臍血PLGF、RBP-4、irisin與胎兒生長(zhǎng)受限的相關(guān)性研究

張蕊，張彩麗，趙亞普

(1.保定市第二醫(yī)院 產(chǎn)科，河北 保定 071051； 2.保定市競(jìng)秀區(qū)婦幼保健院，河北 保定 071000)

胎兒生長(zhǎng)受限(fetal growth retriction，F(xiàn)GR)是妊娠期的一種常見(jiàn)并發(fā)癥，即胎兒出生體質(zhì)量小于同孕齡、同性別新生兒體質(zhì)量均值的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，或小于同齡者正常體質(zhì)量的第10百分位數(shù)，已成為導(dǎo)致圍生兒死亡的重要因素[1]。FGR可引起胎兒酸中毒、缺氧等癥狀，或影響兒童智力發(fā)育以及遠(yuǎn)期的體格發(fā)育，增加內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等患病風(fēng)險(xiǎn)[2]。目前臨床對(duì)FGR的防治工作越來(lái)越重視，但FGR的病因非常復(fù)雜，發(fā)生機(jī)制尚不明確，對(duì)其了解比較局限，仍須進(jìn)一步探討該圍產(chǎn)期并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制，以便及時(shí)預(yù)防。胎盤生長(zhǎng)因子(placenta growth factor，PLGF)對(duì)維持胎盤功能以及促進(jìn)胎兒發(fā)育有重要作用，其能促進(jìn)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)，而一旦PLGF表達(dá)水平失衡，則會(huì)影響胎盤血流灌注，使胎兒處于慢性缺氧狀態(tài)，致發(fā)育速度減緩[3]。視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol binding protein 4，RBP-4)可影響機(jī)體對(duì)葡萄糖的攝入量，調(diào)節(jié)糖脂代謝，其可能影響抵抗素、脂聯(lián)素、瘦素等因子分泌，致胎兒發(fā)育環(huán)境改變[4]。鳶尾素(irisin)是一種肽類激素，在運(yùn)動(dòng)后經(jīng)脂肪、肌肉分泌而出，可反映人體的脂肪量、體質(zhì)量情況，而孕婦的脂肪量、體質(zhì)量變化與FGR發(fā)生密切相關(guān)[5]。本研究旨在觀察臍血PLGF、RBP-4、irisin與FGR的相關(guān)性，進(jìn)一步分析FGR的發(fā)病機(jī)制，為其防治提供依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

前瞻性選取2017年9月至2020年7月于保定市第二醫(yī)院分娩的56例FGR孕婦作為FGR組，選取同期于該院分娩的56例正常孕婦(新生兒正常)作為對(duì)照組。研究方案獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組產(chǎn)次、年齡、孕周、孕前體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)、臍血流S/D值比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組基線資料比較

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1) FGR組：1) 胎兒娩出后小于同孕齡、同性別新生兒平均體質(zhì)量的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，或小于同齡者正常體質(zhì)量的第10百分位數(shù)；2) 單胎妊娠者；3) 足月妊娠者；4) 自然受孕者；5) 新生兒Apgar評(píng)分8～10分者；6) 對(duì)研究?jī)?nèi)容知情同意者。(2) 對(duì)照組：1) 健康足月妊娠孕婦，胎兒體質(zhì)量正常者；2)、3)、4)、5)、6)與FGR組相同。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1) 新生兒先天畸形者；(2) 母體既往(含孕期)有高血壓、肝腎疾病、甲狀腺疾病、血液系統(tǒng)疾病等病史者；(3) 妊娠期嚴(yán)重貧血者；(4) 有病毒感染病史者；(5) 孕期有飲酒、吸煙史者；(6) 生殖器畸形者。

1.3 方法

臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平檢測(cè)：在胎兒出生后，立刻取3 ml臍靜脈血，離心處理10 min，轉(zhuǎn)速為3 000 r·min-1，離心半徑為8 cm，分離血清，存放至-70 ℃冰箱等待檢測(cè)。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清PLGF、RBP-4、irisin水平，試劑盒由上海臻科生物科技有限公司提供。具體操作如下：在實(shí)驗(yàn)之前，利用樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品(2瓶)稀釋成1 ml，封蓋，靜置10 min，顛倒充分混勻，同時(shí)避免形成氣泡，液體質(zhì)量濃度為2 000 ng·ml-1，按照系列倍比進(jìn)行稀釋。常規(guī)設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔以及標(biāo)準(zhǔn)品孔，共有8孔，取樣品稀釋液100 μl加入。取100 μl標(biāo)準(zhǔn)品加入第1孔，充分混勻，經(jīng)加樣器吸取100 μl混合液，移入第2孔，重復(fù)上述操作至第7孔，從該孔內(nèi)吸取混合液100 μl，棄去，第8孔作為空白孔。在操作過(guò)程中避免氣泡形成，加樣時(shí)謹(jǐn)慎操作，避免觸碰到孔壁，在37 ℃下孵育120 min。棄液體，甩干，無(wú)須洗滌，取100 μl生物素抗人PLGF或RBP-4或irisin加入，空白孔無(wú)須添加，在37 ℃下溫育60 min。經(jīng)PBS液進(jìn)行3次洗滌，2 min·次-1。取100 μl TMB顯色液加入，在37 ℃下孵育15 min，取TMB終止液0.1 ml加入，經(jīng)酶標(biāo)儀(品牌：風(fēng)途，型號(hào)：FT-SY96S)測(cè)定吸光度值，波長(zhǎng)為450 nm。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

