高遷移率族蛋白A1、堿性成纖維細胞生長因子、促紅細胞生成素在宮頸癌中的表達及與患者臨床特征和預后的關系

盧書芳，閆秀玲，孫曉娜

平煤神馬醫療集團總醫院婦產科，河南 平頂山4670000

宮頸癌是臨床常見的婦科惡性腫瘤之一，目前，臨床治療以根治性手術為主，但多數宮頸癌患者早期癥狀不明顯，因此，就診時多已處于中晚期，失去了最佳的手術治療機會，研究發現，高危HPV 持續感染進展為宮頸癌所需要的時間較長，隨著腫瘤分子生物學的發展，腫瘤的發生、發展與協同因子有關，如原癌基因的激活、抑癌基因的失活及相關基因的異常表達。高遷移率族蛋白A1（high mobility group protein A1，HMGA1）屬于染色質相關蛋白，在多種惡性腫瘤上皮組織中過表達，且與腫瘤發生發展及患者的預后密切相關；堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）與腫瘤新生血管生成密切相關；促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）屬于糖蛋白細胞因子，可參與腫瘤細胞抗凋亡、抗缺氧及腫瘤新生血管生成過程，目前，上述三種因子在宮頸癌中表達情況的臨床報道相對少見。基于此，本研究探討HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌中的表達及與患者預后的關系，以期為臨床提供指導和依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2020 年6 月平煤神馬醫療集團總醫院收治的宮頸癌患者。納入標準：①經病理學檢查確診為宮頸癌；②年齡18～60 歲；③均接受宮頸癌根治術治療；④術前未接受放化療等治療；⑤臨床隨訪資料完整。排除標準：①合并其他系統惡性腫瘤；②合并免疫系統疾病、血液系統疾病。依據納入和排除標準，本研究共納入98 例宮頸癌患者，年齡（50.98±9.65）歲；體重指數（body mass index，BMI）為（22.84±3.55）kg/m；已育63 例，未育35 例；絕經59 例。同時選取本院收治的50 例子宮肌瘤患者，均接受子宮全切術治療，無肝腎功能障礙、免疫系統疾病、血液系統疾病等，年齡（49.32±8.19）歲；BMI 為（22.60±4.12）kg/m；已育33例，未育17 例；絕經31 例。兩組患者年齡、BMI 和生育情況等臨床特征比較，差異均無統計學意義（

P

﹥0.05），具有可比性。取98 例宮頸癌患者的宮頸癌組織和50 例子宮內膜癌患者的正常宮頸組織，備檢。

1.2 免疫組化法檢測HMGA1、bFGF、EPO 的表達情況

取98 例宮頸癌組織和50 例正常宮頸組織中性福爾馬林固定，常規石蠟包埋，切片，厚度為3 μm，烘烤切片，置入10%二甲苯脫蠟10 min，分別置于100%、95%、85%、75%濃度梯度的乙醇中2 min，蒸餾水浸泡2 次，每次2 min。3%過氧化氫去離子水孵育10 min，蒸餾水沖洗2 min，滴加HMGA1、bFGF、EPO一抗和二抗[反應條件：37 ℃溫箱孵育20 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗4 次，每次2 min]，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復染10 min，鹽酸乙醇分化3 s，氨水反藍3 s，中性樹膠封片。

1.3 免疫組化法結果判定

HMGA1、bFGF、EPO 主要定位于細胞核，未著色為陰性，細胞核呈黃色或棕黃色染色為陽性，其中著色略深為1 分，著色較深為2 分，明顯加深為3分。陽性細胞所占比例：﹤5%為0 分，5%～10%為1分，11%～25%為2 分，26%～50%為3 分，﹥50%為4分。每張切片隨機觀察5 個高倍視野，每個視野計數100 個細胞，取平均值。將著色強度與陽性細胞所占比例評分相加，≥4 分為陽性，﹤4 分為陰性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 HMGA1、bFGF、EPO 表達情況的比較

宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 和EPO 陽性表達率均明顯高于正常宮頸組織，差異均有統計學意義（

P

﹤0.05）。（表1）

表1 宮頸癌組織和正常宮頸組織中HMGA1、bFGF、EPO陽性表達率的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF、EPO 表達情況的比較

不同年齡、BMI、絕經情況、生育情況、病理類型、分化程度和淋巴結轉移情況宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF、EPO 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（

P

﹥0.05）。國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期為Ⅱ期的宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 陽性表達率均高于FIGO 分期為Ⅰ期的患者，差異均有統計學意義（

χ

=7.760、17.626，

P

﹤0.05）；FIGO 分期為Ⅱ期、分化程度為低分化、有淋巴結轉移的宮頸癌患者宮頸癌組織中EPO 陽性表達率均高于FIGO 分期為Ⅰ期、分化程度為中高分化和無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（

χ

=10.906、6.584、7.510，

P

﹤0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF、EPO 陽性表達率的比較（n=98）

2.3 HMGA1、bFGF、EPO 表達的相關性分析

HMGA1 的表達與bFGF 的表達無相關性（

P

﹥0.05），與EPO 的表達呈正相關（

r

=0.337，

P

﹤0.05），bFGF 表達與EPO 的表達呈正相關（

r

=0.414，

P

﹤0.05）。

2.4 MGA1、bFGF、EPO 的表達與宮頸癌患者預后的關系

采用門診、電話隨訪的方式對宮頸癌患者進行5～32 個月的隨訪，隨訪時間截至2020 年11 月，98例宮頸癌患者復發31 例，未復發67 例。復發與未復發宮頸癌患者的復發患者HMGA1、bFGF 陽性表達率比較，差異均無統計學意義（

