食品中肌醇的微生物檢測方法研究

張曉英

山東省膠州市疾病預防控制中心，山東 青島 266300

肌醇是一種廣泛分布在動植物體內和微生物組織中的生長因子，參與生命體的新陳代謝活動[1]。肌醇類屬于維生素B族、維生素H族的范疇，有促進脂肪代謝、防止脂肪堆積的作用，并有助于提供營養支持, 保障生理功能的正常性[2]。肌醇常被作為營養劑添加于食品中，例如飲料、奶粉等食品，但其定量需嚴格控制，以確保食用安全性，因此食品中肌醇的檢測需要準確、高效的進行[3]。微生物檢測方法具有良好的靈敏度和重現性，有助于提升肌醇含量測定的準確率。本次試驗以某品牌的功能飲料作為測試對象，總結測試試驗如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 本次試驗采用三個品牌同一批次功能飲料作為測試對象，試驗器材包含容量瓶多個、高壓滅菌器、旋渦混合器、離心機和生化培養箱等。試驗過程全部由同一試驗員進行。

1.2試驗方法 微生物檢測方法較為繁瑣，本文主要歸納為兩個部分，即材料制備和試驗培養，其中材料制備包括肌醇儲備液的制備和菌液的制備。

1.2.1材料制備 (1)制備肌醇儲備液。稱取完成干燥處理的標準肌醇物質0.005g，放入250ml的容量瓶內，用蒸餾水定容，定容后的肌醇標準液濃度為0.2mg/ml。然后吸取肌醇標準液10 ml，加入到200ml的容量瓶中, 再次用蒸餾水進行定容。此時容量瓶內肌醇溶液濃度為10μg/ml，制備中間液后，將兩瓶肌醇液放至冰箱內低溫保存。實驗中吸取10ml中間液，分別放入100ml容量瓶和50ml容量瓶內，用蒸餾水進行定容。將肌醇標準液使用高壓滅菌器進行為期一小時的高壓消化，溫度設置為120℃。完成高壓消化后冷卻至自然室溫，再用鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液進行調試, 使其轉變為pH值等于5的微酸性溶液，然后用250ml的容量瓶定容。(2)制備菌液：選擇無菌實驗室進行菌液的制備，在30℃培養基中培養24小時進行酵母菌活化。取培養的酵母菌二至三代斜面中的菌種作為儲備菌種，在2℃環境中保存，保存時效控制在半個月以內。于試驗前一天取出儲備菌種，用生理鹽水滅菌，并形成菌懸液，裝入離心管內進行3 min離心處理，離心機轉速設置為2000r/min。然后使用漩渦振蕩器混合菌懸液與生理鹽水，完成至少三次洗滌。洗滌后, 放入試管借助分光光度計測量波長，透光率達到60%以上即可。

1.2.2試驗培養 將制備好的蒸餾水-肌醇標準液和已測定的培養基放入試管，此時試管內肌醇含量為0～10μg。除0肌醇試管(即不含有肌醇的試管)外，其余試管均加入50μl菌懸液。開啟漩渦振蕩器震蕩所有試管, 使肌醇標準液與菌懸液混合, 調整培養箱內部溫度達到30℃后，加入混合溶液進行培養，并測量培養結果。

1.2.4數據處理 本試驗數據處理使用軟件ELISA的Logistic參數方程進行分析計算，數據結果偏差用RSD%表示。

2 結 果

2.1肌醇、吸光度二變量相關性 經試驗結果統計分析計算得知，在肌醇變化的標準曲線當中, 肌醇試樣0～10μg試管呈現出良好的線性關系。其中肌醇含量與吸光度之間成正比。經計算得出肌醇、吸光度二變量的回歸方程是y=0.0875x+0.7328，相關系數R2≈0.994。

2.2試驗精密度計算結果 本次試驗所采取的三種品牌同一批次的功能飲料作為樣本，在平行試驗中透過試驗結果對不同品牌功能飲料進行數據觀察, 得出本次試驗檢測的精密度情況。結果顯示，三種功能飲料測試樣本存在細微的精密度差別，說明三個品牌的功能飲料所含肌醇水平相對接近。此外, 回收率試驗與其他類型食品試驗的對比分析, 發現功能飲料實驗品在肌醇標準液回收率方面相比于其他類型食品試驗相對穩定, 區間基本維持在98.8%～100%, 說明微生物檢測法檢測食品中肌醇含量準確度較高。

3 討 論

肌醇是飽和環狀多元醇，化學性質相對穩定，能對抗多種化學試劑的作用，常用的檢測方法有化學法、微生物法、氣相色譜法、液相質譜法、高效毛細管電泳法等[4]。但由于較高的準確度、靈敏度等要求，需要測試更準確、穩定的檢測方法，以保證食品安全等問題[5]?！妒称钒踩珖覙藴?食品中肌醇的測定》中列舉的第一種檢測方法就是微生物檢測方法，該方法具有高度靈敏性，檢測準確，且適用于廣泛的食品種類檢測[6]。有資料表示，微生物檢測法的缺點是試驗制備溶液雖操作簡單，但步驟繁瑣，且操作周期較長，易受外界環境因素干擾[7]。

統計分析本次試驗結果得知，肌醇含量與吸光度之間成正比關系，并由此計算出肌醇、吸光度二變量的回歸方程。另一方面，試驗證明功能飲料實驗品在肌醇標準液回收率方面相比于其他類型食品試驗明顯穩定, 區間基本維持在98.8%～100%，說明微生物檢測法測定食品中肌醇含量準確度較高，方法可靠，且操作簡單，靈敏度高，檢測成本較低，值得推廣使用。