固相萃取高效液相色譜法檢測芝麻油中的苯并[a]芘

周宏霞，王 妙，臧汝瑛，王秀麗，周 青

（威海市食品藥品檢驗檢測研究院，山東威海264200）

芝麻油是我國傳統特色的食用油品種之一，高溫炒籽過程得到香油獨特的色香味，同時也很容易導致強致癌物苯并芘含量超標[1]。苯并芘（Benzopyrene）是一種含苯環的稠環芳烴。按苯環的稠合位置不同，苯并芘分為2種，苯并[a]芘（1,2-苯并芘）和苯并[e]芘（4,5-苯并芘），常見的是苯并[a]芘。常溫下狀態為黃色粉末，熔點為179℃，難溶于水，微溶于甲醇、乙醇，易溶于苯、甲苯、二甲苯、丙酮等有機溶劑，是一種常見的高活性間接致癌物和突變原，是世界上公認的三大強致癌物之一[2-3]。GB 2762—2017《食品安全國家標準 食品中污染物限量》規定了植物油中苯并[a]芘的限量為10 μg/kg[4]。目前，食品中苯并芘檢測的前處理方法有中性氧化鋁柱法、分子印跡法和凝膠色譜法等[5]。芝麻香油生產過中的炒籽溫度通常要達到160℃以上，甚至局部溫度能到達200℃[6]，高溫炒制條件為芝麻油中苯并芘含量的升高埋下了隱患[7]。對國內外食用油中苯并芘含量進行的調查研究表明，芝麻香油中苯并芘含量較其他油脂要高[8]。高溫炒籽給芝麻香油品質帶來的另一個問題是色澤過深[9]。因此，對芝麻油中的苯并芘進行檢測顯得尤為重要。但是，由于芝麻香油中的顏色比較深，含有的干擾雜質比一般食用油要多，采用一般植物油的前處理方法，效果不太理想。王廣會等人[10]采用氧化鋁層析柱對芝麻油進行凈化，該方法需用有機試劑多、操作比較復雜。試驗采用硅膠柱串聯分子印跡柱的方法對芝麻油進行前處理凈化，經過高效液相色譜熒光檢測器檢測。該方法具有能去除雜質干擾、有機試劑用量少、穩定性好、回收率高等特點。目前，未見有硅膠柱串聯分子印跡柱應用于芝麻油中苯并芘的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料與試劑

芝麻油，市售；正己烷、二氯甲烷、乙腈（色譜純，Thermo），苯并[a]芘標準品（100 mg/L），上海安譜公司提供；試驗用水為經超純水儀處理的一級水。

1.1.2 儀器與設備

Agilent1260型高效液相色譜儀（配熒光檢測器），美國安捷倫公司產品；Cleanert BAP-3（混合分子印跡材料，500 mg/6 mL）；Cleanert Silica柱（500 mg/6 mL）；固相萃取裝置，美國萊伯泰科公司；超純水儀，美國密理博公司產品。

1.2 試驗方法

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱為Venusil XBP C18柱（150 mm×4.6 mm×5 μm）；流動相為乙腈-水（體積比88∶12），流速1 mL/min；進樣量20 μL，柱溫35℃，熒光檢測器，激發波長384 nm；發射波長406 nm。

1.2.2 標準貯備液及標準溶液的配制

準確移取1 mL的苯并[a]芘標準溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度得到10 μg/mL的標準儲備液，用乙腈逐級稀釋，得到0.2，0.5，1.0，5.0，10.0，20.0 μg/L標準工作液。

1.2.3 樣品前處理

稱取0.5 g芝麻油樣品于玻璃管中，加5 mL正己烷渦旋振蕩溶解，作為凈化液。將Cleanert Silica柱與Cleanert BAP-3串聯，先用5 mL二氯甲烷，再用5 mL正己烷活化柱子。柱子活化后，加入凈化液過柱，用3 mL正己烷潤洗樣品瓶，上樣到凈化柱上。待樣液流出，先用6 mL正己烷淋洗串聯柱，后棄去硅膠柱，再用6 mL正己烷淋洗Cleanert BAP-3柱，棄去流出液。用8 mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液到試管中。凈化液在40℃下氮氣吹干，用1 mL乙腈溶解定容，渦旋，過0.22 μm有機濾膜，待上機。

2 結果與分析

2.1 提取液的選擇

苯并[a]芘脂溶性好，溶解在芝麻油中。參照GB 5009.27—2016[11]的方法選擇正己烷作為提取的溶劑。正己烷對于油脂具有很好的溶解性，目標物苯并[a]芘也能溶解在里面，有利于后期的純化。

2.2 提取柱的選擇

芝麻油比一般的油脂顏色深、干擾雜質多。因此，單用分子印跡柱處理后，樣品的基線比較高，檢測結果受到干擾。采用硅膠柱和分子印跡柱串聯處理后，硅膠柱能去除芝麻油中的色素等雜質，待測樣品的基線降低，雜質干擾消除。

2.3 色譜圖

在1.2.1色譜條件下得到標準溶液的圖譜。苯并[a]芘標準品色譜圖見圖1。

2.4 校準曲線和檢出限

校準曲線見圖2。

圖2 校準曲線

在1.2.1的儀器條件下，按照1.2.2配制的標準序列上機檢測。以峰面積為縱坐標、質量濃度為橫坐標繪制回歸曲線，得線性回歸方程Y=4.177 975 2X+0.080 873，相關系數（R）為0.999 9，表明苯并芘在0.2~20.0 μg/L質量濃度內與色譜峰面積線性關系良好。以信噪比（S/N）的3倍計算檢出限，在取樣為0.5 g時，苯并芘的檢出限為0.4 μg/kg。

2.5 精密度和加標回收試驗

取空白的芝麻油樣品進行加標試驗，加標質量濃度為0.4，5.0，10 μg/kg 3個水平，按照1.2.3樣品前處理方法對加標樣品進行前處理，按照1.2.1色譜條件進行測定，每個加標質量濃度水平平行測定6次。

加標回收試驗結果見表1。

表1 加標回收試驗結果

3 結論

建立了硅膠柱串聯分子印跡柱凈化芝麻油，凈化效果好、操作簡單、回收率高。結果表明，苯并[a]芘在0.2~20.0 μg/L質量濃度內線性關系好。相關

系數R2=0.999 9；在0.4~10.0 μg/kg加標水平時，回收率為91.3%~98.1%，相對標準偏差為1.37%~3.96%（n=6），方法的檢出限為0.4 μg/kg。該方法適用于芝麻油中苯并[a]芘的檢測。