P

﹥0.05）；復發宮頸癌患者EPO 陽性表達率高于未復發患者，差異有統計學意義（

P

﹤0.05）。（表3）

表3 復發和未復發宮頸癌患者HMGA1、bFGF、EPO 陽性表達率的比較[n（%）]

3 討論

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅女性的身心健康和生命安全，目前，全球范圍內，每年新發宮頸癌患者近50 萬例，其中4/5 發生于發展中國家，近年來隨著早期診斷技術的不斷發展，宮頸癌的早期診斷率明顯提升。目前，臨床主要采用手術切除治療早期宮頸癌，手術更適合應用于Ⅰa～Ⅱa 期患者，而晚期病變進行手術治療的預后較差，可以采取新輔助化療減少病灶間質浸潤與淋巴結轉移的風險后，再進行手術治療。以往臨床主要根據查體、活檢或內鏡檢查結果明確宮頸癌患者的臨床分期，但由于難以確認腫瘤浸潤范圍及浸潤深度，導致分期準確度較差，影響了宮頸癌治療方案的確定。早期明確診斷宮頸癌并準確進行臨床分期，對治療方案的選擇和患者預后的改善均有重要意義，目前，影響宮頸癌發病的具體機制尚未明確，主要經過癌前病變、原位癌、浸潤癌的連續演變過程，受到環境、宿主及病毒等多種因素的影響，因此，如何準確評估宮頸癌的病理特征已成為臨床宮頸癌治療的關鍵。

本研究探討分子生物學指標HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌中的表達，其中HMGA1 屬于染色體相關蛋白，廣泛存在于真核生物細胞中，研究發現，HMGA1 可影響正常的生物學過程，通過與核小體結合參與細胞分裂過程中的染色體運動，同時維持染色質結構，參與基因調節，通過參與增強子復合物的形成與蛋白質相互作用調節基因轉錄，并參與長序列啟動子基因的調控。本研究結果顯示，HMGA1 在宮頸癌組織中的表達明顯上調，有學者發現，HMGA1 在宮頸癌組織中高表達，在正常的宮頸上皮組織中幾乎不表達，且在浸潤性宮頸癌中呈強陽性表達，表明HMGA1 可以作為診斷浸潤性宮頸癌的重要方法，且其表達強度與宮頸上皮病變程度呈正相關，與本研究結果相似。bFGF 一般由內皮細胞、巨噬細胞、平滑肌細胞分泌，主要作用是促進內皮細胞游走與平滑肌細胞增殖，因此，bFGF 具有促進腫瘤新生血管生成的作用，有學者采用免疫組化法檢測bFGF 在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變和正常宮頸組織中的表達情況，結果發現，bFGF 可作為評估宮頸癌細胞生物學行為的客觀指標，且與宮頸癌患者臨床分期、組織學分級、淋巴結轉移情況和宮旁浸潤有關。EPO則屬于對熱和酸穩定的酸性糖蛋白質，由淺表腎單位的腎小管周圍毛細血管內皮細胞或成纖維細胞合成，研究顯示，腫瘤細胞分泌EPO，主要參與抗凋亡、抗缺氧、促進腫瘤新生血管生成、調節免疫功能、協同相關細胞因子的作用，其中促進腫瘤新生血管生成是通過促內皮細胞增殖、轉變為管狀結構、促進管狀結構延長實現。

本研究結果顯示，宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 和EPO 的陽性表達率均明顯高于正常宮頸組織，表明HMGA1、bFGF 和EPO 在宮頸癌患者中均呈異常高表達。本研究結果顯示，FIGO 分期為Ⅱ期的宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 陽性表達率均高于FIGO 分期為Ⅰ期的患者，FIGO 分期為Ⅱ期、分化程度為低分化、有淋巴結轉移的宮頸癌患者宮頸癌組織中EPO 陽性表達率均高于FIGO 分期為Ⅰ期、分化程度為中高分化和無淋巴結轉移的患者。表明HMGA1、bFGF、EPO 與腫瘤臨床分期可能有關，EPO 還可能與淋巴結轉移和分化程度有關。研究發現，EPO 屬于腎臟分泌活性糖蛋白，可造成骨髓中紅系造血祖細胞增殖、分化，因此，宮頸癌復發患者由于腫瘤細胞增殖可導致EPO 表達陽性。有學者發現，局部微環境缺氧是宮頸上皮內瘤變進展的重要影響因素之一，EPO為缺氧調節因子，其過表達與惡性腫瘤轉移和復發密切相關，與本研究結果相似。本研究結果發現，復發宮頸癌患者EPO 陽性表達率高于未復發患者。本研究探討HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌中的表達情況與患者的臨床特征有關，可影響腫瘤的生物學行為，對腫瘤的早期診斷、預后評估及治療方案的制訂均有重要意義，可通過某種方式下調或抑制相關因子的表達以對宮頸癌進行治療，但仍有待進一歩研究。

綜上述所，HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌組織中表達上調，其與宮頸癌患者的FIGO 分期、淋巴結轉移情況及分化程度可能有關，EPO 的表達可能與宮頸癌根治術術后患者的復發風險有關。