酒石酸泰萬菌素成品穩(wěn)定性研究

于榮 王少云 白海龍 郭濤

摘要：對(duì)酒石酸泰萬菌素的熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性、光穩(wěn)定性和紫外穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，酒石酸泰萬菌素在高溫和紫外光照條件下易發(fā)生降解，對(duì)光照穩(wěn)定性好，在酸性條件下易降解成其他形式，堿性條件對(duì)其成品無影響，因此酒石酸泰萬菌素成品應(yīng)當(dāng)在常溫或低溫條件下儲(chǔ)存較好。

關(guān)鍵詞：酒石酸泰萬菌素;穩(wěn)定性;生物效價(jià)

酒石酸泰萬菌素是最新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[1]，其主要成分是酒石酸乙酰異戊酰泰樂菌素，它可以直接殺死支原體，其生物功效是泰樂菌素的7～10倍，泰萬菌素最早由英國(guó)伊科公司開發(fā)，常使用其酒石酸鹽。泰萬菌素對(duì)多種革蘭氏陽性菌有抗菌活性，如葡萄球菌、微球菌、微桿菌、芽孢桿菌、棒狀桿菌、氣球菌屬、彎曲桿菌、腸球菌、鏈球菌、節(jié)桿菌等[1，2];對(duì)支原體也有很好的抗菌活性，并且在高濃度時(shí)作用更好;但對(duì)多數(shù)革蘭氏陰性菌無作用。泰萬菌素的作用機(jī)制同其他大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。它能與敏感菌的核蛋白體50S亞基結(jié)合，通過對(duì)轉(zhuǎn)肽作用和/或mRNA位移的阻斷，從而抑制肽鏈的合成和延長(zhǎng)，影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成[3]。

2004年經(jīng)歐盟批準(zhǔn)用于預(yù)防和治療由豬肺炎支原體引起的豬氣喘病、由豬痢疾短螺旋體引起的豬痢疾、由胞內(nèi)勞森氏菌引起的豬增生性腸炎和由雞毒支原體引起的雞支氣管感染[4]。目前國(guó)內(nèi)已批準(zhǔn)酒石酸泰萬菌素預(yù)混劑和可溶性粉，用于治療豬、雞支原體感染和豬血痢短螺旋體以及其他敏感細(xì)菌的感染[5，6]。筆者對(duì)泰萬菌素可溶性粉的穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，為其更好的生產(chǎn)存放提供重要依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料：

酒石酸泰萬菌素可溶性粉，寧夏泰益欣生物科技有限公司生產(chǎn)提供;指示菌培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基購(gòu)自北京緣生化科技有限公司

1.2方法

1.2.1酒石酸泰萬菌素成品制備。

泰萬菌素發(fā)酵液經(jīng)預(yù)處理，板框過濾，濾液一次沉淀，二次沉淀，酒石酸溶解制備成精制液，在經(jīng)過噴粉等步驟，得到抗生素酒石酸泰萬菌素的成品。

1.2.2酒石酸泰萬菌素成品熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。

取5份酒石酸泰萬菌素成品各50g，裝入小自封袋中，放置在25℃、30℃、40℃、50℃的培養(yǎng)箱中，相對(duì)濕度設(shè)置為30%±1和40%±1，放置1月、3月、6月后檢測(cè)其生物效價(jià)和主成分的變化。生物效價(jià)檢測(cè)使用管碟法[7]，操作如下：取滅過菌的平皿，在皿底作好標(biāo)記;將營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基加熱融化后，冷卻至50℃左右，加入10ml葡萄球菌菌懸，搖勻后，用另一大口移液管取5 m1加入到平皿中已凝固的培養(yǎng)基上，使其攤布均勻。待其凝固后，用鑷子夾取無菌牛津杯，按預(yù)先標(biāo)記的位置放于上層培養(yǎng)基上。吸取樣品200 ul，加入相應(yīng)牛津杯中，滴加完畢，蓋上平皿，28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)30～36 h，量取抑菌圈直徑并記錄。

1.2.3酒石酸泰萬菌素成品酸堿穩(wěn)定性試驗(yàn)。

取酒石酸泰萬菌素成品50g至溶解制備成精制液，將精制液分別用1.0mol/L的鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至2.0、3.0和5.0、6.0，然后放置24h，以為調(diào)pH的精制液為對(duì)照，用管碟法測(cè)其生物活性并計(jì)算其生物效價(jià)。

1.2.4酒石酸泰萬菌素成品光穩(wěn)定性試驗(yàn)。

酒石酸泰萬菌素成品在40W的日光燈下照射6h、12h、24h，及自然光下照射6h、12h、24h后，用管碟法測(cè)樣品生物活性和組成分含量變化，以原始未處理為對(duì)照，觀察抑菌活性變化并計(jì)算其生物效價(jià)。

1.2.5酒石酸泰萬菌素成品紫外穩(wěn)定性試驗(yàn)。

酒石酸泰萬菌素成品在40W、3 650A波長(zhǎng)的紫外線下照射5、10、15、20 h后，用管碟法測(cè)樣品生物活性，觀察抑菌活性變化并計(jì)算其生物效價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1酒石酸泰萬菌素成品熱穩(wěn)定性

