難治性肺炎支原體肺炎患兒T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES檢測水平及其意義的研究

張松林 熊蕾蕾 余燕娟 靳秀紅

鄭州大學附屬兒童醫院河南省兒童醫院鄭州兒童醫院呼吸內科 450000

肺炎支原體肺炎是小兒常見肺炎類型，近年來發病率明顯上升，且患兒群體呈低齡化趨勢，重癥肺炎比例明顯增多，治療難度提高。一般認為病程較長、反復發作、病情較重、大環內脂類抗生素治療效果不佳者為難治性肺炎支原體肺炎，治療難度更大，通過分析其病情程度針對性制定干預措施對改善預后有積極作用。有相關報道指出，免疫紊亂是肺炎支原體肺炎主要發病機制，且可誘導多種炎性細胞因子，從而形成全身免疫反應及炎性反應［1］。本研究以鄭州大學附屬兒童醫院收治的肺炎患兒及支氣管狹窄、需做纖維支氣管鏡、無感染病灶的兒童為研究對象，以分析T細胞亞群、白細胞介素（IL）-8、IL-10、調節激活正常T 細胞表達和分泌因子（RANTES）的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取鄭州大學附屬兒童醫院2018 年7月至2021年1月收治的支氣管狹窄患兒進行前瞻性研究，根據不同感染類型分組，難治性肺炎支原體肺炎患兒34 例為觀察組，其中男21 例，女13 例；年齡范圍為3～12 歲，年齡（7.43±1.09）歲；病程范圍為5～22 d，病程（13.61±4.16）d。普通支氣管肺炎患兒32 例為肺炎組，其中男20 例，女12 例；年齡范圍為2～12 歲，年齡（7.24±1.15）歲；病程范圍為4～23 d，病程（13.95±4.23）d。支氣管狹窄、需做纖維支氣管鏡、無感染病灶的兒童31例為對照組，其中男20例，女11 例；年齡范圍為2～11 歲，年齡（7.06±1.20）歲。3 組研究對象的性別、年齡比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。患兒家屬知情本研究并簽署同意書。

本研究經鄭州大學附屬兒童醫院倫理委員會審批通過（倫審號2019-0513）。

1.2 選取標準 難治性肺炎支原體肺炎納入標準：入院前或者入院后肺炎支原體肺炎患兒經大環內酯類抗菌藥物正規治療7 d及以上，臨床征象加重，仍持續發熱，肺部影像學所見加重者。肺炎組即支氣管肺炎納入標準：肺部體征可聞及密布固定性的中、細濕啰音，胸部X 線片征象為肺野中內帶小片影或小斑片影，部分融合成較大片狀影，符合支氣管肺炎診斷標準。對照組納入標準：即胸部CT 提示局部氣管狹窄，需進一步行纖維支氣管鏡檢查，肺部無感染的健康兒童。排除標準：哮喘、其他變態反應性病史；采血前1 個月均無免疫藥物治療史；合并其他病原體感染；心肺功能異常。

1.3 方法 3 組兒童于入院次日晨起空腹采取靜脈血3 ml，其中2 ml 不抗凝，3 000 r/min（離心半徑8 cm），離心15 min，-80 ℃凍存血清。另1 ml 新鮮全血EDTA-2Na 抗凝后上流式機待用。采用流式細胞儀收獲淋巴細胞，用Cell Quest Plot 軟件程序分析數據獲取CD4+、CD8+的表達率。采用ELISA 法檢測血清IL-8、IL-10、RANTES 濃度，其中血清IL-8、IL-10在標本采集當天由鄭州大學附屬兒童醫院檢驗科完成，血清RANTES 濃度檢測由鄭州大學附屬兒童醫院檢驗科協同完成。試劑盒均購自北京萬泰生物藥業股份有限公司。

1.4 觀察指標 （1）統計3組T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平檢測結果。（2）分析難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度的T 細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平。疾病嚴重程度以crub-65評分進行評估，每存在下列情況之一則計1 分：意識障礙、血尿素氮＞7 mmol/L、呼吸頻率＞30次/min、收縮壓＜90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）或舒張壓＜60 mmHg、年齡＞65 歲，1 分表示輕度，2 分表示中度，3 分及以上表示重度。（3）分析難治性肺炎支原體肺炎患兒T 細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平與疾病嚴重程度的相關性。（4）難治性肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴重程度的多因素分析。

1.5 統計學分析 采用SPSS 23.0統計軟件分析，計量資料采取Bartlett方差齊性檢驗與Shapiro-wilk正態性檢驗，均確認具備方差齊性且近似服從正態分布，以（±s）表示，采用Mann-WhitneyU檢驗，組間比較采用單因素方差分析或Kruskal-Wallis 檢驗，相關性采用Spearman相關系數進行直線相關分析，以logistic 多元回歸方程行多因素分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 3 組T 細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平檢測結果 3組CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平比較差異均有統計學意義（均P＜0.05），且觀察組均CD4+、CD8+水平均低于肺炎組、對照組，IL-8、IL-10、RANTES水平均高于肺炎組、對照組（均P＜0.05）。見表1。

表1 3組研究對象T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平檢測結果（± s）

表1 3組研究對象T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平檢測結果（± s）

注：觀察組為難治性肺炎支原體肺炎患兒，肺炎組為普通支氣管肺炎患兒，對照組為支氣管狹窄、需做纖維支氣管鏡、無感染病灶兒童；IL為白細胞介素，RANTES為調節激活正常T細胞表達和分泌因子；與觀察組比較，aP＜0.05；與肺炎組比較，bP＜0.05