經(jīng)SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料用百分比(%)表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組比較行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。經(jīng)Logistic多元回歸模型分析FGR發(fā)生的影響因素，采用Pearson線性相關(guān)分析FGR患兒臍血血清PLGF、RBP-4、irisin與新生兒體質(zhì)量的相關(guān)性。繪制受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線分析臍血血清PLGF、RBP-4、irisin評(píng)估FGR的曲線下面積(area under curve，AUC)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臍血血清PLGF、RBP- 4、irisin水平比較

FGR組臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平均低于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平比較

2.2 FGR發(fā)生的Logistic多因素回歸性分析

利用Logistic多因素回歸模型對(duì)相關(guān)變量行量化賦值，將表3中各變量作為自變量X，其中臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平以均值為界賦值，將是否發(fā)生FGR作為因變量Y(否=0，是=1)，結(jié)果提示胎盤異常、羊水過(guò)少是FGR發(fā)生的危險(xiǎn)因素，而臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平相對(duì)增高是預(yù)防FGP的保護(hù)性因素(P<0.05)。

表3 FGR發(fā)生的Logistic多因素回歸性分析

2.3 FGR患者臍血PLGF、RBP- 4、irisin水平與新生兒體質(zhì)量的相關(guān)性

經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析提示，F(xiàn)GR患者臍血PLGF、RBP-4、irisin與新生兒體質(zhì)量呈正相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 FGR患者臍血PLGF、RBP-4、irisin與新生兒體質(zhì)量的相關(guān)性

2.4 臍血PLGF、RBP- 4、irisin水平對(duì)FGR的評(píng)估價(jià)值分析

通過(guò)繪制ROC曲線(圖1)，提示臍血PLGF、RBP-4、irisin水平評(píng)估FGR的AUC分別為0.783、0.726、0.767，三者聯(lián)合評(píng)估的AUC為0.893，見(jiàn)表5。

