廣州市環境禽流感病毒污染與職業暴露人群感染情況分析

陳昌明 陸劍云 劉艷慧 馬鈺 李魁彪

【摘要】目的：分析廣州市環境禽流感病毒污染與職業暴露人員感染情況。方法：于2019年3月-2020年12月，將廣州市內中心城區、城鄉城區作為本次研究社區，并選擇經常前往肉菜市場、幾乎不去肉菜市場的人群作為納入人群，以熒光定量RT-PCR檢測800份外環境標本的A型流感病毒核酸，并進行H5、H7、H9亞型的檢測;以血凝抑制試驗法，對其120名暴露人群血清中的H5N6、H7N9、H9N2血凝素抗體進行檢測。結果：800份標本中，A型陽性共68份，占比8.50%，H5陽性檢出率為0.50%、H7陽性檢出率為1.50%、H9陽性檢出率為4.38%、H5/H7陽性檢出率為0.13%、H9/H7陽性檢出率為0.38%。120名職業暴露人員中，未檢出H5N6、H7N9抗體陽性，共檢出H9N2抗體陽性標本4分，陽性率為3.33%;共33份被檢出抗體，但不足以將其判定為陽性。結論：廣州市環境中具有H5、H7、H9亞型病毒污染情況，并且有部分職業暴露人員也具有感染病毒的風險，應加強預防與禽流感病毒監測工作，避免疫情的發生。

【關鍵詞】禽流感病毒;職業暴露人群;血清

【中圖分類號】R511.7 【文獻標識碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.13.220

禽流感主要是由A型流感病毒所引起的一種禽類傳染病，若出現高致病性的禽流感，則會導致大量禽類死亡，對養禽業帶來極大的危害[1-2]。此外，相關研究發現，若病毒在野生鳥類、野生鳥類與家禽間進行傳播期間，極易導致出現病毒基因重組的情況，從而獲得感染人體的能力，出現人感染禽流感疾病的現象，對相關職業暴露人群的身體健康與生命安全造成極大威脅[3-4]。因此，及時對此種環境相關問題進行分析，以掌握禽流感污染情況、職業暴露人員的感染情況，為下一步制定防范及相關處理措施提供依據，具有顯著的研究意義?；诖耍疚淖髡哂趶V州市中心城區、城鄉城區相關人群中，隨機抽取800份樣本及120名職業暴露人員，展開以下分析。

1 材料與方法

1.1樣本采集

（1）于2019年3月-2020年12月，將廣州市內中心城區、城鄉城區的各2個社區作為本次研究社區，并選擇經常前往肉菜市場（暴露組）、幾乎不去肉菜市場的人群（非暴露組）作為納入人群。由本院開展流調并采集其咽拭子標本、血清標本。所選擇的納入人群需每半年、進行一次血清標本的采集。咽拭子標本共800份;職業暴露人群共120名，其中男性75名、女性45名，年齡40-56歲，平均（48.00±2.12）歲。

社區納入標準：人口相對比較穩定、流動人口比例比較低;社區內只有一個肉菜市場、且市場內有活禽交易;社區內醫療機構具有完善的診療體系，可進行相關咽拭子、血清標本的采集;社區內可招募滿足研究設計的人群隊列;所納入人群均知情此研究且簽署同意書。

（2）標本采樣方法：采樣點距離地面1.5m，于每個采樣點，采樣虛擬濃縮器、Biosampler液體沖擊式采樣器聯合的方式，對流感病毒氣溶膠樣品進行采集，虛擬濃縮器主流量保持在每小時8升，將虛擬濃縮器與Biosampler采樣器進行連接，持續采樣45分鐘，于Biosampler采樣瓶內，放置20ml的采樣吸收液，采樣后將其放置于4℃的環境中進行保存，采樣結束后，保證4小時之內送至實驗室，行離心濃縮富集至1ml，以待檢測。