CD4+（%）22.53±4.19 34.36±4.93a 35.12±6.75a 57.416＜0.001 CD8+（%）22.11±2.03 26.62±2.35a 27.06±3.15a 38.570＜0.001 RANTES（μg/L）33.51±3.17 30.06±3.26a 26.84±3.12ab 35.651＜0.001組別觀察組肺炎組對照組F值P值例數34 32 31 IL-8（pg/ml）26.38±4.25 14.16±2.91a 7.52±1.69ab 298.193＜0.001 IL-10（pg/ml）15.73±2.11 11.06±1.85a 7.90±1.66ab 141.822＜0.001

2.2 難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平 不同嚴重程度難治性支原體肺炎患兒CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平比較差異均有統計學意義（均P＜0.05），隨病情程度加重CD4+、CD8+水平呈下降趨勢，IL-8、IL-10、RANTES 水平呈上升趨勢（均P＜0.05）。見表2。

表2 難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平（± s）

表2 難治性肺炎支原體肺炎患兒不同病情程度T細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES水平（± s）

注：IL為白細胞介素，RANTES為調節激活正常T細胞表達和分泌因子；與輕度患兒比較，aP＜0.05，與中度患者比較，bP＜0.05

病情程度輕度中度重度F值P值例數11 13 10 CD4+（%）25.76±4.03 21.64±3.67a 17.52±3.09ab 13.458＜0.001 CD8+（%）24.50±2.15 22.16±2.46a 18.23±2.88ab 16.746＜0.001 RANTES（μg/L）29.41±3.85 32.79±4.05a 35.76±3.84ab 6.885 0.003 IL-8（pg/ml）17.35±3.49 25.56±3.21a 29.46±3.48ab 35.689＜0.001 IL-10（pg/ml）12.46±2.53 15.98±1.65a 18.33±2.41ab 19.221＜0.001

2.3 難治性肺炎支原體肺炎患兒T 細胞亞群、IL-8、IL-10、RANTES 水平與病情程度的相關性 Spearman 相關性分析結果顯示，CD4+、CD8+水平與難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴重程度呈負相關（r1=-0.516，P1＜0.001；r2=-0.489，P2＜0.001），IL-8、IL-10、RANTES 水平與病情嚴重程度呈正相關（r1=0.564，P1＜0.001；r2=0.612，P2＜0.001；r3=0.441，P3＜0.001）。

2.4 難治性肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴重程度的多因素分析 結果顯示，CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平均為難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴重程度的影響因素（均P＜0.05），見表3。

表3 難治性肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴重程度的多因素分析（34例）

3 討 論

有數據顯示，近10 年肺炎支原體肺炎感染率提高近10 倍，難治性肺炎支原體肺炎發病率同樣有上升趨勢［2-3］。肺炎支原體是造成呼吸道感染的主要致病菌，同時是導致小兒肺炎的首要因素。肺支原體肺炎發病緩慢，臨床癥狀無明顯特異性，但若未及時干預，可引發肺部嚴重損傷，甚至誘發呼吸衰竭，威脅患兒健康［4-5］。難治性肺炎支原體肺炎是反復出現的、刺激性的肺炎支原體肺炎，目前臨床認為其主要致病因素與免疫功能異常、合并其他感染等因素有關［6-7］。免疫功能紊亂是導致肺炎支原體肺炎的重要機制，而T 細胞介導的免疫反應以Th1/Th2 失衡為主要表現［8］。有研究認為，肺炎支原體肺炎感染可誘發體液免疫及細胞免疫功能紊亂，Th2 細胞介導免疫處于優勢，Th1 介導的免疫受到抑制［9］。本研究中觀察組CD4+、CD8+水平均明顯低于肺炎組、對照組，說明難治性肺炎支原體肺炎患兒免疫功能紊亂更加明顯。

肺炎支原體感染期間可產生炎性因子，炎性因子過度表達是肺炎支原體肺炎主要特征。IL-8是多源性炎性細胞因子，可趨化T 淋巴細胞、嗜堿性粒細胞、中性粒細胞，促使炎癥細胞聚集并釋放大量活性物質，IL-8 過度表達可造成組織損傷，對反映肺炎支原體肺炎病情程度及轉歸情況有重要價值［10-11］。IL-10 是抑制性細胞因子，可抑制單核巨噬細胞功能起到抑制炎性反應的作用，其分泌不足會造成炎癥過程中不可逆組織損傷，在機體感染或其他誘因刺激下呈高水平表達［12］。RANTES 可趨化嗜酸性粒細胞、T淋巴細胞，誘導、激活T 淋巴細胞增殖，介導白細胞轉移，促使白細胞附著于內皮細胞［13］。RANTES 可影響Th1、Th2 細胞而參與免疫反應，在Th1/Th2免疫失衡過程中有重要作用。本研究中觀察組IL-8、IL-10、RANTES 水平明顯高于肺炎組、對照組，說明炎性反應及免疫失衡在難治性肺炎支原體肺炎發病過程中有明顯作用。進一步分析顯示，CD4+、CD8+水平與難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴重程度呈負相關，IL-8、IL-10、RANTES 水平與病情嚴重程度呈正相關，且均為難治性肺炎支原體肺炎患兒病情嚴重程度的影響因素，說明通過檢測CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平可分析肺炎支原體肺炎患兒病情程度，對臨床干預提供詳細信息。

綜上所述，難治性肺炎支原體肺炎患兒CD4+、CD8+水平呈低表達，IL-8、IL-10、RANTES 水平呈高表達，且CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平可用于分析難治性肺炎支原體患兒病情程度，有助于為臨床制定干預措施提供客觀依據，具有重要臨床價值。

利益沖突：作者已申明文章無相關利益沖突。