犬貓膿皮病調查及毛太好抗細菌香波的體內外效果評價

柳項，雷鎰妃，肖雅夫，胡長敏

（1.肽澤（武漢）生物科技有限公司，武漢 430075；2.華中農業大學，武漢 430070）

膿皮病又稱細菌性毛囊炎，由化膿性細菌感染犬貓皮膚后引發，是犬貓常見皮膚病之一［1，2］。據調查顯示，貓皮膚病占貓類疾病的10.1%，其中細菌性皮膚病占2.72%［3］；犬皮膚病占犬類疾病的29.26%，其中膿皮病占到了28.33%［4］。研究表明，偽中間型葡萄球菌是犬膿皮病的主要致病菌［5］，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌等也可造成犬膿皮病的發生，且單一菌種感染較少見，混合性感染多見［6］。貓膿皮病多繼發于真菌性感染引起的皮膚病，膿皮病致病菌多為芽孢桿菌。偽中間型葡萄球菌（Staphylococcus pseudintermedius）是一種革蘭氏陽性菌，具有兼性厭氧、凝固酶陽性、β溶血等特征［7］。當動物免疫力低下，或因溫度、濕度、pH、機械損傷等因素打破表皮常在菌群平衡后，皮膚受損導致表皮結構改變，黏膜處的偽中間型葡萄球菌就會通過犬舔舐轉移到患處，滲出的血清及表皮脫落物成了這些細菌良好的培養基，細菌即在患處大量繁殖，常引起膿皮病、傷口感染等。

毛太好抗細菌香波是一款專為膿皮病動物研發的產品，有效成分主要有兩種：首先是細胞穿膜肽（Cell penetrating peptides，CPPs），其最早于人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）中的反式轉錄激活子（Transactivator，TAT）中發現，這段小分子短肽可以被周圍細胞所吸收，跨膜進入細胞內，因而被稱為細胞穿膜肽［8］。其在進入細胞后能夠被正常分解，有較好組織相容性，且細胞毒性小，已成為藥物靶向治療的理想載體。其次是粉防己，它是一種常用的傳統中草藥，主要有效成分是來自干燥根的粉防已堿（Tetrandrine，TET）、防己諾林堿等，二者均屬于雙芐基異喹啉類生物堿，其中TET活性最強，具有抗病原微生物、抗腫瘤、抗炎等作用。有研究結果表明粉防己提取物可通過影響acrR和maeR基因突變來逆轉大腸桿菌AcrAB-TolC外排泵的多重耐藥性［9］。

膿皮病是犬、貓的重要疾病，患病動物皮損狀態下的清潔需求難以得到保障，而治療膿皮病導致的抗生素濫用則可能導致超級耐藥菌存在，對動物和人類的生命健康造成威脅。本研究對武漢地區犬膿皮病發病情況進行了調查，并對毛太好抗細菌香波進行了體內外效果評價，以期為推動寵物功能性洗護產品的推廣與應用及高效防控犬貓膿皮病奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗病例來源于武漢地區10家采樣點。10家店中包括寵物店5家，貓舍4家，貓咖1家，共15個病例。15個病例中犬貓比2∶13，犬中比熊犬1例，古典牧羊犬1例；貓中英國短毛貓6例，布偶貓5例、俄羅斯藍貓1例，曼基康貓1例。選用毛太好抗細菌香波原液、市場同類型香波2種（樣品1、樣品2）進行藥敏試驗，以生理鹽水（與無菌水進行1∶10稀釋）作對照。

1.2 方法

1.2.1 采樣皮膚刮片：在患病皮膚與健康皮膚交界處反復刮擦至輕微滲血后，將刮下的組織碎屑用無菌膠布粘取后固定在載玻片上。皮膚粘片：直接用無菌膠布粘取皮膚碎屑、皮屑、滲出液體等病料，之后固定在載玻片上。毛囊采樣：直接將毛發連根拔起，保留毛根部分，用膠布粘取后固定在無菌載玻片上。

1.2.2 病原菌接種用移液器吸取EP管中預處理的菌液200μL轉移至TSA培養皿中，接菌完畢后倒置平板，在37℃恒溫箱中過夜培養。用接種環粘取單個菌落后三區劃線接種至另一板TSA培養皿中，倒置后繼續放37℃恒溫箱中培養24 h。

1.2.3 鏡檢用乙醇消毒載玻片，接種環挑取少量細菌用畫圈方式于玻片中央均勻的涂布成適當大小的薄層，火焰快速固定后進行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察細菌形態并做好記錄。

1.2.4 藥敏實驗首先對超凈臺紫外消毒。分別吸取4種處理液置于平板；將濾紙剪成直徑10 mm的小濾紙片，并分成4份；將4組濾紙片分別放入4個平板中浸濕備用。接種環滅菌后將培養皿上的菌液在平板上涂布均勻，涂好的平板做好標記倒置。所有樣品重復上述步驟，同時設置空白對照。接種之后，每天觀察記錄細菌生長情況。

