OCA2 基因核苷酸rs4778137多態性對三陰性乳腺癌新輔助化療效果的影響研究

雷浩 楊文榮 李仲華

三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是一種孕激素受體(progesterone，PR)、雌激素受體(estrogen，ER)、人表皮生長因子受體2(human epithelial growth factor receptor-2,HER-2)均表達較少或無表達的疾病，具有較高的異質性、較強的侵襲能力并易向遠處轉移，且治療方法有限、存活率較低、預后較差[1-3]。目前乳腺癌發病率約占所有惡性腫瘤的23%，且世界以每年130萬增量不斷增多，死亡率較高，而TNBC病人占乳腺癌病人的比例為15%～20%[4-5]?；熓荰NBC較常見的治療方法，但有些病人對于常規化療無反應或者惡心。目前應用較廣泛的治療方法大都集中于新輔助化療，其不但能清除微小轉移灶提高保乳率、降低耐藥性，而且能降低腫瘤分期甚至能提高病理完全緩解(pathologic complete response，pCR)病人的遠期生存[6-7]。但因基因不同導致個體差異較大，新輔助化療效果也不盡相同?；騉CA2又名酪氨酸酶基因，和酪氨酸代謝有關，在白化病治療中被廣泛研究[7]。此外，OCA2對于惡性腫瘤的發生、發展意義重大，OCA2的變異能引起乳腺癌病人治療效果的差異。本研究通過對基因OCA2的核苷酸序列rs4778137多態性的研究，探討其與新輔助化療效果的相關性。

對象與方法

一、對象

經本院倫理委員會同意，選取2016年2月～2020年3月在本院確診為TNBC女性病人72例為研究對象，年齡33～74歲，平均年齡(48.6±5.7)歲，絕經32例，未絕經40例，淋巴結轉移37例，病程6天～3年，平均病程(1.9±0.8)年，體質量指數(23.6±2.0)kg/m2。TNBC病人pCR標準為治療后病理結果顯示乳房及腋窩處均不存在癌殘留。

納入標準：(1)病理結果顯示ER、PR、HER-2均為陰性的乳腺浸潤性導管癌病人，且TNM分期為Ⅱb～Ⅲc期的局部晚期乳腺癌；(2)臨床病理學資料完整；(3)無其他腫瘤病史；(4)年齡20～80歲；(5)病人及家屬自愿參與研究，并簽署知情同意書。排除標準：(1)患有重大心、肺、腎疾??；(2)入組前1個月服用過治療乳腺癌的藥物；(3)患有精神疾??；(4)中途退出研究；(5)炎性乳腺癌、鱗癌病人、男性乳腺癌；(6)對新輔助化療過程使用藥物過敏或不愿接受新輔助化療。

二、方法

1.新輔助化療方法：采用環磷酰胺(國藥準字H32024654，江蘇盛迪醫藥有限公司)聯合鹽酸表柔比星[國藥準字H20000496，輝瑞制藥(無錫)有限公司，規格：10mg/瓶]續貫紫杉醇(國藥準字H20064299，揚州奧賽康藥業有限公司,規格：16.7ml ·100 mg/瓶)方法：用5%的葡萄糖溶液10 ml稀釋紫杉醇至175 mg/m2，并使用振蕩器(貨號：Vortex 3000，北京乾明基因技術有限公司)震蕩10分鐘，待其溶解后轉移至500 ml的葡萄糖溶液中，靜脈注射3小時；環磷酰胺注射液靜脈注射按體表面積每次500 mg/m2，加生理鹽水20～30 ml，鹽酸表柔比星10 ml,溶解為65 mg/m2，緩慢注射，1周期20天，連續治療6～8周期后接受手術治療[8]。

2.檢測方法：(1)DNA序列檢測方法。試管中提前加入血液抗凝劑(貨號：CD-02843-ML，武漢純度生物科技有限公司)，早晨抽取受試者空腹狀態下靜脈血10 ml，用DNA提取檢測試劑盒(貨號：FG0310-T，江蘇凡知醫療科技有限公司)提取，嚴格按照試劑盒使用說明操作，同時設計擴增rs4778137的引物，進行PCR擴增。PCR擴增方法：95 ℃預變性15分鐘，95 ℃變性10分鐘,55 ℃退火30 s，75 ℃延伸5分鐘。最后對擴增PCR擴增產物進行基因型檢測。(2)生化指標檢測方法。使用全自動生化分析儀(型號：Selectra E Chemistry Analyzer，上海玉研科學儀器有限公司)檢測手術前病人甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TCH)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)、空腹血糖(fasting blood-glucose，FBG)、尿素氮(blood urea nitrogen，BuN)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDLP)、尿酸(uric acid，UA)、白蛋白(albumin，ALB)水平。

