷水平對(duì)該病的防控工作具有重要意義。本文除基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)布病的各類檢測(cè)方法進(jìn)行如下概述。

1 病原學(xué)檢測(cè)

1.1 布魯氏菌的分離培養(yǎng)

主要是從感染個(gè)體的血液、乳汁或組織中通過特定培養(yǎng)基分離布魯氏菌，結(jié)合其它試驗(yàn)方法對(duì)培養(yǎng)出菌體進(jìn)行鑒別。這是布病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是分離效率低、容易污染、操作難、從業(yè)人員感染風(fēng)險(xiǎn)大，不適于普遍推廣。

1.2 分子生物學(xué)診斷技術(shù)

主要包括PCR技術(shù)、核酸探針技術(shù)和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP技術(shù)）。此類技術(shù)是根據(jù)布魯氏菌基因研究深入而發(fā)展起來的分子生物學(xué)診斷技術(shù)。

1.2.1 PCR技術(shù) 布魯氏菌基因的特異保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)病料提取物DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過擴(kuò)增產(chǎn)物的大小診斷分析。此技術(shù)靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、效率高，準(zhǔn)確度也高。但是單一的引物無法判斷布魯氏菌的生物型，因此根據(jù)布魯氏菌基因組高度保守序列和有拷貝數(shù)差異的保守序列設(shè)計(jì)引物建立多重PCR應(yīng)運(yùn)而生。……