（3）外環境檢測：若同一種類貨源相同的禽類選擇3只。環境中涂抹拭主要按照籠具、飲水槽、飼料槽、糞便、地面、污水、宰殺工具、脫毛機、污物桶等部位進行采集;標本采集后進行流感A型通用引物核酸檢測，并進行H5、H7、H9的分型。標本收集時，應同時記錄活禽市場、檔口的基本情況、消殺記錄、進發貨記錄、每天氣溫、氣壓、濕度等情況。將所采集的咽拭子、環境涂抹拭子等，應用病毒保存液進行保存，放置于溫度為0-4℃的環境下，送檢。采集的人群血清標本進行離心處理，選取血清保存，以待檢測。

1.2血凝抑制試驗

采集血液樣本，以10000r/min、8cm的離心半徑進行離心處理，持續2分鐘，選擇上層血清，進行血凝抑制試驗（HI）。對于A型禽流感病毒陽性標本，再進行H5、H7、H9亞型分析。

結果判定：人血清對H5N6抗原、H7N9抗原、H9N2抗原的抑制效價≥1：80，為陽性;介于20-80之間不足以診斷為陽性[5-6]。

1.3熒光定量PT-PCR檢測

將所采集的外環境標本凍融后，放置于振蕩器進行充分震蕩，按照說明書操作步驟，對其進行核酸RNA的提取，應用熒光定量RT-PCR方法，進行病毒的核酸檢測。

1.4數據統計

采用統計學軟件SPSS22.0分析數據，以[n（%）]表示定性資料，以（平均數±標準差）表示定量資料，P<0.05表示數據差異顯著。

2 結果

2.1血清學監測結果

800份標本中，A型陽性共68份，占比8.50%，H5陽性檢出率為0.50%、H7陽性檢出率為1.50%、H9陽性檢出率為4.38%、H5/H7陽性檢出率為0.13%、H9/H7陽性檢出率為0.38%。詳見表1：

2.2禽流感病毒核酸檢測結果

120名職業暴露人員中，未檢出H5N6、H7N9抗體陽性，共檢出H9N2抗體陽性標本4分，陽性率為3.33%;共33份被檢出抗體，但不足以將其判定為陽性。詳見表2：

3 討論

種屬屏障的存在，禽流感多不會出現感染人的情況，但并不完全排除人感染禽流感，目前，臨床上已發現有人類感染H5N1、H7N7、H9N2等多個亞型禽流感病毒，引起了廣泛的關注[7-8]。相關報道提出，H7N9為一種新型的禽流感，其病毒基因主要來自于野鳥、雞群的基因重配，針對此種情況，及時對其禽流感病毒外環境進行監測具有必要性，可了解相應環境中病毒分布情況，并有效的掌握病毒來源、病毒傳播途徑等，從而可采取有效措施防控禽流感疫情[9-10]。市場外環境監測是一項重要的評估手段，可有效降低人感染禽流感的風險，此系統主要覆蓋農業系統、林業系統、衛生系統等，其實施的具體內容則主要包括設計、采樣、監測、數據分析等較多個環節，對于評估禽流感病毒污染情況具有顯著價值[11-12]。本文研究發現，800份標本中，A型陽性共68份，占比8.50%，H5陽性檢出率為0.50%、H7陽性檢出率為1.50%、H9陽性檢出率為4.38%、H5/H7陽性檢出率為0.13%、H9/H7陽性檢出率為0.38%。數據可表明城鄉社區活禽市場A型的流感病毒中，以H7、H9最為常見，較其他類型場所明顯較高;這可能是由于城鄉活禽市場中，具有較為特殊的環境，對其進行監測過程中，市場環境中存在來源不同的活禽混合存放、對于活禽交易區的環境清洗、消毒不徹底、活禽存籠發生過夜等情況，此類情況極易導致出現禽流感病毒污染的情況[13-14]。此外，多項研究表明，活禽市場的暴露極易導致人感染H7N9禽流感[15]。本文研究數據顯示，120名職業暴露人員中，未檢出H5N6、H7N9抗體陽性，共檢出H9N2抗體陽性標本4分，陽性率為3.33%;共33份被檢出抗體，但不足以將其判定為陽性。數據可進一步證實，職業暴露人群感染H7N9禽流感的風險較高，根據此結果可見，應加強城鄉社區活禽市場的相關管理工作，并提供職業暴露人群的個人防護意識，增強健康意識，以預防出現感染禽流感病毒的情況。