圖1 臍血PLGF、RBP-4、irisin水平評(píng)估FGR的ROC曲線

表5 臍血PLGF、RBP-4、irisin水平對(duì)FGR的評(píng)估價(jià)值分析

3 討 論

FGR的發(fā)生涉及到較多機(jī)制，例如胎盤運(yùn)轉(zhuǎn)機(jī)制、母體因素、臍帶因素等，但具體機(jī)制至今尚未完全明確，其中50%～60%因母體因素所致[6]。母體是胎兒攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來(lái)源，若女性在妊娠期間營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入過(guò)少，則可引起營(yíng)養(yǎng)不良，不利于胎兒發(fā)育與生長(zhǎng)。此外，母體維生素、微量元素缺乏也可導(dǎo)致胎兒發(fā)育受到不良影響，甚至引起胎兒畸形，降低新生兒質(zhì)量[7]。孫蓮蓮等[8]認(rèn)為，F(xiàn)GR可導(dǎo)致腎臟組織發(fā)育異常，且對(duì)近期以及遠(yuǎn)期腎功能造成不同程度損害，增加成年期腎病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，研究指出FGR不僅會(huì)引起圍生期窒息、低血糖等不良事件，而且會(huì)影響遠(yuǎn)期神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，或造成感知性差、工作能力下降、行為問(wèn)題等事件[9]。對(duì)FGR進(jìn)行早期診斷與治療，是改善預(yù)后的關(guān)鍵，臨床仍須進(jìn)一步掌握該病的進(jìn)展機(jī)制，為FGR防治與診療提供依據(jù)。匡德鳳等[10]指出，PLGF在胎盤組織中妊娠前15周表達(dá)相對(duì)較低，而妊娠15～26周 后表達(dá)增高，且在28～30周達(dá)峰值，進(jìn)入妊娠后期則表達(dá)下降，但在分娩過(guò)程中，如果出現(xiàn)缺氧、缺血等現(xiàn)象，也可見(jiàn)PLGF下降。董金華等[11]認(rèn)為，RBP-4與新生兒體質(zhì)量有關(guān)，它對(duì)巨大兒的評(píng)估有一定價(jià)值。irisin會(huì)影響脂肪細(xì)胞因子分泌，與人體生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)，但作用機(jī)制未完全明確[12]。本研究則納入PLGF、RBP-4、irisin 3項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析，觀察三者在FGR中可能發(fā)揮的作用機(jī)制，為該類事件的預(yù)防提供思路。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)GR組臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平均低于對(duì)照組。PLGF主要源于胎盤，能與其受體結(jié)合使血管生成活性提升，可調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、侵入以及分化過(guò)程，在胚胎生長(zhǎng)、胎盤絨毛血管形成過(guò)程中有重要作用，PLGF水平適宜能滿足胎兒生長(zhǎng)、發(fā)育需求[13]。本研究FGR組臍血血清PLGF水平下降，進(jìn)一步提示其參與了FGR發(fā)生過(guò)程。FGR與PLGF表達(dá)失衡存在關(guān)聯(lián)，其表達(dá)下調(diào)使胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞受到損害，并引起絨毛血管生成障礙，影響胎盤血流灌注，致胎兒缺氧、缺血，導(dǎo)致FGR發(fā)生[14]。RBP-4是脂肪因子，對(duì)胰島素抵抗及糖脂代謝有調(diào)節(jié)作用。本研究FGR組臍血RBP-4水平下降。RBP-4可通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪合成參與FGR發(fā)生過(guò)程，脂肪組織合成數(shù)量下降可導(dǎo)致RBP-4分泌減少，影響胎兒發(fā)育[15]。胎兒主要通過(guò)母體獲取irisin，它能促使白色脂肪細(xì)胞變成棕色脂肪細(xì)胞，從而提升消耗，提高機(jī)體內(nèi)的碳水化合物代謝能力。irisin減少可導(dǎo)致嬰兒期脂肪儲(chǔ)備能力下降，致生長(zhǎng)發(fā)育遲緩[16]。本研究FGR組臍血irisin下降，提示母體可能存在棕色脂肪細(xì)胞儲(chǔ)備能力下降，不利于胎兒宮內(nèi)發(fā)育。本研究結(jié)果顯示，臍血PLGF、RBP-4、irisin相對(duì)增高可能對(duì)預(yù)防FGP發(fā)生有一定作用，且三者與新生兒體質(zhì)量呈正相關(guān)，對(duì)FGR評(píng)估有一定價(jià)值。范秀麗等[17]認(rèn)為，PLGF與重度子癇前期并FGR有關(guān)。金艷榮等[18]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GR組孕婦血清RBP-4水平較正常孕婦明顯降低，且與新生兒體質(zhì)量呈正相關(guān)。郭翔等[19]研究提示，高水平的irisin能增加巨大兒發(fā)生率，間接提示irisin與新生兒體質(zhì)量存在關(guān)聯(lián)。上述三者在FGR發(fā)生中均發(fā)揮了重要作用，其中PLGF下降能促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，削弱胎盤血管擴(kuò)張效應(yīng)，致胎盤絨毛血管處于缺氧、缺血狀態(tài)，引起母胎營(yíng)養(yǎng)交換障礙，RBP-4、irisin水平下降則會(huì)影響機(jī)體脂肪細(xì)胞分泌、存儲(chǔ)能力，不利于胎兒宮內(nèi)發(fā)育，臨床可考慮將上調(diào)PLGF、RBP-4、irisin水平作為預(yù)防或改善FGP的新思路。

FGR發(fā)生與多種因素有關(guān)，本研究 FGR的發(fā)生與胎盤異常、羊水過(guò)少有關(guān)，原因可能如下：(1) 胎盤對(duì)維持母胎氣體、營(yíng)養(yǎng)交換有重要作用，一旦胎盤出現(xiàn)異常，則會(huì)影響胎兒狀況，例如胎盤超微結(jié)構(gòu)改變可繼發(fā)血管生成素、PLGF等異常表達(dá)，致胎盤缺氧與缺血，引起FGR[20]。(2) 羊水過(guò)少可能與胎兒宮內(nèi)缺氧存在關(guān)聯(lián)，在這種情況下，母體腸蠕動(dòng)亢進(jìn)，胎糞進(jìn)入羊水中導(dǎo)致羊水污染，致胎兒缺氧，增加了FGR發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[21]。

綜上所述，臍血血清PLGF、RBP-4、irisin水平下調(diào)可能與FGR發(fā)生有關(guān)，三者與新生兒體質(zhì)量密切相關(guān)，并且對(duì)FGR有一定評(píng)估價(jià)值。本研究局限性在于病例收集時(shí)間有限，導(dǎo)致樣本量偏少，今后須增加樣本量更深入分析PLGF、RBP-4、irisin在FGR中的作用機(jī)制。