三、統計學方法

結果

1.病人病理資料、生化指標與pCR相關性比較：術后32例達pCR，pCR和非pCR病人年齡、N分期、月經狀態比較，差異無統計學意義(P>0.05)。病程在2年以上的病人，pCR病人比率(26.3%)小于病程低于2年的病人比率(67.6%)，差異有統計學意義(P<0.05)。病人T1和T2期pCR病人比率(53.3%、56.5%)高于T3和T4期(36.4%、25.0%)，差異有統計學意義(P<0.05)。無淋巴結轉移病人，pCR病人比率(60.0%)高于淋巴轉移病人(18.9%)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 TNBC病人基本資料與pCR相關性(例,%)

術后pCR和非pCR病人TG、TCH、TBIL、FBG、BUN、HDLP比較，差異無統計學意義(P>0.05)，UA和ALB比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 生化指標與pCR相關性

2.OCA2 rs4778137多態性和pCR的相關性：rs4778137位點上CC、GC、GG基因型頻率分別為20.8%、29.2%、50.0%，pCR病人GG基因型頻(52.8%)高于非pCR(47.2%)，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 OCA2 rs4778137多態性和pCR相關性(例，%)

3.TNBC病人pCR率影響因素的Logistic回歸分析：TNBC病人病程不是pCR率的獨立影響因素(P>0.05)。而T分期、淋巴轉移、rs4778137多態性、UA、ALB是TNBC病人pCR率的獨立影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 不同因素對TNBC病人pCR率的Logistic回歸分析

討論

隨著生活節奏加快，乳腺癌已成為我國較常見的惡性腫瘤疾病之一，且每年增速達4%[9]。TNBC是乳腺癌的一種，其發病機制尚不明確，可能與家族史、生殖因素、性激素、營養與飲食、環境、乳腺癌相關基因等有關[10-11]。

基因核苷酸多態性可致使腫瘤產生多種生物學表現[10-12]?；騉CA2 是人體內一種包含內含子總長度約為345kb的基因片段，在惡性腫瘤中發揮重要作用。有研究表明，基因OCA2的遺傳和變異能影響乳腺癌的發生及病情進展[13]，對于乳腺癌的預后有重大意義。此外，基因OCA2核苷酸多態性還與皮膚癌以及器官移植后皮膚鱗狀細胞癌發生有關，OCA2基因rs1800407位點多態性亦能造成皮膚黑色素瘤[13]。早在1982年，乳腺癌開始新輔助化療，目前新輔助化療已經被廣泛應用到乳腺癌的治療中。

本研究中，pCR率為44.4%，稍高于既往研究[13]，可能與病例數少有關，郭俊強等[13]研究證實，TNBC新輔助化療的pCR率高于其他類型乳腺癌，為35.7%。本研究顯示，pCR和非pCR病人年齡、N分期、月經狀態差異不顯著，說明TNBC病人年齡、N分期、月經狀態對pCR率影響不大。TNBC病人病程越長pCR率越低，可能是因為患病時間較長，腫瘤在體內轉移較多，導致機體防御系統抵抗能力降低，使pCR率較差，說明及時發現并及時治療意義重大。TNBC病人T1和T2期pCR病人比率比T3和T4期高(P<0.05)，并隨著分期推進pCR病人比率不斷降低，說明T分期可能通過一定機制影響機體pCR病人比率，能通過T分期間接反映病人發病程度。TNBC病人pCR病人比率與淋巴結轉移有關[14]，淋巴結轉移說明癌癥處于擴散狀態，侵襲機體防御系統，導致人體免疫能力降低，進而pCR病人比率下降。此外，術后pCR和非pCR病人TG、TCH、TBIL、FBG、BUN、HDLP水平差異不顯著(P>0.05)，而UA和ALB有明顯差異(P<0.05)。TNBC會引起機體免疫系統作用，進而影響機體內炎癥指標及生化指標，本結果顯示結果不一致，可能是樣本量較少或受試者生活環境及飲食不同導致的。本研究結果顯示，pCR病人GG基因型頻顯著高于非pCR，病人OCA2基因rs4778137多態性影響TNBC病人pCR率(P<0.05)，說明OCA2基因rs4778137遺傳和變異可能參與調控TNBC病人緩解過程。Logistic回歸分析顯示，TNBC病人病程不是pCR率的獨立影響因素(P>0.05)，而T分期、淋巴結轉移、rs4778137多態性、UA、ALB是TNBC病人pCR率的危險因素，應該從以上幾方面對病人進行保護和預防。

綜上所述，rs4778137多態性和TNBC病人新輔助化療pCR率有關，GG基因型病人有較高的pCR率。病程在2年以上、處于T3和T4期、存在淋巴結轉移病人的pCR率較低。T分期、淋巴轉移、OCA2基因rs4778137多態性是TNBC病人pCR率的獨立影響因素。