綜上所述，廣州市環境中具有H5、H7、H9亞型病毒污染情況，并且有部分職業暴露人員也具有感染病毒的風險，其中感染H7N9的風險最大，應加強預防與禽流感病毒監測工作，提升職業暴露人群的防護意識，避免疫情的發生。

參考文獻：

[1]Samira Yousefi Naghani，Rozita Dara，Zvonimir Poljak，etal.A review of knowledge discovery process in control and mitigation of avian influenza[J].Anim Health Res Rev，2019，20（1）：61-71.

[2]周敏，張潔，鄧思夢，等.2015-2017年自貢市環境和職業人群禽流感監測分析[J].預防醫學情報雜志，2018，34（9）：1232-1235.

[3]亓云鵬，顧偉玲，富小飛，等.嘉興市外環境禽流感病毒污染狀況及職業暴露人群H5N6、H7N9和H9N2抗體水平調查[J].實用預防醫學，2018，25（4）：417-420.

[4]周霞，吳萬里，胡瀾懷，等.2015―2017年攀枝花市環境和職業暴露人群禽流感檢測結果[J].職業與健康，2018，34（3）：391-394.

[5]曹藍，劉艷慧，李魁彪，等.廣州市2014-2019年H5亞型禽流感病毒流行與基因遺傳特征分析[J].中華流行病學雜志，2020，41（7）：1115-1120.

[6]賈永朝，羅興，徐霞，等.2008-2017年廣元市家禽職業暴露人群和外環境禽流感病毒監測分析[J].預防醫學情報雜志，2018，34（6）：780-786.

[7]曹藍，魯恩潔，劉艷慧，等.2017年廣州市禽類市場休市期間外環境H5N6禽流感病毒流行特點分析[J].現代預防醫學，2018，45（3）：532-535.

[8]范蘇云，石向輝，周潔，等.2014-2016年深圳市福田區外環境H7N9禽流感病毒及職業人群監測[J].熱帶醫學雜志，2018，18（1）：82-85.

[9]Rokshana Parvin，Mohammed Nooruzzaman，Congriev Kumar Kabiraj，etal.Controlling Avian Influenza Virus in Bangladesh： Challenges and Recommendations[J].Viruses，2020，12（7）：751-751.

[10]陳臘梅，呂君，唐勇軍.活禽市場環境H9N2亞型禽流感病毒分子生物學研究[J].中國預防醫學雜志，2018，19（6）：426-431.

[11]亓云鵬，顧偉玲，富小飛，等.嘉興市外環境禽流感病毒污染狀況及職業暴露人群H5N6、H7N9和H9N2抗體水平調查[J].實用預防醫學，2018，25（4）：417-420.

[12]劉艷慧，李魁彪，李鐵鋼，等.2018年廣州市禽類市場全社區禽流感病毒監測分析[J].國際病毒學雜志，2019，26（3）：149-152.

[13]Mei Li，Xin Yin，Lizheng Guan，etal.Insights from avian influenza surveillance of chickens and ducks before and after exposure to live poultry markets[J].Sci China Life Sci，2019，62（6）：854-857.

[14]王昕，房師松，劉慧，等.深圳市禽職業暴露人群感染H7N9禽流感病毒血清學調查[J].職業與健康，2018，34（3）：313-316.

[15]Kaitlyn M St Charles，Amos Ssematimba，Sasidhar Malladi，etal.Avian Influenza in the U.S. Commercial Upland Game Bird Industry： An Analysis of Selected Practices as Potential Exposure Pathways and Surveillance System Data Reporting[J].Avian Dis，2018，62（3）：307-315.

基金項目：廣州市科技計劃項目——基于空氣中禽流感病毒載量動力學監測的社區人群感染隊列研究（編號：201707010451）

*通訊作者：劉艷慧，廣州市白云區疾病預防控制中心。