圖1表明，成品在放置過程中，其生物效價(jià)隨放置時(shí)間降低，并且溫度越高降低趨勢(shì)越明顯，酒石酸泰萬菌素成品在25℃下活性比較穩(wěn)定，在25℃條件下生物效價(jià)最大，隨著放置時(shí)間增長(zhǎng)，生物效價(jià)呈明顯的下降趨勢(shì)。由此可以說明，該事宜放置在常溫條件下保存。

2.2酒石酸泰萬菌素成品酸堿穩(wěn)定性

圖2和圖3表明，酒石酸泰萬菌素成品在用鹽酸調(diào)節(jié)pH后其生物效價(jià)都明顯升高，pH值2.0時(shí)其生物效價(jià)最高，可到到1279u/mg，氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH5.0和pH6.0對(duì)泰萬菌素成品的生物效價(jià)無顯著影響，未調(diào)pH的泰萬菌素成品生物效價(jià)為正常的843u/mg。進(jìn)一步的檢測(cè)不同pH的泰萬菌素成品的主要組分泰萬菌素的含量，發(fā)現(xiàn)生物效價(jià)越高，其主成分泰萬菌素的含量越低，pH2.0的泰萬菌素成品中泰萬菌素的含量?jī)H僅占有29.4%，而pH5.0的泰萬菌素成品中泰萬菌素的含量無明顯變化，根據(jù)其圖譜分析發(fā)現(xiàn)大部分的酒石酸泰萬菌素轉(zhuǎn)化為鹽酸泰萬菌素，因鹽酸泰萬菌素的分子量相對(duì)較小，所以其生物效價(jià)明顯升高，而放置時(shí)間對(duì)泰萬菌素成品無明顯影響。

2.3酒石酸泰萬菌素成品光穩(wěn)定性

圖4表明，酒石酸泰萬菌素在40W日光燈下照射6h、12h、24h，及自然光下照射6h、12h、24h后，其生物效價(jià)無明顯變化，在自然光持續(xù)照射24h后，其生物效價(jià)僅僅降低了0.91%，說明該抗生素在日光燈和自然光照射一定時(shí)間內(nèi)未定，不發(fā)生分解或結(jié)構(gòu)上的變化。

2.4酒石酸泰萬菌素成品紫外穩(wěn)定性

酒石酸泰萬菌素成品在40W、3650A波長(zhǎng)的紫外線下照射5至10h其生物效價(jià)無明顯變化，但是在照射15到20 h后其生物效價(jià)明顯降低，在紫外光連續(xù)照射20h時(shí)其生物效價(jià)降低了1.92%。

3結(jié)論與討論

酒石酸泰萬菌素?zé)岱€(wěn)定性不好，高溫條件下容易降解，在常溫25℃下保存時(shí)間較長(zhǎng)，并且其生物效價(jià)降低速度較慢;酸性條件容易使泰萬菌素成品發(fā)生降解，pH值2.0時(shí)其生物效價(jià)最高，可達(dá)到1279u/mg，氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH5.0和pH6.0對(duì)泰萬菌素成品的生物效價(jià)無顯著影響，未調(diào)pH的泰萬菌素成品生物效價(jià)為正常的843u/mg。檢測(cè)不同pH下主要組分泰萬菌素的含量，發(fā)現(xiàn)pH2.0的泰萬菌素成品中泰萬菌素的含量?jī)H僅占有29.4%，而pH5.0的泰萬菌素成品中主組分的含量無明顯變化;40W日光燈和自然光對(duì)泰萬菌素成品均無明顯的影響，其生物效價(jià)隨照射時(shí)間變化很小，照射24h后生物效價(jià)僅僅降低0.91%;紫外光對(duì)泰萬菌素成品的影響較大，持續(xù)照射20h后，其生物效價(jià)降低了1.92%。綜合以上所述，酒石酸泰萬菌素對(duì)高溫、酸性條件和紫外光照較敏感，成品存放過程中應(yīng)盡量避開此類不利因素，以延長(zhǎng)其儲(chǔ)存時(shí)間。

參考文獻(xiàn)

[1]馮言言，田偉. 大環(huán)內(nèi)酯類藥物泰萬菌素的研究進(jìn)展[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2015，40（06）：5-6+12.

[2]彭瑋，張秀英，李睿.酒石酸泰樂菌素微球的制備及其穩(wěn)定性的初步考察[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008（05）：94-97.

[3]姬竹玲.泰萬菌素顆粒劑的研制及其在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[D].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[4]韓冰，張榮飛，晨光，田啟宇，熊劍勝，吳強(qiáng)三，梁景樂，張剛，樸香淑.泰萬菌素對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)：下半月，2017（9）：197-198.

[5]文麗，李仕超.泰萬菌素的抗炎效果分析[J].豬業(yè)科學(xué)，2018：26-30.

[6]王曉林.泰萬菌素及其在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].中國(guó)豬業(yè)，2018

[7]李凡，朱志華，姜鳳麗，宋麗華，代曉靜.管碟法測(cè)定生物效價(jià)影響因素的探討及改進(jìn)[J].中國(guó)獸藥雜志，2008：49-52.