1.2.5 抗細菌香波的體內外效果評價方法對患病動物精神狀態、病灶清潔度與嚴重度、主要臨床表現等情況做觀察記錄。在初次采樣后，將患病動物用抗細菌香波原液涂抹全身，按摩皮膚患處5~10 min后用溫清水沖洗干凈，每3 d使用1次，連續使用3次。完畢后再次采樣，采樣部位同初次采樣方法、部位一致，樣品帶回實驗室做細菌培養與鑒定。

2 結果與分析

2.1 抗細菌香波的體外效果評價

2.1.1 分離菌株的菌落形態與鏡檢結果金黃色葡萄球菌菌落為直徑1~2 mm的圓形或類圓形，呈單個或成串排列，菌落邊緣光滑濕潤，呈黃色或黃白色（圖1a）；革蘭氏染色鏡檢觀察均為陽性球菌，著色不深，呈單個、成對或短鏈狀排列（圖2a）。大腸桿菌為直徑不到1 mm的圓形菌落，單個散在，菌落邊緣光滑濕潤，呈白色（圖1b），革蘭氏染色鏡檢觀察為陰性桿菌，著色良好，多呈單個排列（圖2b）。枯草芽孢桿菌菌落直徑較大，為3~5 mm，菌落表面似有一層凹凸不平膜，菌落邊緣光滑不平整，周圍滲出大量乳白色黏液（圖1c），革蘭氏染色鏡檢觀察為陽性短桿菌，著色良好，呈單個或成對排列（圖2c）。

圖1 TSA平板37℃培養24 h的菌落形態

圖2 菌落革蘭氏染色鏡檢結果

2.1.2 藥敏試驗結果由表1可見，毛太好抗細菌香波、樣品1、樣品2藥敏紙片周圍均出現抑菌圈，生理鹽水周圍則沒有出現抑菌圈。

表1 毛太好抗細菌香波對皮膚癬菌的抑菌效果

由圖3可見，毛太好抗細菌香波對偽中間型葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、臨床菌株C55的體外抑菌效果顯著優于對照組，樣品1和樣品2對這3種菌的抑菌效果差異均不顯著。與樣品1、樣品2相比，毛太好抗細菌香波對金黃色葡萄球菌的抑菌效果差異不顯著；而對偽中間型葡萄球菌、臨床菌株C55的抑菌效果明顯更強。因此，綜合認為毛太好抗細菌香波具有較好的抑菌效果。

圖3 毛太好抗細菌香波對3種菌抑菌效果

2.2 抗細菌香波的體內效果評價

2.2.1 香波使用前后情況對比表2所示為使用香波前后的膿皮病動物癥狀表現對比情況。可以看出，使用毛太好抗細菌香波后，患病動物病灶紅腫、化膿癥狀都有明顯好轉，直觀表現為紅腫面積縮小甚至痊愈，膿性分泌物減少或消失（圖4c）。脫毛癥狀也得到改善，表現為脫毛區域皮膚狀態好轉，肉眼可見長出新生毛發。此外，病灶瘙癢與清潔度也得到很大改善，具體表現為病灶表面分泌物減少、小動物抓撓患處的頻率減少以及清洗后清潔度明顯提高。

表2 膿皮病臨床癥狀評分

圖4 一例患膿皮病泰迪犬使用毛太好抗細菌香波前后對比

2.2.2 抗菌效果評價由表3可知，使用抗菌液香波前在病灶處共檢測出17株細菌，而使用抗菌液香波治療后僅發現5株。經鑒定發現這5株細菌分別為：金黃色葡萄球菌1株，枯草芽孢桿菌2株，蠟樣芽孢桿菌2株。與治療前相比，金黃色葡萄球菌株數減少5株，偽中間型葡萄球菌株數減少2株，枯草芽孢桿菌株數減少3株，蠟樣芽孢桿菌株數減少1株，大腸桿菌株數減少1株（表4）。使用毛太好抗細菌香波后病灶處細菌數目明顯變少，抑菌效果顯著。

表3 使用香波前后病灶處細菌情況

3 小結與討論

毛太好抗細菌香波的體內外效果評價結果表明，毛太好抗細菌香波對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌都有一定抗菌效果。治療后病灶紅腫、化膿、脫毛情況明顯改善，瘙癢得到緩解，清潔度大大增加，說明毛太好在皮損情況下能做到溫和不刺激、有效清潔和修復皮膚屏障；藥敏試驗結果也說明了其對偽中間型葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、臨床菌株C55有明顯抑菌效果，且毛太好抗細菌香波的抑菌效果相較于樣品1與樣品2更好，這對于臨床犬貓膿皮病的治療具有一定推廣意義。